沙門菌臨床檢驗(yàn)中的全面生化反應(yīng)和血清學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值及準(zhǔn)確性分析＊

文/李惠芳，王紅梅

沙門菌又名沙門氏桿菌，是一種對(duì)外界環(huán)境有著較強(qiáng)適應(yīng)性的細(xì)菌，其通常在人和動(dòng)物的腸道中寄生，若是經(jīng)食物進(jìn)入人體，很快（一般在4~24分鐘左右）便會(huì)引起惡心嘔吐、腹痛腹瀉等癥狀，隨著病情的發(fā)展，患者還會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、脫水、休克等表現(xiàn)，臨床若不及時(shí)治療，甚至可能危及患者生命[1]。為了控制患者的病情，減輕沙門菌帶來(lái)的影響，臨床需要加強(qiáng)對(duì)沙門菌感染的診斷。常規(guī)檢驗(yàn)過于簡(jiǎn)單，對(duì)沙門菌的檢驗(yàn)缺乏足夠的特異性、敏感性和準(zhǔn)確性，相比之下，特異性、敏感性和準(zhǔn)確性更高的全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)在沙門菌感染的診治上具有更高的價(jià)值[2]。本文選擇2020年3月~2021年3月期間收治的70例腸熱癥患者，試觀察常規(guī)檢驗(yàn)、全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)在沙門菌臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。

1 方法及資料

1.1 研究對(duì)象

選擇2020年3月~2021年3月期間收治的70例腸熱癥患者，以便利抽樣法分組，對(duì)照組35例，研究組35例。研究組：男24例，女11例；年齡29歲~69歲，平均（49.17±11.27）歲。對(duì)照組：男23例，女12例；年齡28歲~70歲，平均（49.21±11.19）歲。將平均年齡和男女性例數(shù)等納入組間對(duì)比，P＞0.05，兩組之間可采取統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比。

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合腸熱癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①有惡心嘔吐、水樣腹瀉等癥狀表現(xiàn)，發(fā)作頻率為每日3~5次；②局灶性病變的白細(xì)胞計(jì)數(shù)可達(dá)（20~30）*109/L；③排泄物中可見黏液與血液，顯微鏡下可見白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加[3]。（2）臨床資料完整；（3）近期未接受過治療；（4）均為疑似沙門菌所致感染；（5）患者對(duì)研究?jī)?nèi)容知情，且簽署自愿協(xié)議。

1.2 方法

對(duì)照組給予常規(guī)檢驗(yàn)，檢測(cè)試劑選擇超氧化物歧化酶、過氧化氫酶2種。研究組給予全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)，具體操作流程為：第一步，準(zhǔn)備好檢驗(yàn)的設(shè)備（天平、滅菌平皿、溫箱、顯微鏡及均質(zhì)器等）和材料（由HE瓊脂和亞硫酸鉍瓊脂等瓊脂制備成的培養(yǎng)基、由鎂C12孔雀綠增菌液和四硫酸鈉增菌液等增菌液制備成的試劑、接種棒、酒精燈、玻璃棒、鎳絡(luò)絲等）。第二步，根據(jù)患者的病情需要，為患者采集血液、骨髓液、尿液、嘔吐物、糞便等作為標(biāo)本，其中血液的采集時(shí)間應(yīng)為患者入院1周后，尿液和糞便的采集時(shí)間應(yīng)為患者入院2周后，骨髓液的采集時(shí)間應(yīng)為患者入院3周后，若患者出于急性發(fā)作期，為避免用藥影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)在患者用藥前采集尿液和糞便，且尿液需經(jīng)每分鐘3000轉(zhuǎn)的速率進(jìn)行離心處理，待沉淀后作為標(biāo)本接受檢驗(yàn)。若患者疑似為沙門菌導(dǎo)致的食物中毒，則應(yīng)采集其進(jìn)食的食物來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)。第三步，進(jìn)行鑒定，沙門氏菌大多屬于A~F群，可使用A~F多價(jià)O血清進(jìn)行凝集，待凝集工作全部完畢后進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)。凝集的過程中，先以A~F多價(jià)O血清凝集，并定群血清因子（即定群6個(gè)O群因子血清），再給予H因子血清相凝集，使第一相和第二相凝集，并將凝集結(jié)果作為判定血清型的標(biāo)準(zhǔn)。在全面生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)將可疑群落先挑出來(lái)，接種到三糖鐵瓊脂中，并觀察瓊脂中發(fā)生的反應(yīng)。若瓊脂出現(xiàn)斜面產(chǎn)酸，且同時(shí)存在硫化氫陰性菌株，則將其排除。需要注意的是，接種到三糖鐵瓊脂中時(shí)，應(yīng)選取蛋白陳水，并將其接種到尿素瓊脂上，輔以拉氨酸脫羧酶等物質(zhì)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，使周圍溫度在35℃～37℃之間，給予至少24小時(shí)的培養(yǎng)。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比研究組（全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)）和對(duì)照組（常規(guī)檢驗(yàn)）的陽(yáng)性檢出率。全面生化反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為：（1）陽(yáng)性：液面試劑呈紅色；（2）陰性：液面試劑呈黃色[4]。血清學(xué)檢驗(yàn)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為：（1）陽(yáng)性：副傷寒沙門菌H凝集效價(jià)和傷寒沙門菌O凝集效價(jià)均不低于1:80，而H凝集效價(jià)不低于1:160；（2）陰性：未達(dá)到陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

