藏藥珊瑚通竅丸的質(zhì)量控制方法探討

張曉南 何雨桐 游燕

【摘 要】 目的：在藏藥珊瑚通竅丸的原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上進(jìn)行提高性研究，以期增強(qiáng)了本品質(zhì)量的可控性。方法：采用高效液相色譜法對羥基紅花黃色素A進(jìn)行了含量測定研究，并對其它有利于珊瑚通竅丸質(zhì)量控制水平提高的指標(biāo)進(jìn)行初步探索。結(jié)果：高效液相色譜法能滿足羥基紅花黃色素A的測定要求，依據(jù)藥典現(xiàn)有方法或通則進(jìn)行的其它指標(biāo)的測定也都能得出有指導(dǎo)性意義的結(jié)論。結(jié)論：珊瑚通竅丸中的羥基紅花黃色素A能被以簡便、可靠的方法測定，所得數(shù)據(jù)可為將來質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 藏藥;珊瑚通竅丸;質(zhì)量控制;羥基紅花黃色素A

Abstract：Objective To develop the quality control method of Shanhutongqiao pillon the base of current standards.Method The quantitive analysis of the hydroxysafflor yellow A was determined by high performance liquid chromatography，other detective markers for Improving the Quality control method have being researched also.Results High performance liquid chromatographywas suitable for the requirement of determination，other detective markers leaded to some significant conclusions as well.Conclusion The method is efficient and stable，all the datas can be used in the future quality standards.

Keywords：Tibetan Medicine;Shanhutongqiao Pill;Quality Control;Hydroxysafflor Yellow A

珊瑚通竅丸是迪慶州藏醫(yī)院的院內(nèi)制劑，為傳統(tǒng)藏族驗方，目前現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡單，僅有性狀、薄層鑒別、烏頭堿限量檢查以及丸劑的制劑通則檢查項。為提高其質(zhì)量控制水平，為其進(jìn)一步深入研究打下基礎(chǔ)，對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高進(jìn)行了探索性研究。

珊瑚通竅丸由珊瑚、柯子、獐牙菜、紅花等二十六味藥材組成，原標(biāo)準(zhǔn)沒有收載含量測定項，因此本次研究的重點是珊瑚通竅丸的指標(biāo)性成分含量控制研究。紅花收載于2015版《中國藥典》，味辛、微苦，性溫，歸心、肝經(jīng)。具有通經(jīng)活血、止痛散瘀之功效;可用于痛經(jīng)、經(jīng)閉、惡露不行、癥瘕痞塊、心痛胸痹、瘀滯腹痛、胸脅刺痛、跌打損傷、瘡瘍腫痛[1]。其功效與珊瑚通竅丸開竅、通絡(luò)、止痛相通，主治與珊瑚通竅丸用于“白脈病”：神志不清，身體麻木，頭昏目眩，腦部疼痛，血壓不調(diào)，頭痛，癲癇及各種神經(jīng)性疼痛也有眾多相似之處，可以認(rèn)為紅花是珊瑚通竅丸的主要作用成分，因此選擇紅花作為指標(biāo)性成分含量控制的主要對象。

羥基紅花黃色素A是紅花黃色素中的主要成分[2]，臨床研究表明其具有抗凝血、抗氧化、預(yù)防腦缺血、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)等作用[3-4]，其可能是珊瑚通竅丸的重要有效成分，此次研究依據(jù)藥典紅花項下含量測定對其含量測定方法進(jìn)行探討，以期為進(jìn)一步珊瑚通竅丸功效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供前期基礎(chǔ)。

1 供試品、儀器、藥品與試藥

1.1 供試品 珊瑚通竅丸（迪慶州藏醫(yī)院制，201705-1、201705-2、201705-3）。

1.2 儀器 美國Agilent 1260高效液相色譜儀;SK8200HP型超聲波儀（上海科導(dǎo)）;AG285型電子天平（梅特勒-托利多）。

1.3 藥品與試藥 對照品羥基紅花黃色素A（批號：111637-201810，純度93.1%）由中國食品藥品檢定研究院提供;西紅花苷-Ⅰ（批號：111588-201704 純度88.4%）由中國食品藥品檢定研究院提供;所用流動相乙腈、甲醇為色譜純，處理樣品的甲醇、乙醇、磷酸均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 羥基紅花黃色素A的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Agela Venusil MP C18柱（5μm，4.6mm×250mm）;流動相：以甲醇-乙腈-0.7%磷酸（23∶[KG-*3/5]5∶[KG-*3/5]72）等度洗脫，流速：1.0mL/min;檢測波長：403nm;進(jìn)樣量：10μL。

2.1.2 溶液的制備 對照品溶液的制備：取對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解成每1mL中含羥基紅花黃色素A 0.1mg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備：取本品粉末約1.0g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密量取25%甲醇25mL，稱定重量，超聲30min（功率300W，頻率40kHz），放冷，再稱重，以25%甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.3 專屬性及系統(tǒng)適應(yīng)性 試驗按2.1.2溶液制備方法制備供試品溶液和陰性供試品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣對照品、供試品、陰性供試品各10μL。結(jié)果如圖1所示。由色譜圖可以看出供試品溶液色譜中與對照品溶液色譜中有保留時間一致的色譜峰出現(xiàn)。

