廣東揭陽地區(qū)兒童地中海貧血基因檢測結(jié)果分析＊

文/張展青，黃育濤，陳曉榆，蔡幸生，朱勇斌

地中海貧血簡稱地貧，主要分為α地中海貧血（α-thalassemia，α-TT）及β-地中海貧血（β-thalassemia，β-TT）是一組由于珠蛋白基因的缺失或者缺陷導(dǎo)致血紅蛋白中一種或多種珠蛋白肽鏈合成障礙，以致紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量減少并伴有貧血的常染色體隱性遺傳性溶血性疾病。地貧的基因類型及出現(xiàn)率有較大的地域及民族差異。地中海貧血多見于地中海及東南亞地區(qū)，在我國南方廣東、廣西、海南、貴州、云南、四川等省較為多發(fā)[1]。目前，地貧尚未有特效方式治療[2]，對重型地貧只能通過終生輸血維持生命，所以阻斷地中海貧血患兒的出生尤為重要和迫切。為了解廣東揭陽地區(qū)兒童地中海貧血發(fā)病率和基因型，本研究回顧分析2017年1月至2021年3月揭陽市人民醫(yī)院兒科門診及兒科住院部收治的小紅細(xì)胞貧血患兒地中海貧血基因檢測結(jié)果，并將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年1月-2021年3兒科門診以及兒科住院部收治的籍貫為廣東揭陽地區(qū)兒童409例，其中男237例，女172例，年齡在0-14歲之間。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞平均血紅蛋白在27pg以下；紅細(xì)胞平均體積在82fl以下。排除標(biāo)準(zhǔn)：非廣東揭陽籍貫；合并血液系統(tǒng)疾?。缓喜⒚庖呦到y(tǒng)疾病。

1.3 研究方法

1.3.1 主要儀器和試劑

使用希森美康全自動血液分析儀及配套試劑、基因擴增儀、恒溫雜交儀（YN-H16）和深圳亞能生物地中海貧血基因檢測試劑盒等。

1.3.2 篩查方法

采用希森美康全自動血液分析儀對外周血中平均血紅蛋白體積(MCV)、平均血紅蛋白(MCH)、Hb進(jìn)行測定，初步排除其他因素引發(fā)的貧血。以平均紅細(xì)胞體積MCV＜82fl和(或)平均血紅蛋白含量MCH＜27pg為地貧血常規(guī)篩查陽性指標(biāo)[3]。篩查陽性標(biāo)本進(jìn)行地貧基因檢測。

1.3.3 基因診斷

抽取小紅細(xì)胞貧血兒童的2ml外周靜脈血，EDTA-2K抗凝，應(yīng)用地中海貧血基因診斷試劑盒提取DNA，在基因擴增儀上擴增，在恒溫雜交儀（YN-H16）應(yīng)用PCR方向點雜交法進(jìn)行雜交，經(jīng)洗膜顯色，再根據(jù)膜條上的探針排列順序進(jìn)行結(jié)果判讀。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本文統(tǒng)計分析資料選擇Excel系統(tǒng)軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果

（1）廣東揭陽地區(qū)409例小紅細(xì)胞貧血兒童地中海貧血基因篩查結(jié)果分析，正常183例，地貧226例，地貧檢出率55.26%；其中α地中海貧血135例，β地中海貧血87例，α復(fù)合β地中海貧血4例，檢出率分別為33.01%、21.27%及0.98%。見表l。

（2）409例小紅細(xì)胞貧血兒童不同性別地中海貧血檢出情況比較，男童251例，其中α地中海貧血75例檢出率29.88%，β地中海貧血52例檢出率20.72%，α復(fù)合β地中海貧血3例檢出率1.20%；女童158例，其中α地中海貧血60例檢出率37.97%，β地中海貧血35例檢出率22.15%，α、β復(fù)合地中海貧血1例檢出率0.63%；女童α地中海貧血檢出率比男童高，β地中海貧血男女童檢出率較為接近。見表2。

表2 不同性別不同類型地中海貧血檢出情況比較

（3）226例地貧兒童地貧基因型情況分析，α地中海貧血中以--SEA/αα基因型構(gòu)成比最高，其余依次為-α3.7/αα、-α4.2/αα、--SEA/-α3.7、ααCS/αα、--SEA/-α4.2、ααQS/αα和--SEA/αCSα等基因型；β地中海貧血中以IVS-2-654/N、CD41-42/N、CD17/N、IVS-2-654/CD41-42和-28/N基因型構(gòu)成比排前五位，其余八種基因型較為少見；α復(fù)合β地中海貧血總共4例，分別為不同基因型。見表3。

