CT分級聯合血清miR-29c對重癥胰腺炎預后評估的研究

鄭業錕

【摘要】 目的：探討CT分級聯合血清微小RNA-29c（miR-29c）對重癥胰腺炎（SAP）預后的評估作用。方法：回顧性分析2015年6月-2019年11月于本院就診的139例SAP患者的資料。根據患者預后結果分為生存組108例和死亡組31例。收集患者CT影像學資料，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）法檢測各組血清miR-29c水平，采用logistic回歸分析影響SAP患者死亡的危險因素，采用ROC曲線分析CT分級聯合血清miR-29c對SAP不良預后的預測價值。結果：死亡組D級患者所占比例低于生存組，E級患者所占比例高于生存組，差異有統計學意義（P<0.05）。死亡組SAP患者血清miR-29c水平低于生存組，差異有統計學意義（P<0.05）。兩組白細胞、紅細胞、血紅蛋白、白蛋白、C反應蛋白及血淀粉酶指標比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;死亡組SAP患者APACHEⅡ評分高于生存組，差異有統計學意義（P<0.05）。logistic回歸分析結果顯示，APACHEⅡ評分、CT分級、血清miR-29c水平均是影響SAP患者死亡的獨立危險因素（P<0.05）。ROC曲線分析結果顯示，CT分級預測SAP不良預后的曲線下面積為0.626，靈敏度為61.3%，特異度為63.9%。血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積為0.966，靈敏度為96.8%，特異度為88.9%。CT分級聯合血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積為0.972，靈敏度為96.8%，特異度為90.7%。結論：CT分級、血清miR-29c均是影響SAP患者死亡的獨立危險因素，應用CT分級聯合血清miR-29c共同評估SAP患者的預后具有一定臨床指導意義。

【關鍵詞】 重癥胰腺炎 微小RNA-29c CT分級 預后

Study on Evaluation of CT Grading Combined with Serum miR-29c in Prognosis of Severe Pancreatitis/ZHENG Yekun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（12）： 00-010

[Abstract] Objective： To evaluate the effect of CT grading combined with serum microRNA-29c （miR-29c） in the evaluation of prognosis of severe pancreatitis （SAP）. Method： Data of 139 cases of SAP patients admitted to our hospital from June 2015 to November 2019 were retrospectively analyzed. According to the prognosis， the patients were divided into survival group （108 cases） and death group （31 cases）. CT imaging data were collected， and the level of serum miR-29c in each group was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. Logistic regression was used to analyze the risk factors affecting the mortality of patients with SAP， and ROC curve was used to analyze the predictive value of CT grading combined with serum miR-29c for poor prognosis of SAP. Result： The proportion of grade D patients in the death group was lower than that in the survival group， and the proportion of grade E patients was higher than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The serum miR-29c level of SAP patients in the death group was lower than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in WBC， RBC， hemoglobin， albumin， C-reactive protein and blood amylase between the two groups （P>0.05）. The APACHEⅡ score of SAP patients in the death group was higher than that in the survival group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Logistic regression analysis showed that APACHEⅡ score， CT grade and serum miR-29c level were all independent risk factors affecting the death of SAP patients （P<0.05）. The results of ROC curve analysis showed that the area under the curve of CT grading to predict the poor prognosis of SAP was 0.626， the sensitivity was 61.3%， and the specificity was 63.9%. The area under the curve of serum miR-29c for predicting poor prognosis in SAP was 0.966， with a sensitivity of 96.8% and a specificity of 88.9%. The area under the curve of CT grading combined with serum miR-29c for predicting poor prognosis in SAP was 0.972， with a sensitivity of 96.8% and a specificity of 90.7%. Conclusion： CT grading and serum miR-29c are both independent risk factors affecting the death of patients with SAP， and the application of CT grading combined with serum miR-29c to evaluate the prognosis of patients with SAP has certain clinical guiding significance.

