木槿的化學(xué)成分研究

程子洋, 柯仲成, 張愉快, 趙奎奎, 王國凱

木槿的化學(xué)成分研究

程子洋1, 柯仲成1, 張愉快1, 趙奎奎1, 王國凱2*

(1. 黃山學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院, 安徽 黃山 245041; 2. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 合肥 230012)

為了解木槿()莖的化學(xué)成分，采用MCI-gel中壓柱層析、硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析和高效液相色譜等色譜方法，從木槿莖85%乙醇提取物中分離得到13個(gè)化合物。根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為methyl 4-[2-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-(hydroxymethyl) ethyl] sinapate (1)、2,6,2′,6′-四甲氧基-4,4′-二(2,3-環(huán)氧- 1-羥基丙基)二苯(2)、3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯(3)、3,4-二甲氧基肉桂酸甲酯(4)、對羥基肉桂酸甲酯(5)、咖啡酸甲酯(6)、阿魏酸甲酯(7)、丁香脂素(8)、clemaphenol A (9)、()-3-hydroxyanethole-d-glucopyranoside (10)、葒草苷(11)、木犀草素(12)和芹菜素(13)。其中化合物1～10為木脂素類，化合物11～13為黃酮類，化合物1為新天然產(chǎn)物，化合物1～12為首次從該植物中分離得到。采用MTS法檢測，40mol/L的化合物1～10對人白血病HL-60細(xì)胞和人肺癌A-549細(xì)胞株體外生長均未顯示出較好的抑制活性。

木槿；化學(xué)成分；木脂素；結(jié)構(gòu)鑒定

木槿()是錦葵科(Malvaceae)木槿屬的一種庭園常見的落葉灌木，別名朝開暮落花、籬障花、雞肉花、白飯花等，廣泛分布于我國熱帶和亞熱帶地區(qū)，具有較高的觀賞、食用和藥用價(jià)值，其花、果、根、葉和皮均可入藥[1-2]。本品始載于《日華子本草》，已有近2000年的栽培歷史。木槿子入藥始載于《本草綱目》，木槿皮、木槿花入藥始載于《日華子本草》。有收載木槿喜光，耐半陰，喜溫暖濕潤氣候，也耐干旱和瘠薄，適應(yīng)性強(qiáng)[3-7]。研究表明，木槿中有三萜、黃酮、木脂素等化學(xué)成分[8-11]，且木槿提取物及其部分化學(xué)成分具有抗癌、抗炎、抗衰老、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)活性[9-14]。隨著天然產(chǎn)物研究的發(fā)展，越來越多的研究證明藥用植物次生代謝產(chǎn)物具有生理功能多樣性的特點(diǎn)，黃酮以及木脂素等多種類型的化學(xué)成分具有抗炎、抑菌、抗腫瘤、抗病毒等多種藥理活性。然而，目前對木槿所含天然活性成分及相關(guān)生物活性的研究仍然較少，這極大地限制了木槿資源的研究開發(fā)。為了豐富木槿屬植物的化學(xué)成分，為木槿資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，本文對木槿莖85%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定。

1 材料和方法

1.1 儀器和材料

Avance Ⅲ 500 MHz、AM-400 MHz核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，德國Bruker公司)；API Qstar Pulsar1質(zhì)譜儀(美國Applied Biosystems/MDS SCIEX); Auto-Spec Premier P776三扇型雙聚焦磁質(zhì)譜儀(美國Waters公司)；柱色譜硅膠(100～200、200～300目)及GF254薄層色譜硅膠板(青島海洋化工廠)；反相硅膠RP-C18(40～75m，日本Fuji Silysia化學(xué)公司); Sephadex LH-20 (Pharmacia公司)。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等均為分析純；顯色劑為10% 硫酸-乙醇溶液。二甲基亞砜(DMSO，北京索萊寶科技有限公司)；DMEM培養(yǎng)基(美國Thermo公司);胎牛血清(FBS, 美國CLARK Bioscience公司)；脂多糖(LPS，上海源葉生物科技有限公司)；Griess試劑(中國Beyotime公司)；小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞株(中國科學(xué)院細(xì)胞庫，上海)。

植物材料于2019年9月采自安徽肥西縣，經(jīng)鑒定為錦葵科木槿屬植物木槿()的莖，憑證標(biāo)本(HSL-201909002A)保存于安徽中醫(yī)藥大學(xué)。

