白茶對(duì)彈性蛋白酶活性的抑制研究

王麗麗, 林清霞, 宋振碩, 陳林

白茶對(duì)彈性蛋白酶活性的抑制研究

王麗麗, 林清霞, 宋振碩, 陳林*

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所, 福州 350013)

為了解白茶對(duì)彈性蛋白酶活性的作用，測(cè)定了6個(gè)白茶樣品對(duì)豬胰彈性蛋白酶(PPE)活性的抑制作用。結(jié)果表明，6個(gè)白茶樣品中CB4對(duì)PPE抑制活性最強(qiáng)，為69.73%；且隨體積分?jǐn)?shù)增加，酶抑制活性增強(qiáng)，呈劑量依賴性抑制。白茶水提液的4個(gè)萃取層中乙酸乙酯層(WEA)的抑制活性最強(qiáng)，達(dá)到82.58%。CB4的多酚總量(TPs)較高，且表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)和咖啡堿(CAF)含量最高。WEA萃取層中TPs、EGCG、ECG和ECG含量均最高，CAF含量極低。PPE活性抑制率與TPs、EGCG和CAF含量呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)均大于0.90。0.1～1.0 mg/mL EGCG和0.05～2.0 mg/mL CAF對(duì)PPE無(wú)抑制活性，0.05～2.0 mg/mL 沒(méi)食子酸(GA)對(duì)PPE活性具有促進(jìn)作用，且GA的促進(jìn)作用與其濃度呈正相關(guān)。可見(jiàn)，白茶具有潛在抗衰老活性，但對(duì)PPE起抑制作用的活性成分不是EGCG、GA和CAF。

白茶；乙酸乙酯萃取層；豬胰彈性蛋白酶；抑制活性

彈性蛋白酶具有降解膠原蛋白、彈性蛋白等多種蛋白質(zhì)的能力。皮膚組織中的彈性蛋白被彈性蛋白酶降解與皮膚衰老發(fā)生過(guò)程密切相關(guān)，因此對(duì)抗彈性蛋白酶對(duì)彈性蛋白的降解，恢復(fù)皮膚彈性是延緩皮膚衰老的重要途徑之一[1]。研究表明，很多植物提取物如蘆丁、黃芩素、高良姜素(又名3,5,7-三羥基黃酮)、虎杖苷等是天然彈性蛋白酶抑制劑[2-5]。白茶是我國(guó)六大茶類之一，富含多酚類物質(zhì)，具有清涼、退熱、降火、祛暑等功效。近年來(lái)，隨著人們對(duì)健康的追求日益高漲，白茶逐漸步入大眾視野，其獨(dú)特的風(fēng)味品質(zhì)和保健功效引起了國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者的關(guān)注和喜愛(ài)。有研究表明，白茶水提取物對(duì)彈性蛋白酶的抑制率高達(dá)89%[6]，且當(dāng)其作用于體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞時(shí)，可有效緩解H2O2誘導(dǎo)造成的細(xì)胞凋亡損傷[7], 但對(duì)于白茶提取物中可能起作用的有效成分尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究測(cè)定了6個(gè)白茶樣品水提液及其不同萃取層對(duì)豬胰彈性蛋白酶(PPE, porcine pancreatic elastase)的抑制活性，并分析其化學(xué)組成，同時(shí)測(cè)定了沒(méi)食子酸(GA, gallic acid)、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG, epigallocatechin gallate)和咖啡堿(CAF, caffeine)的酶活抑制率，推測(cè)可能起作用的有效成分，以期為白茶延緩皮膚衰老研究提供理論依據(jù), 為其在女性抗皮膚衰老化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料和方法

1.1 試劑和材料

剛果紅-彈性蛋白(德國(guó)Ruibio)與PPE (德國(guó)Ruibio, 活性≥30 U/mg)購(gòu)自合肥博美生物科技有限責(zé)任公司；0.2 mol/L硼酸鹽緩沖液(pH 8.8); 0.5 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)；GA (上海生工生物,純度>98%)、EGCG與CAF (上海阿拉丁，純度>99%)標(biāo)準(zhǔn)品；白茶樣品6份(表1)，市售，系白牡丹等級(jí)，分別記作CB1～CB6。

