無創(chuàng)DNA檢測在單項超聲軟指標(biāo)異常中的應(yīng)用價值

孔祥慧

山東省菏澤市婦幼保健計劃生育服務(wù)中心產(chǎn)前診斷中心，山東菏澤 274000

隨著我國“二孩”政策的開放，新生兒出生率明顯上升，也促使新生兒出生缺陷率呈升高趨勢。經(jīng)研究統(tǒng)計，我國是胎兒出生缺陷的主要國家，每年占全球的五分之一，已逐漸引起學(xué)者重視和關(guān)注[1]。目前胎兒出生缺陷最常見的為染色體異常，包括X、Y 染色體數(shù)目異常如帕陶氏綜合征（13-三體綜合征）、愛德華綜合征（18-三體綜合征）、唐氏綜合征（21-三體綜合征）等，為了提高出生質(zhì)量，降低胎兒出生缺陷，需注重產(chǎn)前診斷工作[2]。目前診斷胎兒染色體異常的金標(biāo)準(zhǔn)為羊水染色體核型分析，雖然診斷正確率較高，但屬于創(chuàng)傷性操作，且可增加宮內(nèi)感染、羊水滲漏、流產(chǎn)等風(fēng)險，且不適用于羊水穿刺禁忌人群。而超聲不具有創(chuàng)傷性，對胎兒染色體異常診斷具有重要價值，但超聲檢查容易出現(xiàn)單項軟指標(biāo)陽性，對于此類人群是否進(jìn)行侵入性手段分析存在較大爭議[3]。為了進(jìn)一步探索無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前篩查的優(yōu)勢，本文選取于菏澤市婦幼保健計劃生育服務(wù)中心行無創(chuàng)DNA 檢測的600 例單項超聲軟指標(biāo)陽性孕婦作為研究對象，探討無創(chuàng)DNA檢測在單項超聲軟指標(biāo)異常中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月12日～2020年4月20日于菏澤市婦幼保健計劃生育服務(wù)中心行無創(chuàng)DNA 檢測的600 例單項超聲軟指標(biāo)陽性孕婦作為研究對象，孕婦均為已婚女性，年齡20～32 歲，平均 （26.98±4.14）歲；孕齡13～20 周，平均（17.85±2.79）周；孕次1～3 次，平均（2.38±0.17）次；產(chǎn)次0～2 次，平均（1.19±0.10）次。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦孕齡超過12 周，且均為單項超聲軟指標(biāo)呈陽性；②孕婦各項資料齊全；③孕婦自愿接受無創(chuàng)DNA 檢測，且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①習(xí)慣性流產(chǎn)者；②不配合檢查者；③妊娠期間合并高血壓、糖尿病等并發(fā)癥者；④不適用和/或慎用羊水穿刺者。

1.2 方法

使用VOLUSON E8 型彩色多普勒超聲診斷儀（GE 公司），檢查前超聲探頭頻率調(diào)整為3.5 MHz，常規(guī)掃查實質(zhì)性臟器，如頭顱、顏面、脊柱、胸腹臟器，并測量頭圍、雙頂徑、腹圍、股骨、胎心率、羊水深度、胎心等。超聲軟指標(biāo)項目：①股骨短：股骨長徑＜正常孕齡兩個標(biāo)準(zhǔn)差；②輕度腎盂分離：腎盂前后最大徑明顯增寬，內(nèi)部無回聲；③側(cè)腦室擴(kuò)張：單側(cè)或雙側(cè)腦室寬度為10～15 mm；④心內(nèi)強(qiáng)回聲：心室內(nèi)存在強(qiáng)回聲光點(diǎn)；⑤脈絡(luò)膜囊腫：脈絡(luò)膜回聲中顯示圓形或橢圓形囊性結(jié)構(gòu)區(qū)；⑥單臍動脈：超聲顯示缺少一條臍動脈；⑦腸管回聲增強(qiáng)：超聲強(qiáng)回聲，強(qiáng)度與骨組織強(qiáng)度相當(dāng)；⑧鼻骨發(fā)育缺失或不良：超聲正中矢狀切面顯示鼻骨強(qiáng)回聲；⑨頸項透明層（NT）增厚：孕齡11～13+6周，NT＞第95 百分位數(shù)時表明NT 增厚。

無創(chuàng)DNA 檢測：采集10 mL 孕婦肘靜脈血，放于抗凝管內(nèi)充分搖勻，分離血漿，并提取DNA，在鑒定DNA 完整性和純度時使用紫外分光光度法，并在DNA 測序時使用高通量基因檢測技術(shù)。三體高風(fēng)險診斷標(biāo)準(zhǔn)：Z=（待測染色體的比例-總體人群的比率）/對照組待測染色體的方差。單體高危：Z 值≤-3；三體高危：Z 值≥3。