1.2 提取和分離

將新鮮木槿莖晾干, 取10 kg干燥莖粉碎，用85%乙醇室溫冷浸提取3次，每次48 h，合并提取液減壓濃縮得到總浸膏約1.1 kg。將總浸膏分散于溫水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次(5 L×3)，減壓濃縮后分別得到石油醚浸膏(150 g)、乙酸乙酯浸膏(360 g)和正丁醇浸膏(230 g)。乙酸乙酯萃取部分用硅膠柱(200～300目)分離，用氯仿∶甲醇(1∶0～0∶1)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢測合并后得到7個(gè)組分Frs. 1～Frs. 7。Fr. 2組分(16 g)經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮1∶0～0∶1)和Sephadex LH-20凝膠(氯仿-甲醇1∶1)分離得到化合物2 (8.6 mg)、5 (10.2 mg)、6 (7.3 mg)和10 (11.2 mg); Fr. 3組分(23 g)經(jīng)硅膠柱色譜層析(石油醚-丙酮1∶0～0∶1)梯度洗脫得到Frs. 3.1～Frs. 3.4共4個(gè)組分，F(xiàn)r. 3.2組分(320 mg)和Fr. 3.3組分(280 mg)經(jīng)制備型HPLC (液相條件：0～35 min，乙腈-水35∶70，流速: 3 mL/min)梯度洗脫分別得到化合物8 (10.6 mg,R=19.3 min)、11 (12.2 mg,R=29.8 min)和12 (5.8 mg,R=22.6 min)。Fr. 4組分(13 g)由反相MCI柱色譜(MCI GEL CHP 20P，粒徑: 75～150m)用甲醇-水(20∶80～100∶0)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢測合并相同組分后得到Frs. 4.1～Frs. 4.6共6個(gè)組分，組分Fr. 4.2 (420 mg)、Fr. 4.3 (390 mg)、Fr. 4.4 (410 mg)和Fr. 4.5 (360 mg)分別經(jīng)Sephadex LH-20凝膠(氯仿-甲醇1∶1)和制備型HPLC (液相條件: 0～ 35 min, 乙腈-水35∶70, 流速: 3 mL/min)制備, 分別得到化合物1 (4.2 mg,R=28.3 min)、4 (3.6 mg,R=17.2 min)、7 (5.1 mg,R=24.6 min)和9 (2.9 mg,R=22.1 min)。Fr. 5組分(23 g)經(jīng)反相硅膠柱色譜(甲醇-水10∶90～100∶0)梯度洗脫分離得到4個(gè)組分，F(xiàn)r. 5.2 (220 mg)、Fr. 5.3 (290 mg)、Fr. 5.4 (330 mg)制備型HPLC (液相條件: 0～30 min, 乙腈-水35∶65, 流速: 3 mL/min)制備分別得到化合物3 (3.2 mg,R=14.7 min)、9 (2.6 mg,R=16.9 min)和13 (4.9 mg,R=22.5 min)。化學(xué)物結(jié)構(gòu)式見圖1。

1.3 細(xì)胞毒活性測定

MTS為一種全新的MTT類似物，全稱為3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5(3-carboxymethoxyphenyl)- 2-(4-sulfopheny)-2H-tetrazolium，是一種黃色的染料。細(xì)胞線粒體能夠代謝還原MTS，生成可溶性的物質(zhì)，該物質(zhì)的含量可以用酶標(biāo)儀在490 nm處進(jìn)行測定。通常情況下甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)成正比，可根據(jù)光密度OD值推測出活細(xì)胞的數(shù)目[15]。

圖1 化合物1～13的結(jié)構(gòu)

取化合物1～10，用含0.3%DMSO的培養(yǎng)基溶解，以40mol/L濃度初篩，每孔終體積200L, 每處理均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。37℃培養(yǎng)48 h后，貼壁細(xì)胞棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加MTS溶液20L和培養(yǎng)液100L;懸浮細(xì)胞，取100L培養(yǎng)上清液，每孔加20L的MTS溶液；設(shè)3個(gè)空白復(fù)孔(MTS溶液20L和培養(yǎng)液100L的混合液)繼續(xù)孵育2～4 h,使反應(yīng)充分進(jìn)行后測定光吸收值。選擇492 nm波長，多功能酶標(biāo)儀(MULTISKAN FC)讀取各孔光吸收值，記錄結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)順鉑(DDP)和紫杉醇(Taxol) 2個(gè)陽性化合物，以濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線，應(yīng)用兩點(diǎn)法(Reed and Muench法)計(jì)算化合物的IC50值[16]。

