老年乳腺癌組織中HER-2、GCDFP15及Calponin表達與術后復發轉移的關系

簡華勇 李廷超 (遵義醫科大學第三附屬醫院(遵義市第一人民醫院) ，貴州 遵義 563000)

手術是乳腺癌常用治療手段，手術本身具有較好干預效果，可有效切除病灶，延長患者生存時間，但仍有部分患者術后會發生復發、轉移，影響整體治療效果，增加預后風險〔1〕。因此，早期預測乳腺癌術后復發轉移風險，對指導早期干預，減少術后復發轉移意義重大。隨著研究深入，人表皮生長因子受體(HER)2被證實可作為乳腺癌的獨立預后因素，且有研究顯示該基因表達情況與淋巴結轉移存在密切聯系，可能參與了術后癌細胞復發轉移〔2〕。巨囊性病液體蛋白(GCDFP)15為乳腺囊液組成蛋白，因正常乳腺導管小葉基本不分泌GCDFP15，且既往研究顯示該蛋白對乳腺癌具有較高診斷價值，故猜測GCDFP15可能參與了術后癌細胞的復發與轉移〔3,4〕。鈣調理蛋白(Calponin)屬于細胞骨架類蛋白，以往的研究著重觀察鈣蛋白在細胞收縮方面的作用，但近年來研究顯示，Calponin在腫瘤發展過程中也有重要作用〔5〕。本研究旨在分析HER-2、GCDFP15及Calponin表達與老年乳腺癥患者術后復發轉移的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧分析遵義市第一人民醫院2017年6月至2020年6月經病理組織確診并完成治療與隨訪的80例老年乳腺癌組織標本、61例結節性乳腺囊腫組織標本及41例癌旁正常組織標本。乳腺癌組年齡63～75歲，平均(69.51±3.52)歲；體重指數(BMI)17.6～24.8 kg/m2，平均(21.26±1.25)kg/m2。結節性乳腺囊腫組年齡63～76歲，平均(69.58±3.42)；BMI 17.7～24.9 kg/m2，平均(21.36±1.34)kg/m2。癌旁正常組年齡63～74歲，平均(68.95±3.49)歲；BMI 17.5～24.6 kg/m2，平均(21.06±1.54)kg/m2。3組基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2入選標準 納入標準：①乳腺癌符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2015版)》〔6〕中乳腺癌診斷標準，結節性乳腺囊腫患者均經超聲檢查證實，且均經病理組織切片確診；②年齡≥60周歲；③臨床影像學資料、實驗室檢查資料、病例資料均完整。排除標準：①心、肝、腎等重要臟器功能異常；②合并其他惡性腫瘤；③凝血功能異常；④合并免疫系統疾病。

1.3免疫組化法 取手術標本用4%中性甲醛固定液進行固定，石蠟包埋處理后，常規切4 μm切片；將石蠟切片用二甲苯脫蠟后，添加適量5%雙氧水，于常溫環境下孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液孵育5 min；孵育結束用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)，置入含5% 山羊血清抗體內封閉，10 min后直接滴加一抗(鼠抗人HER-2抗體、單克隆鼠抗GCDFP15抗體、鼠抗人Calponin抗體，均購自基因科技股份有限公司)，于4℃冰箱內孵育過夜后，用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)；滴加生物素標記的二抗(購自基因科技股份有限公司)，于37℃環境下孵育30 min，用蒸餾水沖洗3次(5min/次)；滴加用二代辣根酶標記的工作液體，于37℃環境下孵育10 min，孵育結束后用蒸餾水沖洗3次(5 min/次)；顯色后用酒精進行脫水，二甲苯透明及樹膠封片，最后于顯微鏡(購自日本奧林巴斯公司，型號：BX53)下觀察染色結果。

