全自動(dòng)DNA圖像分析在胃癌的診斷及臨床作用

楊瑞東，田鳳霞

（河北省灤州市人民醫(yī)院，河北 灤州）

0 引言

胃癌是臨床上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，同其他腫瘤一樣，胃癌的發(fā)生發(fā)展受細(xì)胞內(nèi)DNA的控制。全自動(dòng)DNA圖像分析可以監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA含量的變化，發(fā)現(xiàn)癌變細(xì)胞，目前已廣泛應(yīng)用于腫瘤的診斷和鑒別診斷，以及治療方案的確定和腫瘤患者預(yù)后的觀察[1-2]。應(yīng)用全自動(dòng)DNA圖像分析測(cè)定胃黏膜組織細(xì)胞的相關(guān)報(bào)道國(guó)內(nèi)少見(jiàn)[3-4]。為了探討其在胃癌診斷及鑒別診斷中的價(jià)值及臨床作用，本文對(duì)內(nèi)鏡下活檢胃黏膜組織進(jìn)行了全自動(dòng)DNA圖像分析分析，并分析了其與胃癌的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2018年1 月至2019年6月在灤縣人民醫(yī)院行胃鏡檢查的162例患者，其中男性110例，女性52例，年齡39～83歲，平均60.5歲。經(jīng)病理診斷確診的淺表性胃炎37例、慢性萎縮性胃炎38例、疣狀胃炎18例、胃癌69例。在69例胃癌中，高分化17例，中低分化52例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的47例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的22例。

1.2 檢查方法

1.2.1 病理標(biāo)本的采集

由本院經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師負(fù)責(zé)，采用進(jìn)口Olympusv70胃鏡，受檢者左側(cè)臥位，胃鏡下觀察并用活檢鉗鉗取病變部位5～10塊。然后1%福爾馬林液固定、脫水、石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅（HE）染色等步驟后，鏡下觀察其病理結(jié)果。所有標(biāo)本均由2名以上高年資病理醫(yī)師依據(jù)WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)確定診斷。

1.2.2 全自動(dòng)DNA圖像分析分析

受檢者取左側(cè)臥位，醫(yī)師在胃鏡直視下手持特制細(xì)胞刷，用刷頭中央較長(zhǎng)的刷絲刷取病變部位黏膜面，順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，取出細(xì)胞刷，拔下刷頭，浸泡在樣本收集管中，送DNA試驗(yàn)室制片，用Feulgen染色。采用加拿大BC腫瘤研究所提供的全自動(dòng)細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)（AICM）對(duì)染色片中的每一個(gè)細(xì)胞核進(jìn)行掃描分析，根據(jù)每個(gè)細(xì)胞核的123個(gè)核特征參數(shù)值，自動(dòng)進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)，自動(dòng)打印DNA倍體分析直方圖和細(xì)胞點(diǎn)陣圖。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

以測(cè)定細(xì)胞核IOD來(lái)判斷DNA含量。以DNA指數(shù)（DNA index）來(lái)表示DNA的含量。DNA指數(shù)=被測(cè)細(xì)胞DNA IOD值/正常細(xì)胞（G0/G1）DNA IOD平均值DNA定量細(xì)胞學(xué)常用C(content)作為單位來(lái)衡量DNA含量。（1）正常2倍體（DNA定量為2C）細(xì)胞為主，未見(jiàn)異倍體細(xì)胞及異倍體細(xì)胞峰。（2）當(dāng)4C細(xì)胞數(shù)大于被測(cè)細(xì)胞總數(shù)的5%，但未見(jiàn)異倍體細(xì)胞，診斷為增生。（1）和（2）診斷為陰性。（3）出現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上＞5C的細(xì)胞或出現(xiàn)異倍體細(xì)胞峰，診斷為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，全自動(dòng)DNA圖像分析的差異比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全自動(dòng)DNA圖像分析分析