1.4 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淡黃色無定形粉末；根據(jù)HR-ESI- MS: 457.1466 [M + Na]+確定其分子式為C22H26O9,不飽和度為10。在1H NMR譜(表1)中，化學(xué)位移6.84 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6)、6.77 (1H, d,= 1.9 Hz, H-5)和7.04 (1H, d,= 8.2 Hz, H-2)表明1個(gè)典型的芳香ABX系統(tǒng)的存在，進(jìn)而表明該化合物中有1個(gè)1,3,4-三取代苯環(huán)片段。化學(xué)位移7.61 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7′)和6.53 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8′)表明了1個(gè)典型的反式1,2-二取代雙鍵片段的存在。13C NMR譜(表1)和DEPT譜表明化合物1有22個(gè)碳原子，其中4個(gè)甲基(CH3)，1個(gè)亞甲基(CH2)，9個(gè)次甲基(CH)，8個(gè)季碳(C)。在HMBC譜(圖2)中7.09 (1H, s, H-6′)和145.3 (C-7′)的遠(yuǎn)程相關(guān)，7.61 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7′)和106.6 (C-2′)、118.1 (C- 8′)、131.1 (C-1′)、167.5 (C-9′)的遠(yuǎn)程相關(guān)，6.53 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8′)和131.1 (C-1′)、167.5 (C-9′)的遠(yuǎn)程相關(guān)以及3.73 (3H, s, H3-9′-OCH3)和167.5 (C-9′)的遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步證明,-不飽和甲酯片段的存在，以及C-7′和C-1′的連接。4.99 (1H, d,= 4.5 Hz, H-)和61.0 (C-)、88.1 (C-)、110.9 (C-2)、120.0 (C- 6)、133.7 (C-1)的遠(yuǎn)程相關(guān)，3.47/3.86 (2H, m, H-)和88.1 (C-)、88.1 (C-)的遠(yuǎn)程相關(guān)以及4.25 (1H, m, H-)和138.6 (C-4′)相關(guān)，結(jié)合化學(xué)位移值，可以推斷C-和C-1的連接以及C-和C-4′的連接。3.82 (3H, s, 3-OCH3)和147.9 (C-3)的遠(yuǎn)程相關(guān)，3.92 (3H, s, 3′-OCH3)和3.92 (3H, s, 5′-OCH3)、154.5 (C-3′)和154.5 (C-5′)的相關(guān)能夠推斷2個(gè)甲氧基的連接位置。化合物位的立體結(jié)構(gòu)通過對比文獻(xiàn)[17]相應(yīng)位置氫的化學(xué)位移和偶合常數(shù)可得。結(jié)合文獻(xiàn)[17]及波譜數(shù)據(jù)推斷化合物1為methyl 4-[2-hydroxy-2- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-(hydroxymethyl)ethyl] sinapate。

圖2 化合物1的1H-1H COSY相關(guān)和HMBC相關(guān)

表1 化合物1的核磁數(shù)據(jù)

化合物2 棕色粉末； ESI-MS: 418 [M]+,分子式C22H26O8；1H NMR (400 MHz，CDCl3):6.59 (4H, s, H-3, 3?, 5, 5?), 5.77 (2H, s, OH-7, 7?), 4.74 (2H, d,= 4.2 Hz, H-7, 7?)，4.29 (2H, m, H-9b, 9?b)，3.92 (2H, m, H-9a, 9?a), 3.91 (12H, s, 2, 2?, 6, 6?-OCH3), 3.11 (2H, m, H-8, 8?)；13C NMR (100 MHz, CDCl3):131.8 (C-1, 1?), 147.0 (C-2, 2?, 6, 6?), 102.5 (C-3, 3?, 5, 5?), 134.1 (C-4, 4?), 85.8 (C-7, 7?), 71.6 (C-9, 9?), 56.1 (2, 2?, 6, 6?-OCH3), 54.0 (C-8, 8?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致，故鑒定為2,6,2?,6?-tetramethoxy-4,4?-(2,3-epoxy-1-hydroxypropyl)biphenyl。

化合物3 白色粉末；ESI-MS: 275 [M + Na]+，分子式C13H16O5；1H NMR (500 MHz, acetone-6):7.60 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 7.04 (2H, s, H-2, 6), 6.51 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 3.89 (6H, s, 3, 5-OCH3)，3.77 (3H, s, 4-OCH3)，3.74 (3H, s, 9-OCH3);13C NMR (125 MHz, acetone-6):167.6 (C-9), 154.6 (C-3, 5), 145.5 (C-7), 141.2 (C-4), 130.8 (C-1), 117.8 (C-8), 106.6 (C-2, 6), 60.6 (4-OCH3), 56.5 (3, 5-OCH3), 51.6 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]基本一致, 因此鑒定為3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯。

化合物4 黃色油狀物； ESI-MS: 245 [M + Na]+，分子式C12H14O4；1H NMR (500 MHz, acetone-6):7.61 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7)，7.33 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2)，7.21 (1H, dd,= 8.2, 1.7 Hz, H-6), 6.99 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5)，6.44 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8)，3.89 (3H, s, 4-OCH3)，3.86 (3H, s, 3-OCH3), 3.73 (3H, s, 9-OCH3)；13C NMR (125 MHz, acetone-6):167.8 (C-9), 152.5 (C-4), 150.6 (C-3), 145.5 (C-7), 128.2 (C-1), 123.5 (C-6), 116.1 (C-8), 112.3 (C-5), 111.1 (C-2), 56.1 (3-OCH3), 51.5 (4-OCH3), 49.7 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]基本一致，故鑒定為3,4-二甲氧基肉桂酸甲酯。