1.4結果判讀 ①HER-2陰性：無癌細胞染色或≤10%癌細胞呈現不完整細胞膜染色；陽性：>10%的癌細胞呈不完整或完整的細胞膜染色；染色強度微弱、一般或強。②GCDFP15陰性：細胞質內無染色；陽性：細胞質著色呈棕黃色，且陽性細胞占比>5%。③Calponin陰性：肌上皮細胞或部分間質細胞的細胞質無著色，且無陽性細胞；陽性：肌上皮細胞或部分間質細胞的細胞質著色，可見陽性細胞。

1.5基線資料收集法 設計臨床資料調查問卷，記錄老年乳腺癌患者基線資料〔包括年齡、BMI、合并癥(糖尿?。嚎崭寡撬?7.0 mmol/L；高血壓：收縮壓水平≥140 mmHg，舒張壓水平≥90 mmHg；高脂血癥：低密度脂蛋白膽固醇水平>130 mg/dl)、臨床分期(Ⅰ～Ⅳ期)等〕及實驗室指標〔HER-2(陽性、陰性)、GCDFP15(陽性、陰性)、Calponin(陽性、陰性)〕。

1.6統計學方法 采用SPSS23.0軟件進行Shapiro-Wilk正態性檢驗、單因素方差分析、χ2檢驗、秩和檢驗及多項Logistic回歸分析；繪制受試者工作特征(ROC)曲線，并計算曲線下面積(AUC)值，AUC值>0.90表示預測性能較高，0.71～0.90表示有一定的預測性，0.50～0.70表示預測性能較差，以檢驗HER-2、GCDFP15、Calponin表達預測術后淋巴結轉移的價值。

2 結 果

2.13組HER-2、GCDFP15、Calponin表達比較 乳腺癌組、結節性乳腺囊腫組HER-2與GCDFP15陽性率高于癌旁正常組，Calponin陽性率低于癌旁正常組，乳腺癌組HER-2與GCDFP15陽性率高于結節性乳腺囊腫組，Calponin陽性率低于結節性乳腺囊腫組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 3組HER-2、GCDFP15、Calponin表達比較〔n(%)〕

2.2復發轉移組與未復發轉移組基線資料比較 80例老年乳腺癌患者隨訪結束，24例(30.00%)發生復發轉移。兩組年齡、BMI、合并疾病、臨床分期差異無統計學意義(P>0.05)；復發轉移組HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性均高于未復發轉移組，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性可能與老年乳腺癌患者術后復發轉移有關(P>0.05)。見表2。

組別n年齡(歲)BMI(kg/m2)合并疾病〔n(%)〕糖尿病(n=29)高血壓(n=27)高脂血癥(n=25)HER-2陽性〔n(%),n=52〕復發轉移組2469.24±3.2421.34±1.259(31.03)8(29.63)6(24.00)20(38.46)無復發轉移組5669.62±3.2521.22±1.2420(68.97)19(70.37)19(76.00)32(61.54)t或χ2值0.3530.3960.0230.0030.6235.065P值0.7250.6930.8790.9590.4300.024組別n臨床分期〔n(%)〕Ⅰ期(n=13)Ⅱ期(n=23)Ⅲ期(n=29)Ⅳ期(n=15)GCDFP15陽性〔n(%),n=57〕Calponin陽性〔n(%),n=22〕復發轉移組245(38.46)6(26.09)10(34.48)3(20.00)21(36.84)2(9.09)無復發轉移組568(61.54)17(73.91)19(65.52)12(80.00)36(63.16)20(90.91)χ2/P值0.636/0.5254.420/0.0366.317/0.012

2.3HER-2、GCDFP15、Calponin表達對老年乳腺癌術后復發轉移影響的回歸分析 將HER-2、GCDFP15、Calponin表達作為自變量并賦值，HER-2陽性=1，陰性=0；GCDFP15陽性=1，陰性=0；Calponin陰性=1，陽性=0。將老年乳腺癌患者術后復發轉移情況作為因變量(1=復發轉移，2=未復發轉移)，經多項Logistic回歸分析結果顯示，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性是老年乳腺癌患者術后復發轉移的影響因素(OR>1，P>0.05)。見表3。