1.2 儀器

SKY-200B搖床(上海蘇坤)、VARIOSKAN LUX多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo scientific)、ACD-0502-U超純水機(jī)(重慶艾科浦)、PB-10酸度計(jì)(德國(guó)Sarto- rius)、MS 3 basic旋渦混勻器(德國(guó)IKA)、5418R小型臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf)、CVE-3000型離心濃縮儀(日本EYELA)。

表1 茶樣信息

1.3 白茶水提液及其萃取層制備

稱取白茶樣品4 g，加100 mL沸水，沸水浴提取15 min，濾紙抽濾制得白茶水提液，當(dāng)日使用。參照楊子銀等[8]的方法制備CB4萃取層，依次得到氯仿層(WEC)、乙酸乙酯層(WEA)、正丁醇層(WEB)和剩余水層(WER)。各萃取層濃縮至干(呈浸膏狀)，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 對(duì)PPE抑制率的測(cè)定

參照姚亞紅等[3]的方法，稍作修改。準(zhǔn)確稱取20 mg剛果紅-彈性蛋白至50 mL離心管內(nèi)，加入5 mL 37℃預(yù)熱的0.2 mol/L硼酸鹽緩沖液(pH 8.8)，充分渦旋混勻，水浴20 min，加入2 mL經(jīng)37℃預(yù)熱的用硼酸鹽緩沖液配制的PPE溶液(濃度為0.5、1、2、4、6 mg/mL)，充分渦旋混勻，在37℃、400 r/min搖床振蕩20 min，立即加入pH 6.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩沖液5 mL，渦旋混勻，取混勻液適量至2 mL離心管內(nèi), 在9 391×下離心10 min，精密吸取上清液200L至96孔板內(nèi)，在波長(zhǎng)495 nm處測(cè)定吸光度。以PPE濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取2 mg/mL PPE溶液2 mL，加入酶抑制劑(CB1～ CB6水提液或CB4各萃取層) 2 mL，充分渦旋混勻，在37℃、400 r/min搖床振蕩20 min，立即加入pH 6.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩沖液5 mL，渦旋混勻，取混勻液適量至2 mL離心管內(nèi)，在9 391×下離心10 min，精密吸取上清液200L至96孔板內(nèi)，在波長(zhǎng)495 nm處測(cè)定吸光度，同時(shí)進(jìn)行400～800 nm光譜掃描。以底物加酶溶液為空白對(duì)照組，底物加酶和茶溶液為酶抑制組，底物加茶不加酶溶液作扣茶湯背景用。每組均設(shè)2復(fù)孔。抑制率(%)=[1- (A-A′)/(0-0′)]×100%, 式中,0為加酶不加茶的吸光度，0′為僅加底物不加茶和酶的吸光度，A為僅加茶溶液的吸光度，A′為加茶不加酶的吸光度。若A′>A，則表現(xiàn)為促進(jìn)作用，促進(jìn)率(%)=[1- (A′-A)/(0-0′)]×100%。

1.5 白茶水提液與萃取層的組分分析

多酚(TPs, tea polyphenols)總量測(cè)定采用福林酚比色法[9]；黃酮類(Fs, flavones)總量測(cè)定采用三氯化鋁比色法[10]；GA、兒茶素組分[沒(méi)食子兒茶素(GC, gallocatechin)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC, epigallocate- chin)、表兒茶素(EC, epicatechin)、沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(GCG, gallocatechin gallate)、EGCG、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG, epicatechin gallate)]和生物堿[可可堿(TB, theobromine)、CAF]含量測(cè)定采用HPLC法[11]。

1.6 GA、EGCG、CAF標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)PPE活性作用

用超純水配制GA、EGCG、CAF標(biāo)準(zhǔn)品母液, 分裝，-70℃保存，現(xiàn)取現(xiàn)用，忌反復(fù)凍融。用硼酸鹽緩沖液稀釋成濃度分別為0.1、0.25、0.5、1.0、2.0 mg/mL EGCG，0.05、0.25、0.5、1.0、2.0 mg/mLGA和CAF溶液，用于測(cè)定酶抑制率或促進(jìn)率(%)。