化合物5 白色晶體(甲醇)；ESI-MS: 201 [M + Na]+，分子式C10H10O3；1H NMR (500 MHz, CD3OD):7.61 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 7.44 (2H, dd,= 6.8, 1.9 Hz, H-2, 6), 6.79 (2H, dd,= 6.8, 1.9 Hz, H-3, 5), 6.31 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 3.74 (3H, s, 10-OCH3)；13C NMR (125 MHz, CD3OD):169.8 (C-9), 161.9 (C-4), 146.7 (C-7), 131.1 (C-2, 6), 126.9 (C-1), 117.0 (C-3, 5), 114.6 (C-8)，52.0 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]基本一致，故鑒定為對羥基肉桂酸甲酯。

化合物6 白色粉末； ESI-MS: 195 [M + H]+，分子式C10H10O4；1H NMR (500 MHz, CD3OD):7.12 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2)，6.82 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.98 (1H, dd,= 8.0, 1.8 Hz, H-6), 7.52 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 6.24 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 3.70 (3H, s, 9-OCH3);13C NMR (125 MHz, CD3OD):127.6 (C-1), 115.3 (C-2), 146.4 (C-3), 148.8 (C-4), 115.4 (C-5), 122.5 (C-6), 145.9 (C-7), 116.1 (C-8), 167.9 (C-9), 51.6 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]基本一致，故鑒定為咖啡酸甲酯。

化合物7 白色粉末；ESI-MS:209 [M + H]+，分子式C11H12O4；1H NMR (500 MHz, CD3OD):7.56 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 7.15 (1H, s, H-2), 7.10 (1H, d,= 8.0 Hz, H-6)，6.92 (1H，d，= 8.0 Hz, H-5), 6.30 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 3.90 (3H, s, 9- OCH3), 3.92 (3H, s, 3-OCH3)；13C NMR (125 MHz, CD3OD):56.2 (9-OCH3), 56.4 (3-OCH3), 111.4 (C-4)，112.4 (C-7)，116.7 (C-2)，123.8 (C-8)，129.0 (C-1)，146.4 (C-3)，150.6 (C-6)，152.7 (C-5)，170.6 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]一致，故鑒定為阿魏酸甲酯。

化合物8 白色無定形粉末；ESI-MS:417 [M - H]-，分子式C22H26O8；1H NMR (500 MHz, CD3OD):6.83 (4H, s, H-2, 2?, 6, 6?), 4.88 (2H, d,= 3.5 Hz, H-7, 7?), 4.43 (2H, dd,= 7.7, 5.7 Hz, H-9a, 9?a), 4.05 (2H, dd,= 8.8, 2.3 Hz, H-9b, 9?b), 4.01 (12H, s, 3, 3?, 5, 5?-OCH3), 3.49 (2H, m, H-8, 8?)；13C NMR (125 MHz, CD3OD):148.3 (C-3, 5, 3?, 5?), 135.2 (C-4, 4?), 132.1 (C-1, 1?), 103.5 (C-2, 2?, 6, 6?), 86.6 (C-7, 7?), 71.7 (C-9, 9?), 55.8 (C-8, 8?), 54.5 (3, 5, 3?, 5?-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道對照基本一致，故鑒定為丁香脂素。

化合物9 無色油狀物；ESI-MS:357 [M - H]-，分子式C20H22O6；1H NMR (500 MHz, CD3OD):3.13 (2H, m, H-1, 5), 4.76 (2H, d,= 3.9 Hz, H-2, 6), 3.89 (2H, dd,= 8.9, 3.6 Hz, H-4, 8), 4.25 (2H, dd,= 9.0, 6.8 Hz, H-4, 8), 4.43 (2H, dd,= 7.7, 5.7 Hz, H- 9a, 9?a), 4.05 (2H, dd,= 8.8, 2.3 Hz, H-9b, 9?b), 3.92 (6H, s, 4', 4??-OCH3), 5.69 (2H, s, 3, 3?-OH), 6.92 (2H, s, H-2?, 2″), 6.91 (2H, d,= 8.0 Hz, H-5?, 5″), 6.85 (2H, dd,= 8.0, 1.6 Hz, H-6?, 6″)；13C NMR (125 MHz, CD3OD):146.6 (C-4?, 4??), 145.2 (C-3?, 3??), 132.8 (C-1?, 1??), 118.9 (C-6?, 6??), 114.2 (C-5?, 5??), 108.5 (C-2?, 2??), 85.8 (C-2, 6), 71.6 (C-4, 8?), 55.9 (OCH3), 54.1 (C-1, 5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]基本一致，故鑒定為clemaphenol A。

化合物10 白色無定形粉末；ESI-MS: 349 [M + Na]+，分子式C16H23O7；1H NMR (500 MHz, acetone-6):7.78 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2), 6.92 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5), 7.03 (1H, dd,= 8.5, 1.5 Hz, H-6), 6.36 (1H, d,= 16.0 Hz, H-1'), 6.24 (1H, dq,= 16.0, 6.5 Hz, H-2?), 1.69 (3H, d,= 6.5 Hz, H-3?), 3.71 (3H, s, 1-OCH3), 5.70 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1??)；13C NMR (125 MHz, acetone-6):134.0 (C-1), 118.1 (C-2), 147.1 (C-3), 150.9 (C-4), 110.8 (C-5), 120.0 (C-6), 131.7 (C-1?), 124.8 (C-2?), 18.6 (C-3?), 56.4 (1-OCH3), 102.7 (C-1??), 74.8 (C-2??), 78.0 (C-3??), 71.4 (C-4??), 77.9 (C- 5??), 62.7 (C-6??)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]基本一致, 故鑒定為()-3-hydroxyanethole-d-glucopyranoside。

