沙門菌臨床檢驗中的全面生化反應(yīng)和血清學(xué)檢驗的應(yīng)用價值及準確性分析＊

文/李惠芳，王紅梅

沙門菌又名沙門氏桿菌，是一種對外界環(huán)境有著較強適應(yīng)性的細菌，其通常在人和動物的腸道中寄生，若是經(jīng)食物進入人體，很快（一般在4~24分鐘左右）便會引起惡心嘔吐、腹痛腹瀉等癥狀，隨著病情的發(fā)展，患者還會出現(xiàn)發(fā)熱、脫水、休克等表現(xiàn)，臨床若不及時治療，甚至可能危及患者生命[1]。為了控制患者的病情，減輕沙門菌帶來的影響，臨床需要加強對沙門菌感染的診斷。常規(guī)檢驗過于簡單，對沙門菌的檢驗缺乏足夠的特異性、敏感性和準確性，相比之下，特異性、敏感性和準確性更高的全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗在沙門菌感染的診治上具有更高的價值[2]。本文選擇2020年3月~2021年3月期間收治的70例腸熱癥患者，試觀察常規(guī)檢驗、全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗在沙門菌臨床檢驗中的應(yīng)用效果。

1 方法及資料

1.1 研究對象

選擇2020年3月~2021年3月期間收治的70例腸熱癥患者，以便利抽樣法分組，對照組35例，研究組35例。研究組：男24例，女11例；年齡29歲~69歲，平均（49.17±11.27）歲。對照組：男23例，女12例；年齡28歲~70歲，平均（49.21±11.19）歲。將平均年齡和男女性例數(shù)等納入組間對比，P＞0.05，兩組之間可采取統(tǒng)計學(xué)對比。

入選標準：（1）符合腸熱癥的診斷標準：①有惡心嘔吐、水樣腹瀉等癥狀表現(xiàn)，發(fā)作頻率為每日3~5次；②局灶性病變的白細胞計數(shù)可達（20~30）*109/L；③排泄物中可見黏液與血液，顯微鏡下可見白細胞計數(shù)明顯增加[3]。（2）臨床資料完整；（3）近期未接受過治療；（4）均為疑似沙門菌所致感染；（5）患者對研究內(nèi)容知情，且簽署自愿協(xié)議。

1.2 方法

對照組給予常規(guī)檢驗，檢測試劑選擇超氧化物歧化酶、過氧化氫酶2種。研究組給予全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗，具體操作流程為：第一步，準備好檢驗的設(shè)備（天平、滅菌平皿、溫箱、顯微鏡及均質(zhì)器等）和材料（由HE瓊脂和亞硫酸鉍瓊脂等瓊脂制備成的培養(yǎng)基、由鎂C12孔雀綠增菌液和四硫酸鈉增菌液等增菌液制備成的試劑、接種棒、酒精燈、玻璃棒、鎳絡(luò)絲等）。第二步，根據(jù)患者的病情需要，為患者采集血液、骨髓液、尿液、嘔吐物、糞便等作為標本，其中血液的采集時間應(yīng)為患者入院1周后，尿液和糞便的采集時間應(yīng)為患者入院2周后，骨髓液的采集時間應(yīng)為患者入院3周后，若患者出于急性發(fā)作期，為避免用藥影響檢驗結(jié)果的準確性，應(yīng)在患者用藥前采集尿液和糞便，且尿液需經(jīng)每分鐘3000轉(zhuǎn)的速率進行離心處理，待沉淀后作為標本接受檢驗。若患者疑似為沙門菌導(dǎo)致的食物中毒，則應(yīng)采集其進食的食物來進行檢驗。第三步，進行鑒定，沙門氏菌大多屬于A~F群，可使用A~F多價O血清進行凝集，待凝集工作全部完畢后進行血清學(xué)檢驗。凝集的過程中，先以A~F多價O血清凝集，并定群血清因子（即定群6個O群因子血清），再給予H因子血清相凝集，使第一相和第二相凝集，并將凝集結(jié)果作為判定血清型的標準。在全面生化反應(yīng)實驗中，應(yīng)將可疑群落先挑出來，接種到三糖鐵瓊脂中，并觀察瓊脂中發(fā)生的反應(yīng)。若瓊脂出現(xiàn)斜面產(chǎn)酸，且同時存在硫化氫陰性菌株，則將其排除。需要注意的是，接種到三糖鐵瓊脂中時，應(yīng)選取蛋白陳水，并將其接種到尿素瓊脂上，輔以拉氨酸脫羧酶等物質(zhì)進行細菌培養(yǎng)，使周圍溫度在35℃～37℃之間，給予至少24小時的培養(yǎng)。

1.3 觀察指標

對比研究組（全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗）和對照組（常規(guī)檢驗）的陽性檢出率。全面生化反應(yīng)的實驗結(jié)果判定標準為：（1）陽性：液面試劑呈紅色；（2）陰性：液面試劑呈黃色[4]。血清學(xué)檢驗的結(jié)果判定標準為：（1）陽性：副傷寒沙門菌H凝集效價和傷寒沙門菌O凝集效價均不低于1:80，而H凝集效價不低于1:160；（2）陰性：未達到陽性標準[5]。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