2.1.4 線性關(guān)系考察精密 稱取羥基紅花黃色素A（批號：111637-201810，純度93.1%）22.52mg，置25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得對照品儲備液（其中羥基紅花黃色素A 0.8386mg/ml），精密吸取對照品儲備液，稀釋，進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量10μL，記錄峰面積，測得結(jié)果見表1。以含量（X）對峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=3722.39X-35.15，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，羥基紅花黃色素A在0.02328～2.348μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 準(zhǔn)確度試驗

2.1.5.1 對照品溶液制備 精密稱取羥基紅花黃色素A（批號：111637-201810，純度93.1%）22.52mg至25mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為羥基紅花黃色素A 0.8386mg/mL的對照品溶液，備用。

2.1.5.2 加樣回收方法 精密稱取6樣品（批號：201705-1，已測羥基紅花紅色素A含量為0.088%），每份約0.5g，分別加入以上對照品溶液（加入量見表2），按2.1.2方法同法處理，所得溶液作為供試品溶液進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表2。羥基紅花黃色素A回收率為90.67%～92.70%，能滿足要求（要求為90%～108%）[1]，說明方法準(zhǔn)確度良好。

2.1.6 精密度試驗

2.1.6.1 儀器精密度 取配制好的對照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量10L，連續(xù)進(jìn)樣6針，保留時間及峰面積的RSD值均小于2%，結(jié)果表明本法具有良好的儀器精密度。

2.1.6.2 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批號（批號：201705-1）的樣品6份，按2.1.2方法制備，并按2.1.1方法測定。測得羥基紅花黃色素A平均含量為0.088%，RSD為0.71%，表明本法具有良好的重復(fù)性。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液按照2.1.1方法測定，分別于0、4、7、10、24h進(jìn)樣，計算羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果RSD均小于3%，說明供試品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.1.8 樣品測定 測定3個不同批次的樣品中的羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果見表3。

2.2 西紅花皂苷Ⅰ的含量測定

2.2.1 方法 珊瑚通竅丸的處方中含有貴細(xì)藥材西紅花，為進(jìn)一步加強(qiáng)其質(zhì)量的可控性，本次研究依據(jù)《中國藥典》2015年版一部 二十五味珍珠丸項下的含量測定方法，測定了其標(biāo)志性成分西紅花皂苷Ⅰ[1]。測定方法和藥典一致，高效液相色譜儀為美國Agilent 1100型，色譜柱為：Agela Venusil MP C18柱（5μm，4.6mm×250mm）。

2.2.2 結(jié)果 實驗所得色譜圖顯示：珊瑚通竅丸中的西紅花皂苷Ⅰ在此方法下能得出分離度達(dá)到1.5，理論塔板數(shù)不低于3000的色譜峰，且陰性樣品無干擾，初步確定能滿足含量測定的要求。測定結(jié)果見下表4。

3 討論

藏藥制劑處方藥味常常達(dá)到20味以上，且其中含有眾多礦物藥、動物藥和民族民間藥材的情況，含量測定指標(biāo)性成分的選擇，應(yīng)盡量與全方的功效相呼應(yīng)，優(yōu)先選擇藥理作用與處方功效接近的成分作為定量的目標(biāo)，才最有利于質(zhì)量控制手段發(fā)揮最大的實際控制作用。如何選擇含量測定的指標(biāo)性成分、所選成分和處方的功效對應(yīng)性研究成為了質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提高性研究的難點和重點，亟待加強(qiáng)研究。

在此次研究中，將羥基紅花黃色素A作為質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分就是針對以上問題的有益嘗試，但羥基紅花黃色素A與全處方功效的對應(yīng)性推斷是基于已有文獻(xiàn)[1，3-4]，而未進(jìn)行實驗研究，這是本次研究的一大遺憾之處，在將來的工作中會盡力完善。

由本次研究的實驗結(jié)果可以得出結(jié)論：珊瑚通竅丸中的羥基紅花黃色素A能被以簡便可行的方法定量測定，且陰性樣品不出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰，已測定的3個批次中的羥基紅花黃色素A含量基本持平，能夠反映紅花藥材投料與否和投料量的一致性，羥基紅花黃色素A可以收載為珊瑚通竅丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定項。

此次研究還進(jìn)行了含量測定的另一成分西紅花皂苷Ⅰ是處方中貴細(xì)藥材西紅花的標(biāo)志性成分，對其進(jìn)行檢測是為了防止出現(xiàn)惡意減投或不投料，可將其列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項，分析方法學(xué)驗證研究在將來的工作中會進(jìn)一步完善。為使檢查項更加全面，本次研究還進(jìn)行了黃曲霉毒素的含量測定和微生物限度檢查，結(jié)果都能滿足規(guī)定。

參考文獻(xiàn)

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