化合物11 黃色粉末；ESI-MS: 447 [M - H]-，分子式C21H20O11；1H NMR(500 MHz, DMSO-6):13.17 (1H, s, 5-OH), 7.51 (2H, overlapped, H-2′, 6′), 6.86 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 6.64 (1H, s, H-6), 6.26 (1H, s, H-3), 4.67 (1H, d,= 9.84 Hz, H-1′′), 3.15～3.85 (5H, m, 糖上質(zhì)子)；13C NMR (125 MHz, DMSO-6):164.1 (C-2), 102.5 (C-3), 182.0 (C-4), 160.4 (C-5), 98.2 (C-6), 162.7 (C-7), 104.6 (C-8), 156.0 (C-9), 104.1 (C-10), 122.0 (C-1′), 114.1 (C-2′), 145.8 (C-3′), 149.6 (C-4′), 115.6 (C-5′), 119.4 (C-6′), 73.4 (C-1′′), 70.8 (C-2′′), 78.8 (C-3′′), 70.7 (C-4′′), 82.0 (C-5′′)，61.6 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]報(bào)道的葒草苷數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為葒草苷。

化合物12 黃色粉末；ESI-MS:309 [M + Na]+, 分子式為C15H10O6；1H NMR (500 MHz, CD3OD):11.85 (1H, s, 5-OH), 7.42 (2H, m, H-2′, 6′), 7.06 (1H, d,= 7.8 Hz, H-5′), 6.64 (1H, s, H-3), 6.53 (1H, d,= 7.8 Hz, H-8), 6.16 (1H, d,= 1.8 Hz, H-6)；13C NMR (125 MHz, CD3OD):165.9 (C-2), 104.4 (C-3), 181.7 (C-4), 159.8 (C-5), 98.8 (C-6), 161.5 (C-7), 93.8 (C-8), 161.9 (C-9), 103.3 (C-10), 115.6 (C-1′), 108.4 (C-2′), 145.4 (C-3′), 149.8 (C-4′), 117.2 (C-5′), 124.7 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]基本一致，故鑒定為木犀草素。

化合物13 黃色粉末； ESI-MS: 271 [M +H]+, 分子式為C15H10O5;1H NMR (500 MHz, DMSO-6):12.94 (5-OH)，7.90 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′)，6.90 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′)，6.45 (1H, d,= 1.8 Hz, H-8)，6.17 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6)，6.74 (1H, s, H-3)；13C NMR (125 MHz，DMSO-6):164.0 (C-2)，102.2 (C-3)，181.4 (C-4)，161.0 (C-5)，98.7 (C-6)，163.5 (C-7)，93.7 (C-8)，157.3 (C-9)，103.7 (C-10)，121.0 (C-1′)，128.4 (C-2′, 6′)，115.7 (C-3′, 5′)，161.5 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]基本一致，故鑒定為芹菜素。

1.5 細(xì)胞毒活性測定

對木槿85%乙醇提取物中木脂素類化合物1～10進(jìn)行了白血病HL-60細(xì)胞和肺癌A-549細(xì)胞的體外腫瘤生長抑制活性檢測。結(jié)果表明化合物在40mol/L時(shí)均未顯示出較好的抑制活性(表2)。

表2 化合物1～10的腫瘤細(xì)胞毒活性

2 結(jié)果和討論

本研究通過MCI-gel中壓柱層析、硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析和高效液相色譜等多種色譜方法，對木槿莖85%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，共鑒定出13個(gè)化合物，分別為methyl 4-[2-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-(hydro- xymethyl) ethyl] sinapate (1)、2,6,2′,6′-四甲氧基-4, 4′-二(2,3-環(huán)氧-1-羥基丙基)二苯(2)、3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯(3)、3,4-二甲氧基肉桂酸甲酯(4)、對羥基肉桂酸甲酯(5)、咖啡酸甲酯(6)、阿魏酸甲酯(7)、丁香脂素(8)、clemaphenol A (9)、()-3-hydro- xyanethole-d-glucopyranoside (10)、葒草苷(11)、木犀草素(12)和芹菜素(13)。其中化合物1～10為木脂素類，化合物11～13為黃酮類，化合物1為新天然產(chǎn)物，化合物1～12為首次從該植物中分離得到。采用MTS法檢測木脂素類化合物對人白血病HL-60細(xì)胞和人肺癌A-549細(xì)胞株體外生長的抑制活性,結(jié)果表明化合物1～10在40mol/L時(shí)均未顯示出較好的抑制活性。