1.7 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(=3)表示。采用origin 2018對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和作圖。采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，顯著性差異分析采用SNK法，顯著水平為0.01；雙變量分析酶活抑制率與組分含量的相關(guān)性，顯著性采用雙側(cè)檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)采用Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 白茶對(duì)PPE的抑制活性

PPE標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程=0.2212+ 0.4357，2=0.993 5。結(jié)果表明，PPE在1～ 6 mg/mL范圍內(nèi)，PPE對(duì)底物(彈性蛋白)的水解活性呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.993 5 (圖1)。

圖1 PPE對(duì)彈性蛋白的水解作用

白茶水提液 從圖2可見(jiàn)，白茶水提液用硼酸鹽緩沖液稀釋成體積分?jǐn)?shù)75%后，CB4對(duì)PPE活性的抑制率最大，達(dá)69.73%，CB1的抑制效果最差；CB2～CB6抑制PPE的水解活性與CB1的差異達(dá)極顯著水平(<0.01)。從圖3可見(jiàn)，CB4水提液用硼酸鹽緩沖液稀釋成體積分?jǐn)?shù)100%、75%、67%、50%、33%和25%，不同體積分?jǐn)?shù)的CB4對(duì)PPE活性呈劑量依賴性抑制，且隨體積分?jǐn)?shù)降低，抑制率逐漸下降；體積分?jǐn)?shù)為25%～75%的CB4對(duì)PPE的抑制活性與100%的差異達(dá)極顯著水平(<0.01)。

圖2 白茶水提液對(duì)PPE的抑制活性。柱上不同字母表示差異極顯著(P< 0.01)。下圖同。

400～800 nm光譜掃描結(jié)果表明(圖4)，PPE水解底物在495 nm波長(zhǎng)附近出現(xiàn)最大吸收峰，底物+酶+CB4以及底物+CB4混合溶液亦是如此，因此選擇495 nm測(cè)定酶活，但底物+CB4混合溶液有背景干擾，需要扣除其OD值。底物、酶、CB4以及酶+CB4的混合溶液在495 nm處的OD值很低，可忽略不計(jì)。

圖3 不同體積分?jǐn)?shù)CB4水提液對(duì)PPE的抑制活性

圖4 PPE水解底物的光譜掃描圖

CB4萃取層 CB4水提液的WEC、WEA、WEB、WER萃取層用0.5 mL超純水溶解，再用硼酸鹽緩沖液稀釋10倍后進(jìn)行測(cè)定，從圖5可見(jiàn), WEA的抑制率最高，達(dá)到82.58%，且與其他萃取層的差異達(dá)極顯著水平。

2.2 白茶水提液及其萃取層的組分

白茶水提液 CB6水提液中的多酚(TPs)總量最高，其次是CB4，但兩者相近(表2)。同時(shí), CB6的黃酮總量最高，其次是CB1。從表3可見(jiàn)，CB4水提液中表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)、兒茶素總量(TC)、咖啡堿(CAF)和生物堿總量(TA)含量均最高，其次是CB5與CB6 (表3)。CB6水提液中沒(méi)食子酸(GA)含量最高。

圖5 CB4不同萃取層對(duì)PPE的抑制活性。WEC: 三氯甲烷萃取層; WEA: 乙酸乙酯萃取層; WEB: 正丁醇萃取層; WER: 剩余水層。圖6和表4同。