數(shù)據(jù)資料的處理均使用軟件SPSS-19.0，數(shù)據(jù)類型分為計數(shù)資料、計量資料兩類，表現(xiàn)形式分別為n(%)和（±s），檢驗分別使用卡方值（x2）和t值。若P值在統(tǒng)計學(xué)計算后為＜0.05，則組間對比有顯著性差異。

2 結(jié)果

研究組的陽性檢出率為97.14%，高于對照組71.43%的陽性檢出率，統(tǒng)計學(xué)對比有明顯差異（P＜0.05）。見表1。

表1 檢驗結(jié)果的組間對比（n，%）

3 討論

沙門菌是非常具有代表性的腸道致病菌，其在抗原的構(gòu)造與生化反應(yīng)上與革蘭氏陰性桿菌有著很高的相似度，是導(dǎo)致食物中毒的主要原因，人體在攝入存在沙門菌的食物后將會在短時間內(nèi)出現(xiàn)一系列明顯的癥狀表現(xiàn)，患者輕則嘔吐、腹瀉，重則脫水、休克，面臨生命危險[6]。但是，以上癥狀并非是食物中毒所特有的表現(xiàn)，且導(dǎo)致食物中毒的原因并非只有沙門菌感染，不同病因意味著治療方案存在很大的差異，故臨床需要明確患者的發(fā)病原因，而要實現(xiàn)對沙門菌感染的準確診斷，則需要為其采取科學(xué)的檢驗方法。沙門菌有多種類型，其中與人體疾病關(guān)系最為密切的類型是傷寒沙門菌，其余類型的沙門菌多與動物經(jīng)有關(guān)，原因是傷寒沙門菌的生存環(huán)境溫度在35~37℃左右，與人體溫度相近，因此在攝入含有傷寒沙門菌的食物后非常容易發(fā)嚴重食物中毒，故臨床檢驗的沙門菌主要指傷寒沙門菌[7]。傷寒沙門菌所引起的疾病主要是腸熱癥，本文以腸熱癥患者作為研究對象，為其進行了沙門菌檢驗。而從結(jié)果可知，采取全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗的研究組其沙門菌陽性檢出率（97.14%）高于采取常規(guī)檢驗的對照組（71.43%），可見全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗對沙門菌有非常高的診斷準確性。而全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗之所以有如此顯著的應(yīng)用效果，原因主要是：沙門菌雖然是兼性厭氧菌，但也可在有氧和缺氧的環(huán)境中生存，當其侵入到腸道后會在其中大量繁殖，于缺氧或有氧狀態(tài)下釋放出大量的毒素，誘導(dǎo)外膜蛋白、過氧化氫酶與超氧化物歧化酶等抗氧化酶過量表達（缺氧狀態(tài)下傷寒沙門菌的毒性要高于有氧狀態(tài)下），臨床可以通過常規(guī)檢驗來測定超氧化物歧化酶、過氧化氫酶含量，進而判斷患者是否發(fā)生沙門菌感染，但需要注意的是，常規(guī)檢驗雖能檢驗一定比例的沙門菌，但該方法易受到外界因素的影響，因此準確性較為一般[8]。而全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗中的全面生化反應(yīng)試驗主要是培養(yǎng)可疑的菌落再觀察液面顏色，血清學(xué)檢驗則是凝集可疑菌落和抗體并觀察是否有顆粒沉淀，二者聯(lián)合不僅可以減少外界因素帶來的干擾，還可以顯著提高對沙門菌感染的陽性檢出率，因此在沙門菌臨床檢驗中有比常規(guī)檢驗顯著得多的診斷準確性；并且，全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗操作簡單、經(jīng)濟性高，這一點也提高了該方法在沙門菌檢驗中的應(yīng)用價值[9]。將本文中采取全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗的研究組97.14%的陽性檢出率與姜少霞[10]研究報告《全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗在沙門菌臨床檢驗中的作用分析》中同樣采取全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗的研究組91.67%的陽性率進行對比，二者較為相近，可見本研究結(jié)果結(jié)論真實可靠。

最后，沙門菌檢驗需要注意如下幾點：（1）生化反應(yīng)主要檢驗純培養(yǎng)物，若血清學(xué)檢驗結(jié)果呈陽性但生化試驗結(jié)果為陰性，則要純化接種物再進行檢驗；（2）無論采取哪種檢驗方法，沙門菌的分離菌與陽性對照菌均有可能對周圍環(huán)境造成一定污染，在進行菌株分離、增菌和血清凝集的過程中，必須要做好器具的清洗和消毒工作、對檢驗人員的保護工作，以免病菌擴散，引發(fā)感染。

4 結(jié)語

相較于常規(guī)檢驗，在沙門菌臨床檢驗中的全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗具有更高的診斷準確性，其臨床應(yīng)用價值更高，故應(yīng)該被更積極地推廣開來。