[Key words] Severe pancreatitis microRNA-29c CT grading Prognosis

First-authors address： The Sixth Peoples Hospital of Huizhou， Huizhou 516200， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.12.002

重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis， SAP）是因急性胰腺炎由局部發展累及全身器官及系統而起，伴有臟器功能障礙或出現壞死、膿腫或假性囊腫等局部并發癥，或兩者兼有，多表現為上腹部明顯壓痛、肌緊張、腹脹、腸鳴音減弱或消失等，該病病死率高，臨床治療關鍵是及早發現和診斷，在疾病早期對病情嚴重程度及預后情況進行評估，對降低SAP患者病死率具有重要意義[1-2]。CT分級評分系統是目前臨床上應用最為廣泛的診斷SAP最有效的方法，其對預后估計主要是根據胰腺局部的大體病理變化，但須與患者的全身情況的急性生理與慢性健康評分（acute physiology and chronic health evaluation，APACHEⅡ）等評分系統綜合分析，較為客觀[3-4]。目前，尚未有較高敏感性和特異性的生物學指標用于指導SAP的診斷和預后評估，因此為進一步提高SAP的診治成功率，急需尋找能有效判斷病情、推測預后的生物學指標。研究表明，微小RNA（microRNA或 miRNA）與惡性腫瘤的預后存在相關性，在炎癥性疾病中的作用逐漸凸顯。miRNA在消化系統疾病中已有較多研究，且與急性胰腺炎的發生、發展密切相關，可以用作預測急性胰腺炎嚴重程度的參考指標[5-6]。miR-29c是重要的miRNAs，其在多種惡性腫瘤疾病中具有重要作用，是腫瘤發生發展的重要因素，但其在胰腺炎中變化情況的研究鮮有報道。故本研究通過回顧性分析，探討miR-29c與SAP患者預后的關系，并探討CT分級聯合血清miR-29c對SAP預后評估的臨床價值，以期為SAP預后判斷提供參考依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2015年6月-2019年11月于本院就診的139例SAP患者的資料。（1）納入標準：所有患者均符合SAP亞特蘭大分類新標準診斷共識診斷依據[7];48 h內完善腹部CT檢查。（2）排除標準：患有胰腺癌及其他胰腺疾病;臨床資料不完整。根據患者預后結果分為生存組108例和死亡組31例。本研究經本院道德倫理委員會批準通過，符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

1.2 方法 （1）主要試劑與儀器：SYBR Gren RCR master mix試劑購自天根生化科技有限公司;qPCR Arrays購自廣州復能基因有限公司;DEPC購自美國Gibo公司;mir Vana PAPIS Kit試劑盒購自德國Qiagen公司;紫外分光光度計購自上海舜宇恒科儀器有限公司;低溫高速離心機購自科大創新股份有限公司;qRT-PCR儀購自美國Bio-Rad公司;酶標儀購自德國Benchmark公司;引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。（2）實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time PCR， qRT-PCR）法檢測血清miR-29c水平，所有研究對象均于入院時抽取空腹靜脈血5 mL，

3 000 r/min離心30 min后分離上清液，即血清。以RNA試劑盒提取血清樣本中總RNA，紫外分光光度法鑒定RNA純度和完整性，將血清RNA按照反轉錄試劑盒說明書逆轉錄合成cDNA，取逆轉錄產物進行qPCR反應。miR-29c正向引物序列5-GTAGCACCATTTGAAATCAG-3，反向引物序列5-TTGGCACTAGCACATT-3，以U6作為內參基因，正向引物序列5-CTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3，反向引物序列：5-GCTTCGGCAGCACATATAC-3。按照SYBR Gren RCR master mix試劑說明配置反應體系，qRT-PCR反應體系20 μL：miScript SYBR? Green Mix 10 μL，cDNA 4.0 μL，上下游引物（10 μM）各1 μL，ddH2O 4.0 μL。選擇qPCR反應程序上機，擴增條件：95 ℃，15 min;94 ℃，15 s;60 ℃，30 s;70 ℃，35 s;共40個循環，每例樣本均經3孔重復，反應結束，收集數據進行分析，以2-??CT法計算血清miR-29c表達量。

1.3 判定標準 CT分級標準根據患者CT影像特征分為A、B、C、D、E 5個等級，A級：胰腺及胰周顯示正常;B級：胰腺局限性或彌漫性增大，胰內灶性積液、輪廓不規則、密度不均、胰管擴張、胰周無滲出表現;C級：除B級表現外，胰腺增大，炎癥累及胰周，胰周脂肪層模糊、水腫或脂肪層消失;D級：除C級表現外，存在1個間隙積液或有蜂窩組織炎;E級：除D級表現外，存在2個或多個間隙積液，或胰內或胰周有氣泡出現，膿腫形成。