表3 226例地貧基因型分布

（4）409例小紅細(xì)胞貧血患兒地貧等位基因攜帶率及構(gòu)成比分析，α地貧等位基因--SEA、-α3.7和-α4.2最為常見；β地貧等位基因CD41-42/N、IVS-2-654/N和CD17/N最為常見。見表4。

表4 409例小紅細(xì)胞貧血患兒地貧等位基因攜帶率及構(gòu)成比

3 討論

地中海貧血是一種常見的常染色體隱性遺傳性，珠蛋白基因發(fā)生突變、缺失等缺陷導(dǎo)致的珠蛋白合成減少，致使血紅蛋白合成減少，血紅蛋白病,重型地中海貧血致死性非常高［4-6］。地貧基因檢查為地貧診斷金標(biāo)準(zhǔn)［7-8］。由于高發(fā)于地中海地區(qū)，所以命名為地中海貧血。除地中海地區(qū)以外，其他地區(qū)包括我國南方地區(qū)和少數(shù)民族也有發(fā)?。?］，尤其廣西、廣東、海南、四川等省多發(fā)。依據(jù)患者珠蛋白基因缺陷不同，地中海貧血可以分為不同類型，以α地貧和β地貧最為常見。根據(jù)α珠蛋白基因缺陷的不同，可以分為α缺失型和α非缺失型地中海貧血，目前，全世界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了至少35種α缺失型地中海貧血［10-11］。人類β珠蛋白基因，總長約849個堿基對，位于11號染色體的長臂末端，β珠蛋白鏈一條來自父方，一條來自母方，多數(shù)β基因型為點突變所致地中海貧血，少數(shù)為基因缺失所致地中海貧血。目前，全世界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)200多種β基因型突變的地中海貧血［12-14］。隨著我國經(jīng)濟的迅速發(fā)展，尤其作為經(jīng)濟發(fā)展較好的廣東省珠三角地區(qū)，吸引大量全國各地人群（包括廣東揭陽地區(qū)）前來工作經(jīng)商，在無形中形成了不同地區(qū)人群的交往，也增多了廣東揭陽地區(qū)人與全國不同地區(qū)人的婚姻嫁娶事宜，導(dǎo)致地貧基因類型也越來越復(fù)雜。因此，掌握兒童地中海貧血的狀況及基因突變類型資料，有利于完善廣東揭陽地區(qū)地中海貧血基因類型庫，對未來本地區(qū)地貧的防治具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，廣東揭陽地區(qū)小紅細(xì)胞貧血兒童地中海貧血檢出率高達(dá)55.26%；其中α地中海貧、β地中海貧血及α、β復(fù)合地中海貧血檢出率分別為33.01%、21.27%及0.98%。α地中海貧血以--SEA/αα基因型構(gòu)成比最高為77.78%，其余依次為-α3.7/αα、-α4.2/αα、--SEA/-α3.7、ααCS/αα、--SEA/-α4.2、ααQS/αα和--SEA/αCSα等基因型；廣東揭陽地區(qū)α地貧基因型與福建、深圳、貴陽、廣西、江西地區(qū)較為一致，等位基因以--SEA、-α3.7和-α4.2最為常見。β地中海貧血中，發(fā)現(xiàn)7種等位基因，CD41-42/N、IVS-2-654/N、CD17/N、-28/N、βE/、CAP位點突變和IVS-I-1/N，以前三者最為常見，構(gòu)成比分別為36.89%、35.92%和12.62%；與國內(nèi)其他地區(qū)相關(guān)報道不盡相同。α復(fù)合β地中海貧血同基因型較為少見。

綜上所述，廣東揭陽地區(qū)小紅細(xì)胞貧血兒童地中海貧血檢出率高，基因類型復(fù)雜，各級醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)該加大對當(dāng)?shù)赜g人群關(guān)于地貧的宣傳教育及遺傳咨詢和地貧篩查及基因診斷工作力度,以達(dá)到預(yù)防地中海貧血的目的，尤其是遏制中重地貧兒的出生。