表2 白茶水提液中多酚與黃酮總量

CB4萃取層 分別取WEC、WEA、WEB、WER母液用超純水稀釋10、500、100和100倍后，測(cè)定多酚含量，為使各萃取層中多酚含量具可比性，統(tǒng)一折算成酶活作用濃度(10倍稀釋液)。WEA、WEB、WER、WEC中的多酚含量分別為3 000、1 100、667和13g/mL。可見(jiàn)WEA中的多酚含量最高, WEC最低，兩者相差200倍以上(圖6)。各萃取層10倍稀釋液中沒(méi)食子酸、兒茶素與生物堿組分含量見(jiàn)表4，WEC主要含有CAF，約為1 243g/mL，兒茶素含量極低，總量?jī)H4.57g/mL；WEA中以兒茶素類為主，包括EGCG、ECG、ECG和GCG等，總量達(dá)3 000g/mL以上，CAF含量?jī)H93g/mL; WEB中仍含有兒茶素，而WER中含量較少，二者均含有少量的生物堿；且GA含量以WER最高。這表明WEA中多酚和兒茶素類含量最高，而WEC主要含有CAF。

表3 白茶水提液中沒(méi)食子酸、兒茶素與生物堿組分含量(mg/g)

2.3 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析表明，PPE活性抑制率與白茶的TPs、EGCG、TC、CAF含量的相關(guān)系數(shù)分別為0.94、0.97、0.04和0.98，均呈極顯著正相關(guān)(<0.01); 而與EC、GC含量的相關(guān)系數(shù)為負(fù)值，分別為-0.93和-0.88，呈顯著負(fù)相關(guān)；與Fs和GA相關(guān)系數(shù)分別為0.73和0.21，但不具有顯著性。

2.4 EGCG、GA、CAF標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)PPE活性的抑制作用

TPs和CAF是茶葉的特征性物質(zhì)，而兒茶素是TPs的主體成分，其中EGCG約占總量的70%～ 80%[12]。GA是TPs含量測(cè)定中常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。由表3和表4換算可知，測(cè)定酶活抑制率所用的白茶水提液與CB4不同萃取層中約含有0～2.0 mg/mL EGCG、0～0.15 mg/mL GA和0.05～1.5 mg/mL CAF。分別用0.1～2.0 mg/mL EGCG、0.05～2.0 mg/mL GA和0.05～2.0 mg/mL CAF標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)PPE活性的抑制率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，EGCG在0.1～1.0 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)PPE活性無(wú)抑制作用，僅2.0 mg/mL EGCG對(duì)PPE活性的抑制率約為11.71%；0.05～2.0 mg/mL CAF和0.05～2.0 mg/mL GA標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)PPE活性均表現(xiàn)為促進(jìn)作用，且GA的促進(jìn)作用與其濃度呈正比(表5)。較高濃度(≥4.0 mg/mL) CAF與底物的混合溶液在相同條件下反應(yīng)后呈現(xiàn)紅色，且濃度越高，紅色越深，這說(shuō)明CAF和底物混合后表現(xiàn)出與酶水解底物同樣的效果。可見(jiàn)CAF+底物背景色干擾極其明顯，故無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算其抑制率。高濃度的EGCG (≥2.0 mg/mL)同樣也出現(xiàn)這種情況。

圖6 不同萃取層中的多酚含量

表4 不同萃取層中沒(méi)食子酸、兒茶素和生物堿含量(mg/mL)

ND: 未檢測(cè)到。GA、GC、EC、EGC、GCG、EGCG、ECG、TC、TB、CAF、TA見(jiàn)表3。下表同。

ND: Not detected. GA, GC, EC, EGC, GCG, EGCG, ECG, TC, TB, CAF and TA see Table 3. The same is following Table.

表5 EGCG、GA、CAF標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)PPE的抑制或促進(jìn)活性

3 結(jié)論和討論

在開(kāi)展天然彈性蛋白酶抑制劑篩選試驗(yàn)中，通常選用的底物有化學(xué)合成的，如AAAPVN (-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸--硝基苯胺)，也有天然底物剛果紅-彈性蛋白，選用的彈性蛋白酶有PPE、人中心粒彈性蛋白酶(HNE)和人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)等。不同試驗(yàn)中選用的底物與酶存在差異, 導(dǎo)致酶抑制劑的作用效果也有所不同。Thring等[6]采用PPE水解底物AAAPVN，當(dāng)加入酶抑制劑EGCG后，直接測(cè)定405 nm波長(zhǎng)下水解產(chǎn)物硝基苯胺(- nitroaniline)的生成量，得出250mol/L EGCG對(duì)酶的抑制率約為35%。EGCG對(duì)HNE的半抑制濃度(IC50)為12.9mol/L[13]。Shoko等[14]研究表明, 5～ 20g/mL EGCG (約為11～44mol/L)對(duì)HLE的抑制活性很低，抑制率在35%以下。然而在實(shí)際應(yīng)用中，該波長(zhǎng)檢測(cè)靈敏度不夠理想，同時(shí)許多天然產(chǎn)物本身可能具有405 nm特征吸收，因而直接測(cè)定法易受到待測(cè)樣品自身顏色的影響而降低測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性[15]。

