HPV1618型E6蛋白和PKRp-PKR在宮頸病變的表達及意義

王喜鳳

（盤錦市中心醫院婦產科，遼寧 盤錦124000）

宮頸癌是發病率較高的一種感染性疾病，該疾病的發生與高危型人乳頭瘤病毒感染密切相關。有研究顯示，隨著宮頸病變嚴重程度增加，人乳頭瘤病毒感染檢出率也隨之提高，宮頸癌患者人乳頭瘤病毒感染率接近100%[1]。致瘤病毒會突破機體抵抗病毒的防御機制，進而引起病毒的持續感染，其在宮頸病變的演進過程中具有重要作用。干擾素是機體防御的重要分子，可有效誘導雙鏈RNA激活蛋白酶R，其不僅在細胞生長、分化和凋亡等具有重要作用，在抗腫瘤、抵御病毒感染中也發揮重要的生物學效應[2]。基于此，本研究選取2018年2月至2019年10月本院收治的62例宮頸癌患者、105例宮頸上皮內瘤樣病變患者以及20例宮頸健康者作為研究對象，比較HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R在宮頸病變的表達，并探討在宮頸病變發生、發展以及預后中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年2月至2019年10月在本院就診的62例宮頸癌患者（甲組）、105例宮頸上皮內瘤樣病變患者（CINⅠ33例、CINⅡ37例、CINⅢ35例，乙組）以及20例宮頸健康者（丙組）作為研究對象。甲組年齡22～68歲，平均（51.02±12.32）歲；腺癌11例，鱗癌51例；細胞分化程度：高分化27例，中低分化35例；國際婦產科學聯盟（FIGO）分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期32例，Ⅲ期15例，Ⅳ期4例。乙組年齡24～75歲，平均（50.63±10.20）歲；CINⅠ33例，CINⅡ37例，CINⅢ35例。丙組年齡22～72歲，平均（51.63±11.54）歲。3組年齡等臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。所有研究對象均對本研究知情同意，并自愿簽署知情同意書。本研究已通過醫院倫理委員會審核批準。

納入標準：患者經術后病理診斷均確診；年齡＞18歲；意識清晰且無交流障礙；依從性高。排除標準：合并其他惡性腫瘤疾病；伴有老年癡呆等精神性疾病；妊娠及哺乳期女性。

1.2 方法 取3組宮頸組織作為活檢組織標本，將標本連續切片，厚度為4 μm，載玻片經APES防脫片膠處理后將其置于恒溫60℃烤箱中烘烤4～6 h。組織切片脫蠟處理后采取高溫高壓抗原修復，根據免疫組化染色試劑盒中的操作說明書進行操作，TBS代替一抗作為空白組對照，一抗工作液濃度為1∶100。

1.3 觀察指標 比較3組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R、磷酸化型蛋白激酶R表達情況。采用免疫組化法檢測，400倍光鏡下隨機選擇8個視野，各個視野均觀察100個細胞，統計陽性細胞并計算平均值。將陽性細胞顯色輕度以及染色體數進行分級：未見陽性細胞不計分，陽性細胞占比＜25%計1分，陽性細胞占比＜50%計2分，陽性細胞占比＜75%計3分，陽性細胞占比≥75%計4分；無著色計0分，淺黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。2項分數相加，0、1分為（－），2、3分為（＋），4、5分為（＋＋），6、7分為（＋＋＋），陽性為（＋～＋＋＋）[3]。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件進行數據分析，計數資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，相關性分析用Spearman等級相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達比較 甲組HPV1618型E6蛋白陽性表達率明顯高于乙組（CINⅠ）和丙組（P＜0.05）。甲組蛋白激酶R陽性表達率明顯高于乙組（CINⅠ、CINⅡ）和丙組（P＜0.05）。3組磷酸化型蛋白激酶R陽性表達率比較差異無統計學意義，見表1。

表1 3組HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達情況比較[n（%）]Table 1 Comparison of the expression of HPV1618 E6 protein,protein kinase R and phosphorylated protein kinase R among three groups[n(%)]

2.2 HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R以及磷酸化型蛋白激酶R表達與宮頸癌預后的關系 病情進展與臨床分期顯著相關（P＜0.05）。甲組進展與無進展患者HPV1618型E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽性表達率比較差異有統計學意義（P＜0.05），而蛋白激酶R陽性表達率比較差異無統計學意義，宮頸癌病情進展與E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽性表達率相關（P＜0.05），見表2。

3 討論

人乳頭狀瘤病毒是一種常見致瘤病毒，具有較強的宿主和組織特異性，該病毒也是宮頸病變檢出率最高的病毒之一，可突破機體的抗病毒防御機制，在宮頸病變發生和發展過程中具有重要意義[4-5]。有研究[6]顯示，高危型人乳頭狀瘤病毒持續感染是CINⅠ發展為CINⅢ甚至宮頸浸潤癌的重要因素。有數據顯示，約4.3%單一高危型人乳頭狀瘤病毒感染陽性女性可在感染的4年內發展為CINⅢ，感染10年內發展為CINⅢ發生率＞7%，但也不可忽視病毒感染陰性女性發展為CINⅢ的風險[7]。目前還未明確宮頸癌發生的分子機制，單一高危型人乳頭狀瘤病毒持續感染引發宮頸癌可能是通過干擾某些抑癌因子或致癌因子，導致細胞出現克隆永生化，進而出現癌變[8]。本研究結果顯示，E6蛋白、蛋白激酶R陽性表達率與宮頸病變級別呈正相關（P＜0.05）。宮頸癌病情進展與E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R陽性表達率相關（P＜0.05）。蛋白激酶R對機體抵抗病毒感染具有重要意義，被激活的蛋白激酶R可通過一系列級聯反應完全抑制蛋白合成。誘導感染細胞凋亡、抑制蛋白合成是蛋白激酶R抑制病毒復制的主要機制[9-10]。

甲組蛋白激酶R陽性表達率明顯高于磷酸化型蛋白激酶R（P＜0.05），說明高級別病變中存在蛋白激酶R激活障礙。E6蛋白可拮抗蛋白激酶R誘導細胞凋亡以及蛋白合成的抑制，在一定程度上減弱了凋亡基因依賴于EIF2α途徑的促凋亡作用[11]。病變細胞、病毒感染細胞因失去磷酸化型蛋白激酶R對其負調控作用，病變細胞惡性轉化，使病情由低級別CIN病變轉至高級CIN，最終發展為宮頸癌[12-13]。

綜上所述，HPV1618感染可阻礙蛋白激酶R激活，突破其防御機制，在宮頸癌疾病發展過程中意義重大，不利于疾病預后，磷酸化型蛋白激酶R可抑制疾病進展，改善預后。