索拉非尼聯合伊匹單抗對肝癌抑制作用的實驗研究

李延玲，陸蒂青，李金妞，郭杰，盧瑞杰，霍麗亞#

南陽市中心醫院1感染科，2兒科，3門診部，4感染疾病科，河南南陽473000

肝癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，在全球范圍內肝癌發病率居第六位，病死率居第四位，嚴重威脅人民的身心健康。索拉非尼（sorafenib）是首個經美國食品藥品管理局（Food and Drug Administration，FDA）批準用于臨床治療肝癌的靶向分子化療藥物，是一種多激酶抑制性藥物，能夠通過靶向調控多條信號通路抑制肝癌細胞增殖、新生血管生成及侵襲、轉移，且療效顯著，預后效果良好。伊匹單抗是最早被美國FDA批準用于臨床治療腫瘤的免疫檢查點抑制劑，可與其他化療方案聯合應用，對肝癌具有顯著的治療效果。本研究探討索拉非尼聯合伊匹單抗對肝癌細胞增殖、侵襲的影響及相關機制，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 細胞、試劑與儀器

HepG2肝癌細胞購自上海細胞庫。DMEM培養基、胎牛血清均購自美國Gibco公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒、兔抗絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MEK）、p-MEK1多克隆抗體均購自碧云天生物技術有限公司；兔抗Raf-1、細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）1、p-ERK1及甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗體均購自美國Abcam公司。Multiskan FC酶標儀購自Thermo Fisher公司；ChemiDocTM XRS凝膠成像系統購自美國伯樂公司。

1.2 CCK- 8法檢測細胞活力

將肝癌HepG2細胞接種于96孔板，培養24 h，設置索拉非尼組、伊匹單抗組及聯合組，分別加入不同濃度的索拉非尼（5、10、15、20 μmol/L）、伊匹單抗（5、10、15、20 μmol/L）及兩藥（10 μmol/L索拉非尼+10 μmol/L伊匹單抗），設置空白對照組；每組設3個復孔，培養48 h，加入10 μl的CCK-8溶液，在37℃、5% CO培養箱中培養1 h，取出培養板，于酶標儀波長450 nm處測各復孔吸光度值?！?br>