研究表明，肉桂酸及其衍生物具有較好的抗氧化活性[30]，丁香脂素及其糖苷具有抗氧化、抗抑郁、抗胃潰瘍、抗炎和選擇性細(xì)胞毒作用，并對多種酶有抑制作用[31]，這與木槿已報(bào)道的藥理活性[9-14]相符合，表明木槿有進(jìn)一步開發(fā)化妝品的潛力。文獻(xiàn)報(bào)道從木槿中分離得到的葒草苷和木犀草素具有一定的抗氧化能力和抗炎活性[32-33]，而芹菜素則對肝癌細(xì)胞具有一定的抑制作用[34]。木槿的藥用價(jià)值仍需要進(jìn)一步的開發(fā)，未來的研究方向可以從抗氧化活性入手，尋找延緩衰老的藥物和化妝品。

[1] Editorial Board of Chinese Materia Medica, State Administration of traditional Chinese medicine. Chinese Materia Medica [M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press, 1999: 354-358. 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草 [M]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版, 1999: 354-358.

[2] WEI Q, JI X Y, XU F, et al. Chemical constituents from leaves ofand their-glucosidase inhibitory activities [J]. J Chin Med Mat, 2015, 38(5): 975-979. doi: 10.13863/j.issn1001-4454. 2015.05.022.衛(wèi)強(qiáng), 紀(jì)小影, 徐飛, 等. 木槿葉化學(xué)成分及抑制-葡萄糖苷酶活性研究 [J]. 中藥材, 2015, 38(5): 975-979. doi: 10.13863/j.issn1001- 4454.2015.05.022.

[3] YANG T, WANG B C, DENG B S, et al. Research onextra- ction technology and antioxidant [J]. Shandong Chem Ind, 2017, 46 (12): 24-26. doi: 10.3969/j.issn.1008-021X.2017.12.008. 楊濤, 王博誠, 鄧碧珊, 等. 木槿提取工藝及抗氧化作用研究 [J]. 山東化工, 2017, 46(12): 24-26. doi: 10.3969/j.issn.1008-021X.2017. 12.008.

[4] SHEN W X, CUI C, LIU X H, et al. Overview of pharmacological research onL. [J]. Anim Husband Feed Sci, 2011, 32(11): 54-55,60. doi: 10.3969/j.issn.1672-5190.2011.11.027.申萬祥, 崔超, 劉向輝, 等. 木槿藥學(xué)研究概況 [J]. 畜牧與飼料科學(xué), 2011, 32(11): 54-55,60. doi: 10.3969/j.issn.1672-5190.2011.11. 027.

[5] JING L X, ZHENG C L, LIN B Q, et al. Nutritional components in[J]. Food Res Dev, 2009, 30(6): 146-148. doi: 10. 3969/j.issn.1005-6521.2009.06.044.景立新, 鄭叢龍, 林柏全, 等. 木槿花中營養(yǎng)成分研究 [J]. 食品研究與開發(fā), 2009, 30(6): 146-148. doi: 10.3969/j.issn.1005-6521.2009. 06.044.

[6] ZHAO B Q, ZHANG W, TAN J T, et al. Pharmacognostic study on leaves ofL. [J]. Lishizhen Med Mat Med Res, 2007, 18(11): 2675-2676. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2007.11.038.趙冰清, 張為, 譚金桃, 等. 木槿葉的生藥學(xué)研究 [J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2007, 18(11): 2675-2676. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2007.11. 038.

[7] PENG Y, TAN J T. Study on the pharmacognosy ofL.[J]. Guid J TCM, 2006, 12(8): 98-101. doi: 10.13862/j.cnki.cn43-1446/ r.2006.08.048.彭毅, 譚金桃. 木槿的生藥學(xué)研究 [J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2006, 12(8): 98-101. doi: 10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2006.08.048.

[8] ZHANG E J, KANG Q S, ZHANG Z. Studies on chemical constituents from the bark ofL. [J]. Chin J Chin Mat Med, 1993, 18(1): 37-38. 張恩娟, 康欽樹, 張昭. 川槿皮化學(xué)成分的研究 [J]. 中國中藥雜志, 1993, 18(1): 37-38.

[9] YUN B S, RYOO I J, LEE I K, et al. Two bioactive pentacyclic triterpene esters from the root bark of[J]. J Nat Prod, 1999, 62(5): 764-766. doi: 10.1021/np9804637.

[10] LEE S J, YUN Y S, LEE I K, et al. An antioxidant lignan and other constituents from the root bark of[J]. Planta Med, 1999, 65(7): 658-660. doi: 10.1055/s-2006-960841.

[11] YUN B S, LEE I K, RYOO I J, et al. Coumarins with monoamine oxidase inhibitory activity and antioxidative coumarino-lignans from[J]. J Nat Prod, 2001, 64(9): 1238-1240. doi: 10.1021/ np0100946.

[12] YOO I D, YUN B S, LEE I K, et al. Three naphthalenes from root bark of[J]. Phytochemistry, 1998, 47(5): 799-802. doi: 10. 1016/S0031-9422(97)00674-2.