37例淺表性胃炎粘膜中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為16.22%，38例慢性萎縮性胃炎粘膜中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為23.68%，18例疣狀胃炎粘膜中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為22.22%，69例胃癌粘膜中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為95.65%。胃癌中全自動(dòng)DNA圖像分析陽(yáng)性率明顯高于淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、疣狀胃炎的陽(yáng)性率，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），以上結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 全自動(dòng)DNA圖像分析比較（n, %）

2.2 胃癌的分化程度與全自動(dòng)DNA圖像分析的關(guān)系

在17例高分化的胃癌組織中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為64.71%，在52例中低分化的胃癌組織中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為96.15%，全自動(dòng)DNA圖像分析在中低分化胃癌組織中的陽(yáng)性率高于高分化的胃癌組織的陽(yáng)性率，差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與全自動(dòng)DNA圖像分析的關(guān)系

在47例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為97.87%，在22例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率為63.64%，蘭丁細(xì)胞在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的陽(yáng)性率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織的陽(yáng)性率，差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與全自動(dòng)DNA圖像分析的關(guān)系（n, %）

3 討論

人類正常體細(xì)胞具有較恒定的DNA二倍體含量（除肝臟、心肌、男性生殖細(xì)胞外），當(dāng)人體細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，其細(xì)胞核內(nèi)的DNA結(jié)構(gòu)和含量都會(huì)發(fā)生異常變化，DNA含量增多，DNA倍體狀況發(fā)生改變[5-6]，出現(xiàn)DNA倍體異常細(xì)胞。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)、外研究證明，如果DNA含量發(fā)生微小的異常變化，就有可能導(dǎo)致惡性腫瘤；特別是腫瘤細(xì)胞DNA非整倍體是惡性腫瘤的特征性標(biāo)志之一，測(cè)量和分析細(xì)胞DNA含量與倍體對(duì)惡性腫瘤的診斷具有重要價(jià)值。

3.1 全自動(dòng)DNA圖像分析分析

許多研究證實(shí)，DNA倍體變化與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。本中心從2009年起應(yīng)用目前國(guó)際上先進(jìn)的全自動(dòng)DNA圖像分析在消化系統(tǒng)疾病的診斷中，作為胃癌的早期篩查方法。本研究表明全自動(dòng)DNA圖像分析在胃癌組織中的陽(yáng)性率明顯高于其淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、疣狀胃炎、陽(yáng)性率差異比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。全自動(dòng)DNA圖像分析分析，具有客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、敏感性強(qiáng)的特點(diǎn)。因此可以將全自動(dòng)DNA圖像分析診斷方法作為一種常規(guī)的臨床檢測(cè)方法，采用全自動(dòng)DNA圖像分析結(jié)合病理活檢方法來(lái)診斷胃癌[7-8]。

3.2 全自動(dòng)DNA圖像分析與胃癌分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

有研究表明，腫瘤細(xì)胞DNA含量與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，異倍體胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于二倍體胃癌，且在異倍體胃癌，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的個(gè)數(shù)較多，轉(zhuǎn)移的距離亦較遠(yuǎn)。我們分析了全自動(dòng)DNA圖像分析在69例胃癌患者中高分化及中低分化者的陽(yáng)性率，結(jié)果高分化者全自動(dòng)DNA圖像分析的陽(yáng)性率低于中低分化者的陽(yáng)性率，比較有非常顯著性差異（P＜0.05）。該結(jié)果提示全自動(dòng)DNA圖像分析陽(yáng)性的腫瘤可能具有較低的分化程度。因此DNA含量測(cè)定有助于認(rèn)識(shí)腫瘤的生物學(xué)行為。

綜上所述，本研究為細(xì)全自動(dòng)DNA圖像分析在胃癌的診斷提供新的臨床資料床資料，并證實(shí)全自動(dòng)DNA圖像分析分析對(duì)于胃部腫瘤具有較高的敏感性，同時(shí)也為病理的診斷及鑒別診斷提供參考依據(jù)。