表3 術后復發轉移的影響因素多因素分析結果

2.4HER-2、GCDFP15、Calponin表達預測老年乳腺癌患者術后復發轉移的價值 將術后復發轉移情況作為狀態變量(1=復發轉移，2=未復發轉移)，將HER-2、GCDFP15、Calponin表達作為檢驗變量(HER-2：1=陽性，0=陰性；GCDFP15：1=陽性，0=陰性；Calponin：1=陰性，0=陽性)，繪制ROC曲線(圖1)顯示，HER-2陽性、GCDFP15陽性、Calponin陰性預測術后復發轉移的AUC分別為0.807(AUC 95%CI：0.696～0.918，P<0.001)、0.857(AUC 95%CI：0.762～0.952,P<0.001)、0.833(AUC 95%CI：0.380～0.928，P<0.001)，均>0.80，有一定預測價值。

圖1 HER-2、GCDFP15、Calponin表達預測老年乳腺癌患者術后復發轉移風險ROC曲線

3 討 論

作為女性常見惡性腫瘤，乳腺癌的發病機制尚未明確，多認為與遺傳、乳腺良性疾病未治愈等因素有關〔7〕。目前臨床治療乳腺癌多采用外科手術，手術雖可將腫瘤病灶有效切除，但術后仍有復發轉移風險，不利于患者預后〔8〕。因此，早期預測乳腺癌術后復發轉移風險是臨床早期干預，改善患者預后的關鍵。

隨著分子生物技術發展，分子病理學在乳腺癌的診斷、干預及預后評估中得到重視〔9〕。HER-2作為乳腺癌基因，其在乳腺癌中的作用已得到證實，且現已成為腫瘤靶向藥物治療新靶點〔10〕。HER-2過表達除了會增加腫瘤細胞侵襲能力外，還會促進淋巴血管新生，增加淋巴結轉移風險，同時可降低腫瘤細胞對化療藥物敏感性，影響整體干預效果，繼而增加術后復發風險〔11，12〕。本研究結果提示乳腺癌患者病理組織中HER-2表達增高；經回歸分析并繪制ROC曲線結果證實HER-2過表達參與了乳腺癌術后復發轉移。GCDFP15多被作為大汗腺標志物，主要由大汗腺、泌乳腺等腺體分泌而來，因多種乳腺病變均存在大汗腺分化表現，且有研究顯示乳腺癌組織中GCDFP15過表達，故GCDFP15被臨床作為乳腺癌診斷特異性指標〔13，14〕。因乳腺癌術后復發轉移可能會影響乳腺囊液分泌，繼而影響GCDFP15表達情況，故猜測可將GCDFP15作為乳腺癌術后復發轉移風險的預測指標〔15〕。作為細胞骨架類蛋白，Calponin根據電點的不同可分為H1-Calponin、H2-Calponin、H3-Calponin 3種亞型，其中H2-Calponin廣泛存在于內皮細胞、平滑肌細胞等細胞中〔16〕。有研究顯示，H2-Calponin表達增加是腫瘤預后的一個積極因素〔17〕。王華等〔18〕研究發現，下調的H2-Calponin可促進食管鱗癌細胞增殖、轉移。由此可見，Calponin陰性可能會增加乳腺癌術后復發轉移風險。本研究結果提示乳腺癌患者GCDFP15表達增加，Calponin表達下調；經回歸分析并繪制ROC曲線結果證實GCDFP15、Calponin表達也與老年乳腺癌術后復發轉移有關，且可作為乳腺癌術后復發轉移風險的另一預測指標。

綜上，老年乳腺癌患者術后仍有復發轉移風險，可能與組織中HER-2過表達、GCDFP15過表達、Calponin表達下調有關，檢測老年乳腺癌患者HER-2、GCDFP15、Calponin表達，對預測患者術后復發轉移風險與指導早期防治干預計劃擬定有積極意義。