數(shù)據(jù)資料的處理均使用軟件SPSS-19.0，數(shù)據(jù)類型分為計(jì)數(shù)資料、計(jì)量資料兩類，表現(xiàn)形式分別為n(%)和（±s），檢驗(yàn)分別使用卡方值（x2）和t值。若P值在統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算后為＜0.05，則組間對(duì)比有顯著性差異。

2 結(jié)果

研究組的陽(yáng)性檢出率為97.14%，高于對(duì)照組71.43%的陽(yáng)性檢出率，統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比有明顯差異（P＜0.05）。見表1。

表1 檢驗(yàn)結(jié)果的組間對(duì)比（n，%）

3 討論

沙門菌是非常具有代表性的腸道致病菌，其在抗原的構(gòu)造與生化反應(yīng)上與革蘭氏陰性桿菌有著很高的相似度，是導(dǎo)致食物中毒的主要原因，人體在攝入存在沙門菌的食物后將會(huì)在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)一系列明顯的癥狀表現(xiàn)，患者輕則嘔吐、腹瀉，重則脫水、休克，面臨生命危險(xiǎn)[6]。但是，以上癥狀并非是食物中毒所特有的表現(xiàn)，且導(dǎo)致食物中毒的原因并非只有沙門菌感染，不同病因意味著治療方案存在很大的差異，故臨床需要明確患者的發(fā)病原因，而要實(shí)現(xiàn)對(duì)沙門菌感染的準(zhǔn)確診斷，則需要為其采取科學(xué)的檢驗(yàn)方法。沙門菌有多種類型，其中與人體疾病關(guān)系最為密切的類型是傷寒沙門菌，其余類型的沙門菌多與動(dòng)物經(jīng)有關(guān)，原因是傷寒沙門菌的生存環(huán)境溫度在35~37℃左右，與人體溫度相近，因此在攝入含有傷寒沙門菌的食物后非常容易發(fā)嚴(yán)重食物中毒，故臨床檢驗(yàn)的沙門菌主要指?jìng)抽T菌[7]。傷寒沙門菌所引起的疾病主要是腸熱癥，本文以腸熱癥患者作為研究對(duì)象，為其進(jìn)行了沙門菌檢驗(yàn)。而從結(jié)果可知，采取全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)的研究組其沙門菌陽(yáng)性檢出率（97.14%）高于采取常規(guī)檢驗(yàn)的對(duì)照組（71.43%），可見全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)對(duì)沙門菌有非常高的診斷準(zhǔn)確性。而全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)之所以有如此顯著的應(yīng)用效果，原因主要是：沙門菌雖然是兼性厭氧菌，但也可在有氧和缺氧的環(huán)境中生存，當(dāng)其侵入到腸道后會(huì)在其中大量繁殖，于缺氧或有氧狀態(tài)下釋放出大量的毒素，誘導(dǎo)外膜蛋白、過氧化氫酶與超氧化物歧化酶等抗氧化酶過量表達(dá)（缺氧狀態(tài)下傷寒沙門菌的毒性要高于有氧狀態(tài)下），臨床可以通過常規(guī)檢驗(yàn)來(lái)測(cè)定超氧化物歧化酶、過氧化氫酶含量，進(jìn)而判斷患者是否發(fā)生沙門菌感染，但需要注意的是，常規(guī)檢驗(yàn)雖能檢驗(yàn)一定比例的沙門菌，但該方法易受到外界因素的影響，因此準(zhǔn)確性較為一般[8]。而全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)中的全面生化反應(yīng)試驗(yàn)主要是培養(yǎng)可疑的菌落再觀察液面顏色，血清學(xué)檢驗(yàn)則是凝集可疑菌落和抗體并觀察是否有顆粒沉淀，二者聯(lián)合不僅可以減少外界因素帶來(lái)的干擾，還可以顯著提高對(duì)沙門菌感染的陽(yáng)性檢出率，因此在沙門菌臨床檢驗(yàn)中有比常規(guī)檢驗(yàn)顯著得多的診斷準(zhǔn)確性；并且，全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)性高，這一點(diǎn)也提高了該方法在沙門菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值[9]。將本文中采取全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗(yàn)的研究組97.14%的陽(yáng)性檢出率與姜少霞[10]研究報(bào)告《全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗(yàn)在沙門菌臨床檢驗(yàn)中的作用分析》中同樣采取全面生化反應(yīng)與血清學(xué)檢驗(yàn)的研究組91.67%的陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比，二者較為相近，可見本研究結(jié)果結(jié)論真實(shí)可靠。

最后，沙門菌檢驗(yàn)需要注意如下幾點(diǎn)：（1）生化反應(yīng)主要檢驗(yàn)純培養(yǎng)物，若血清學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性但生化試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則要純化接種物再進(jìn)行檢驗(yàn)；（2）無(wú)論采取哪種檢驗(yàn)方法，沙門菌的分離菌與陽(yáng)性對(duì)照菌均有可能對(duì)周圍環(huán)境造成一定污染，在進(jìn)行菌株分離、增菌和血清凝集的過程中，必須要做好器具的清洗和消毒工作、對(duì)檢驗(yàn)人員的保護(hù)工作，以免病菌擴(kuò)散，引發(fā)感染。

4 結(jié)語(yǔ)

相較于常規(guī)檢驗(yàn)，在沙門菌臨床檢驗(yàn)中的全面生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)具有更高的診斷準(zhǔn)確性，其臨床應(yīng)用價(jià)值更高，故應(yīng)該被更積極地推廣開來(lái)。