[13] CHENG Y L, LEE S C, HARN H J, et al. The extract ofinducing apoptosis by activating p53 and AIF in human lung cancer cells [J]. Amer J Chin Med, 2008, 36(1): 171-184. doi: 10.1142/ S0192415X08005680.

[14] ZHANG R R, HU R D, LU X Y, et al. Polyphenols from the flower ofLinn ameliorate neuroinflammation in LPS-treated SH-SY5Y cell [J]. Biomed Pharmacother, 2010, 130: 110517. doi: 10. 1016/j.biopha.2020.110517.

[15] CORY A H, OWEN T C, BARLTROP J A, et al. Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture [J]. Cancer Commun, 1991, 3(7): 207-212. doi: 10.3727/0955354918208 73191.

[16] REED L J, MUENCH H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints [J]. Amer J Epidemiol, 1938, 27(3): 493-497. doi: 10.1093/ OXFORDJOURNALS.AJE.A118408.

[17] HELM R F, RALPH J. Lignin-hydroxycinnamyl model compounds related to forage cell wall structure: 1. Ether-linked structures [J]. J Agric Food Chem, 1992, 40(11): 2167-2175. doi: 10.1021/jf00023 a025.

[18] DAY S H, WANG J P, WON S J, et al. Bioactive constituents of the roots of[J]. J Nat Prod, 2001, 64(5): 608-611. doi: 10.1021/np000428b.

[19] MAHAJAN R P, PATIL S L, MALI R S. Convenient microwave assisted synthesis of naturally occurring methyl ()-cinnamates [J]. Org Prep Proced Int, 2005, 37(3): 286-290. doi: 10.1080/00304940 509354962.

[20] SHARMA A, SHARMA N, SHARD A, et al. Tandem allylic oxidation- condensation/esterification catalyzed by silica gel: An expeditious approach towards antimalarial diaryldienones and enones from natural methoxylated phenylpropenes [J]. Org Biomol Chem, 2011, 9(14): 5211-5219. doi: 10.1039/C1OB05293D.

[21] LIU N Z, ZHAO B Q, QIAN Q G, et al. Chemical constituents from[J]. Chin Trad Pat Med, 2019, 41(3): 576-579. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2019.03.019.劉年珍, 趙碧清, 錢群剛, 等. 玄參化學(xué)成分的研究 [J]. 中成藥, 2019, 41(3): 576-579. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2019.03.019.

[22] WANG Z M, YANG L, FANG Y D, et al. Chemical constituents from stems of[J]. Chin Trad Herb Drug, 2019, 50(12): 2802-2808. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.12.009.王子明, 楊齡, 房銀東, 等. 攀莖鉤藤莖枝的化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(12): 2802-2808. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019. 12.009.

[23] ZHANG C H, LI M, ZENG J X, et al. Chemical constituents from[J]. Chin Trad Pat Med, 2015, 46(10): 1437-1440. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.10.006.張晨輝, 李敏, 曾金祥, 等. 短管兔耳草化學(xué)成分研究 [J]. 中成藥, 2015, 46(10): 1437-1440. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.10.006.

[24] ZHANG R R, MEI W L, HUANG S Z, et al. Chemical constituents from the cultivated(Thunb.) C. Y. Wu in Hainan [J]. J Trop Subtrop Bot, 2017, 25(2): 182-188. doi: 10.11926/ jtsb.3676. 張榮榮, 梅文莉, 黃圣卓, 等. 海南栽培腎茶的化學(xué)成分研究 [J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào), 2017, 25(2): 182-188. doi: 10.11926/jtsb.3676.

[25] HE M, ZHANG J H, HU C Q. Studies on the chemical components of[J]. Acta Pharm Sin, 2001, 36(4): 278-280. doi: 10.3321/j.issn:0513-4870.2001.04.009.何明, 張靜華, 胡昌奇. 威靈仙化學(xué)成分的研究 [J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2001, 36(4): 278-280. doi: 10.3321/j.issn:0513-4870.2001.04.009.

[26] FUJIMATU E, ISHIKAWA T, KITAJIMA J. Aromatic compound glucosides, alkyl glucoside and glucide from the fruit of anise [J]. Phytochemistry, 2003, 63(5): 609-616. doi: 10.1016/S0031-9422(03) 00179-1.

[27] YAO Y Z, LI S H. Chemical constituents from[J]. J Chin Med Mat, 2015, 38(8): 1656-1660. doi: 10.13863/j.issn1001- 4454.2015.08.023.姚元枝, 李勝華. 明日葉化學(xué)成分研究 [J]. 中藥材, 2015, 38(8): 1656-1660. doi: 10.13863/j.issn1001-4454.2015.08.023.

[28] WANG Z Y, TANG S Q. Chemical constituents form[J]. Chin Trad Pat Med, 2019, 41(12): 2928-2932. doi: 10.3969/j.issn. 1001-1528.2019.12.020.王治陽, 唐素勤. 白毛藤化學(xué)成分的研究 [J]. 中成藥, 2019, 41(12): 2928-2932. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2019.12.020.