本研究以剛果紅-彈性蛋白為底物，PPE水解彈性蛋白后使剛果紅染料脫落到溶液中，此時(shí)溶液呈現(xiàn)紅色，當(dāng)加入酶抑制劑茶樣后，酶活性受到抑制，紅色變淺，且抑制能力與紅色深淺程度呈負(fù)相關(guān), 采用酶標(biāo)儀測(cè)定495 nm處的吸光度可間接得出抑制率，結(jié)果表明，CB4水提液及其乙酸乙酯層對(duì)PPE抑制活性最強(qiáng)，也就是說(shuō)，白茶中抑制PPE水解的有效組分主要集中在乙酸乙酯層。組分測(cè)定結(jié)果表明乙酸乙酯層中多酚總量及EGCG、ECG、ECG和GCG等兒茶素組分含量最高。兒茶素類物質(zhì)具有顯著的DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)和ABTS [2,2?-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)]清除活性，常作為重要的天然抗氧化劑用于化妝品領(lǐng)域[16]。然而本研究結(jié)果表明，0～1 mg/mL EGCG、0.05～2.0 mg/mL CAF和0.05～2.0 mg/mL GA對(duì)PPE活性幾乎無(wú)抑制作用，Demeule等[17]的研究同樣表明，以結(jié)合熒光染料的明膠為底物，1mol/L兒茶素(C、EC、EGC、ECG、EGCG)對(duì)PPE活性無(wú)抑制作用，100mol/L的抑制率也低于15%，綠茶多酚對(duì)PPE活性的抑制率也極低。那么乙酸乙酯層中對(duì)PPE活性發(fā)揮強(qiáng)抑制作用的物質(zhì)是否為兒茶素類以外的單體成分，或者是包括兒茶素在內(nèi)的多種物質(zhì)的協(xié)同效應(yīng)，亟待進(jìn)一步研究探討。原花青素由(+)-兒茶素、(-)-表兒茶素、(-)-表兒茶素沒(méi)食子酸酯聚合而成。據(jù)報(bào)道，在pH 8.25、37℃的Tris-HCl緩沖溶液中，250mol/L原花青素和250mol/L兒茶素分別處理不溶彈性蛋白24 h后，原花青素對(duì)PPE和HLE的抑制率分別為86.6%和100%，而兒茶素對(duì)PPE的抑制率為27.8%，對(duì)HLE無(wú)抑制作用[18]。從紅茶中提取的茶黃素雙沒(méi)食子酸酯(TFDG, theaflavin 3,3?-di--gallate)能抑制HNE誘導(dǎo)的氣道黏液分泌，在阻滯HNE誘導(dǎo)的氣道黏蛋白5AC合成中有一定作用，但阻斷途徑尚不清楚[19]。側(cè)柏()果甲醇提取物中的3種黃酮類物質(zhì)柏木雙黃酮(cupressuflavone)、穗花杉雙黃酮(amen- toflavone)和羅波斯塔雙黃酮(robustaflavone)對(duì)HNE活性有顯著抑制作用，IC50分別為8.09、1.27和1.33mol/L，陽(yáng)性對(duì)照EGCG為51.15mol/L,而(+)-兒茶素(catechin)、槲皮素(quercitrin)、異槲皮素(isoquercitrin)和楊梅素(myricitrin)的抑制濃度較低[20]。沈新鋒等[4]采用硅膠柱層析分離蜂膠乙酸乙酯萃取物，獲得高良姜素(3,5,7-三羥基黃酮)和球松素等活性組分，其中高良姜素抑制HLE活性的IC50為6.88mol/L，極顯著高于熊果酸(49.50mol/L)。由此推測(cè)，茶葉中含有的黃酮、花青素類物質(zhì)可能對(duì)PPE活性有一定抑制作用。‘福云6號(hào)’和‘黃旦’品種制成的白茶中蘆丁含量是其制成綠茶、紅茶、烏龍茶的1.5～2倍[21]。因此后續(xù)有必要對(duì)CB4乙酸乙酯層進(jìn)一步分離純化，以期得到生物活性(抑制PPE水解活性)強(qiáng)、純度較高的單體化合物，為茶葉抗皮膚老化研究及抗衰除皺護(hù)膚品研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