羊水染色體核型分析：在超聲引導(dǎo)下進(jìn)行腹壁穿刺子宮直至羊膜，并抽取20 mL 鹽水，離心后，將沉淀物加入羊水培養(yǎng)瓶內(nèi)，放于5%二氧化碳培養(yǎng)箱（37℃）內(nèi)培養(yǎng)8～12 d，可選擇性更換培養(yǎng)液，觀察羊水細(xì)胞生長情況，加入秋水仙素，進(jìn)行G 顯帶、制片、固定、37℃低滲、染色處理，分析染色體核型。在采集分裂相時使用徠卡GSL-12 掃描系統(tǒng)，并在數(shù)據(jù)分析時使用GYTO VISION 軟件，描述核型時按照ISCN 2016 進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

以引產(chǎn)或活產(chǎn)檢查結(jié)果為確診金標(biāo)準(zhǔn)，分析無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前檢測技術(shù)在篩查胎兒染色體異常中的診斷效能及高風(fēng)險孕婦妊娠結(jié)局情況。敏感度：即真陽性率，越大越好，敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）；特異度： 即真陰性率，特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）；誤診率：即假陽性率，誤診率=假陽性/（假陽性+真陰性）；漏診率：即假陰性率，漏診率=假陰性/（真陽性+假陰性）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 無創(chuàng)DNA 檢測情況

600 例孕婦，經(jīng)無創(chuàng)DNA 檢測發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險胎兒12 例，經(jīng)過羊水染色體核型分析發(fā)現(xiàn)其中確診為21-三體綜合征8 例，18-三體綜合征1 例，13-三體綜合征1 例，染色體數(shù)目異常1 例，核型無異常1 例（表1）。

表1 無創(chuàng)DNA 檢測情況

2.2 無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前檢測技術(shù)的診斷效能

無創(chuàng)DNA 檢測的敏感性為84.62%（11/13），特異度為99.83%（586/587），準(zhǔn)確性為99.50%（597/600），誤診率為0.17%（1/587），漏診率為15.38%（2/13）（表2）。

表2 無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前檢測技術(shù)的診斷效能（n）

2.3 無創(chuàng)DNA 檢測高風(fēng)險孕婦妊娠結(jié)局情況

經(jīng)確診為18-三體綜合征、13-三體綜合征、21-三體綜合征核型異常者最終接受了引產(chǎn)。1 例XYY染色體數(shù)目異常孕婦，因為高齡選擇足月分娩（表3）。

表3 無創(chuàng)DNA 檢測高風(fēng)險孕婦妊娠結(jié)局情況

3 討論

據(jù)研究統(tǒng)計，染色體異常胎兒占出生人口的0.2%，具有病發(fā)率高、病殘率高、難治愈等特點(diǎn)，近年來已得到學(xué)者的廣泛重視[4～6]。目前診斷、發(fā)現(xiàn)胎兒異常的金標(biāo)準(zhǔn)為羊水穿刺、絨毛活檢等侵入性檢查，雖然診斷正確率較高，但侵入性檢查屬于一項有創(chuàng)性操作，容易導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)感染、流產(chǎn)、出血等跡象，嚴(yán)重時可引起胎兒畸形，從而限制此類技術(shù)的運(yùn)用[7-9]。

超聲是目前篩查胎兒異常的首選方式，具有安全性高、無創(chuàng)、簡便快捷等優(yōu)勢，在產(chǎn)前檢查中的運(yùn)用越來越廣泛，常規(guī)情況下，孕婦妊娠后11 周，便可清晰觀察到胎兒全身器官結(jié)構(gòu)，隨著彩超的推廣，其更能夠明確顯示側(cè)腦室擴(kuò)張、小耳畸形、脈絡(luò)叢囊腫等微小畸形，雖可作為產(chǎn)前常用診斷技術(shù)，但仍存在較高的假陽性率[10-12]。而無創(chuàng)DNA 檢查是近年來隨著醫(yī)療技術(shù)的完善開始廣泛流行的新型檢測方式，主要是通過檢測孕婦外周血中胎兒游離DNA，通過高通量測序游離DNA 片段，能夠分析生物信息，得到胎兒準(zhǔn)確的染色體異常風(fēng)險系數(shù)[13-14]。本研究結(jié)果顯示，超聲軟指標(biāo)呈現(xiàn)為陽性者，經(jīng)過無創(chuàng)DNA 檢查，可更好區(qū)別高風(fēng)險和低風(fēng)險，且在胎兒核型分型中具有重要意義和作用。從妊娠角度分析，通過進(jìn)行無創(chuàng)DNA 檢測，能夠盡早發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常情況，并為分娩方案提供科學(xué)依據(jù)，提高人口出生質(zhì)量[15]。另外根據(jù)引產(chǎn)或活產(chǎn)檢查結(jié)果，無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前檢測技術(shù)對胎兒染色體異常具有較高的診斷效能，能夠減少漏診、誤診情況的發(fā)生。

綜上所述，無創(chuàng)DNA 檢查可避免侵入性檢查，提高胎兒篩查準(zhǔn)確率，廣泛用于產(chǎn)前篩查中，能夠及早發(fā)現(xiàn)胎兒異常，降低流產(chǎn)風(fēng)險，值得在臨床推廣運(yùn)用。