[29] SONG W J, ZHANG W, LUO G F. Study on the ethyl acetate-soluble chemical constituents from the seed of Tibetan medicine[J]. NW Pharm J, 2019, 34(4): 432-435. doi: 10.3969/j.issn. 1004-2407.2019.04.002.宋文靜, 張煒, 駱桂法. 藏藥菥蓂子乙酸乙酯部位主要化學(xué)成分的研究 [J]. 西北藥學(xué)雜志, 2019, 34(4): 432-435. doi: 10.3969/j.issn. 1004-2407.2019.04.002.

[30] HOU X T, HAO E W, QIN J F, et al. Chemical components and pharmacological action forand predictive analysis on Q-marker [J]. Chin Trad Herb Drugs, 2018, 49(1): 20-34. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.01.003.侯小濤, 郝二偉, 秦健峰, 等. 肉桂的化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量標(biāo)志物(Q-marker)的預(yù)測分析 [J]. 中草藥, 2018, 49(1): 20-34. doi: 10. 7501/j.issn.0253-2670.2018.01.003.

[31] FEI J. Study on the total synthesis and bioactivities of syringaresinol and glycosides [D]. Shanghai: Academy of Military Medical Sciences, 2005: 33-34. 費(fèi)嘉. 丁香脂素及其糖苷的全合成以及活性初探[D]. 上海: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院, 2005: 33-34.

[32] POTO?NJAK I, ?IMI? L, GOBIN I, et al. Antitumor activity of luteolin in human colon cancer SW620 cells is mediated by the ERK/ FOXO3a signaling pathway [J]. Toxicol, 2020, 66: 104852. doi: 10.1016/j.tiv.2020.104852.

[33] CHE D N, SHIN J Y, KANG H J, et al. Luteolin suppresses IL-31 production in IL-33-stimulated mast cells through MAPK and NF-κB signaling pathways [J]. Int Immunopharmacol, 2020, 83: 106403. doi: 10.1016/j.intimp.2020.106403.

[34] Wang S M, Zhang S H, Hu X D. Advances in the study of effect and mechanism of apigenin on hepatocellular carcinoma [J]. Trad Chin Drug Res Pharmacol, 2020, 31(5): 616-620. doi: 10.19378/j.issn.1003- 9783.2020.05.019.王守梅, 張樹輝, 胡旭東. 芹菜素抗肝細(xì)胞癌作用及機(jī)制的研究進(jìn)展 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2020, 31(5): 616-620. doi: 10.19378/ j.issn.1003-9783.2020.05.019.

Chemical Constituents from the Stems of

CHENG Zi-yang1, KE Zhong-cheng1, ZHANG Yu-kuai1, ZHAO Kui-kui1, WANG Guo-kai2*

(1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Huangshan University, Huangshan 245041, Anhui, China; 2. School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine,Hefei 230012, China)

In order to understand the chemical constituents ofstem, thirteen copounds were isolated from 85% ethanol extract of its stems by several column chromatographic techniques, such as MPLC- MCI-gel, silica gel, Sephadex LH-20 and preparative HPLC. Based on physicochemical properties and NMR spectral data, their structures were identified as methyl 4-[2-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-(hydro- xymethyl) ethyl] sinapate (1), 2,6,2?,6?-tetramethoxy-4,4?-(2,3-epoxy-1-hydroxypropyl) biphenyl (2), 3,4,5- trimethoxycinnamic acid methyl ester (3), 3,4-dimethoxycinnamic acid methyl ester (4),--hydroxy- cinnamic acid methyl ester (5), methyl caffeate (6), methyl feruate (7), syringaresinol (8), clemaphenol A (9), ()-2-methoxy-5-propenylphenyl-d-glucopyranoside (10), orientin (11), luteolin (12), and apigenin (13). Among them, compounds 1-10 were lignans and compounds 11-13 were flavonoids. Compound 1 was a new natural product, compound 1-12 were isolated from this plant for the first time. Compounds1-10 at 40mol/L did not exhibit good cytotoxic activities togrowth of human leukemia HL-60 cells and human lung cancer A-549 cells.

; Chemical constituents; Lignan; Structure identification

10.11926/jtsb.4288

2020-07-23

2020-10-22

安徽省高校自然科學(xué)研究一般項(xiàng)目(KJHS2019B05)；安徽省高校優(yōu)秀青年人才支持計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(gxyqZD2019035)；安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目(S201910375068)資助

This work was supported by the General Project of Natural Science Research in Universities of Anhui (Grant No. KJHS2019B05), the Project for Excellent Young Talents in College of Anhui (Grant No. gxyqZD2019035), and the Project for Innovation and Entrepreneurship of University Students in Anhui (Grant No. S201910375068).

程子洋(1982～ )，女，講師，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail: czy@hsu.edu.cn

Corresponding author. E-mail: wanggk@ahtcm.edu.cn