從400～800 nm光譜掃描結(jié)果來(lái)看，作為酶活抑制劑的白茶水提液本身存在背景色的干擾，故本研究測(cè)定了白茶樣品與底物混合后在同等反應(yīng)條件下的吸光度，用作自身背景的扣除，從而提高了檢測(cè)準(zhǔn)確性。此外，底物溶液幾乎不具顏色，在適宜條件下經(jīng)PPE水解后溶液呈鮮紅色；CAF水溶液為無(wú)色，較高濃度的CAF(≥4.0 mg/mL)與底物的混合溶液在相同條件下反應(yīng)后溶液也變紅，可見(jiàn)CAF背景色干擾極其明顯，故無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算其抑制率。高濃度的EGCG (≥2.0 mg/mL)同樣也出現(xiàn)這種情況，可能是這2種物質(zhì)在無(wú)PPE作用下也可使剛果紅染料從剛果紅-彈性蛋白上脫落下來(lái)，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因尚待進(jìn)一步研究探討。

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Studies on Anti-elastase Activity of White Tea

WANG Li-li, LIN Qing-xia, SONG Zhen-shuo, CHEN Lin*

(Tea Research Institution, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013, China)

In order to understand the anti-elastase effect of white tea, the inhibitory effect of aqueous extract from six white tea samples (CB1-CB6) on porcine pancreatic elastase (PPE) were measured. The results showed that CB4 had the strongest inhibition on PPE among six white tea samples with inhibition rate of 69.73%. In addition, elastase inhibition activity of CB4 increased with the concentration, showing a dose-dependent manner. Among the four extraction layers, ethyl acetate (WEA) layer had the strongest inhibitory activity, reaching 82.58%. The total polyphenol (TPs) content in CB4 was high, and the contents of epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG), and caffeine (CAF) were the highest among six samples. Among 4 extraction layers, the contents of EGCG, ECG, ECG, and total polyphenols in WEA layer were the highest and that of CAF was very low. There were significant positive correlation between elastase inhibition rate and the contents of TPs, EGCG and CAF with correlation coefficient above 0.90. However, neither 0.1-1.0 mg/mL EGCG nor 0.05-2.0 mg/mL CAF had inhibitory effects on PPE activity. Conversely, 0.05-2.0 mg/mL GA showed a promotion effect on PPE activity, and the promoting effect of GA was positively correlated with its concentration. Therefore, it was suggested that white tea exhibited potentially anti-aging activity, but the active ingredients that inhibited PPE were not EGCG, GA and CAF.

White tea; Ethyl acetate extraction layer; Porcine pancreatic elastase; Inhibitory activity

10.11926/jtsb.4282

2020-07-2

2020-11-18

福建省屬公益類科研院所專項(xiàng)(2020R1029006, 2019R1029-3); 福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2020J011367)資助

This work was supported by the Special Project for Public Welfare Research Institutes in Fujian (Grant No. 2020R1029006, 2019R1029-3), and the Natural Science Foundation in Fujian (Grant No. 2020J011367).

王麗麗(1985～ )，女，助理研究員，從事茶葉生物化學(xué)及天然產(chǎn)物分析研究。E-mail: 875720551@qq.com

Corresponding author. E-mail: chenlin_xy@163.com