1.4 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，影響SAP患者死亡的因素分析采用logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 生存組108例，男75例，女33例，平均年齡（51.75±6.24）歲。死亡組31例，男21例，女10例，平均年齡（53.32±7.04）歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 生存組與死亡組SAP患者CT評分級比較 死亡組D級患者所占比例低于生存組，E級患者所占比例高于生存組，差異有統計學意義（字2=6.280，P=0.012），見表1。

2.3 生存組與死亡組SAP患者血清miR-29c水平比較 生存組的血清miR-29c水平為（2.41±0.72），死亡組的血清miR-29c水平為（1.04±0.24），死亡組SAP患者血清miR-29c水平低于生存組，差異有統計學意義（t=10.406，P<0.05）。

2.4 生存組與死亡組SAP患者臨床資料比較 兩組的白細胞、紅細胞、血紅蛋白、白蛋白、C反應蛋白及血淀粉酶指標比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;死亡組SAP患者APACHEⅡ評分高于生存組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.5 logistic回歸分析影響SAP患者死亡的危險因素 以APACHEⅡ評分、CT分級、血清miR-29c水平為自變量，以SAP患者生存情況為因變量，進行logistic回歸分析，結果顯示，APACHEⅡ評分、CT分級、血清miR-29c水平均是影響SAP患者死亡的獨立危險因素（P<0.05），見表3。

2.6 CT分級聯合血清miR-29c對SAP不良預后的預測價值 ROC曲線分析結果顯示，CT分級預測SAP不良預后的曲線下面積為0.626[95%CI（0.513，0.738），P=0.033]，靈敏度為61.3%，特異度為63.9%。血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積為0.966[95%CI（0.939，0.993），P=0.000]，靈敏度為96.8%，特異度為88.9%。CT分級聯合血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積為0.972[95%CI（0.947，0.997），P=0.000]，靈敏度為96.8%，特異度為90.7%。見圖1。

3 討論

SAP是一種臨床常見的自身消化性急重癥，既表現為胰腺本身病變，又表現為胰周其他器官病理改變，以及腹膜后、腹膜下等多間隙受累，是一個既有局部又有全身反應的復雜病理生理過程，其發病原因與膽石癥、高脂血癥及過度飲酒等有關，其中SAP的誘發與膽系疾病高度相關，暴飲暴食是主要的誘因之一。SAP可以引起胰腺壞死及其他器官衰竭等多種并發癥，病情兇險，易反復，發展迅速，病死率高，給患者生存生活造成嚴重威脅，因此早期診斷和精準判斷SAP嚴重程度，可使SAP患者得到及時恰當有效的治療，從而改善預后[8-10]。

CT能夠清楚地顯示胰腺及胰周組織病理形態改變，臨床可根據CT影像學中胰腺形態變化、胰周滲液等變化評估疾病預后。CT分級可為SAP的診斷提供直觀形態學依據，是診斷胰腺壞死的金標準，靈敏度高，可以反映胰腺本身形態變化，胰腺增大及胰腺周邊是否有出血、壞死等病變情況，并能顯示胰周間隙等遠處多間隙擴散范圍，準確地對胰腺壞死的存在和范圍進行描述，對胰腺實質的病變做出評分，CT分級高者，SAP多間隙擴散范圍大，局部并發癥的出現概率較高，對SAP治療及預后的評估具有重要意義[11-12]。本研究結果顯示，SAP患者的CT分級集中在D級和E級，死亡組D級患者所占比例低于生存組，E級患者所占比例高于生存組，差異有統計學意義（P<0.05），表明SAP患者病情的嚴重程度與CT分級具有一定的關聯性，可能為評估SAP患者預后提供依據。進一步ROC曲線分析結果顯示，CT分級預測SAP不良預后的曲線下面積、靈敏度、特異度分別為0.626、61.3%、63.9%，表明CT分級對SAP患者不良預后具有一定預測價值。但是，CT分級側重于單純影像學表現情況，對患者臨床表現及生化情況不做評價，單獨CT分級指標對疾病預后進行判斷存在片面性，在疾病早期，可結合臨床指標和生物學指標共同評估SAP患者預后，以更好地判斷預后并及時有效地指導治療[13-15]。miRNA是一類內源性非編碼小分子RNA，可參與細胞的重要生物學過程，在胚胎發育、細胞增殖、細胞分化、細胞凋亡以及機體生長代謝等過程具有重要調控作用，其異常表達可能與某些疾病有關。另外，miRNA表達具有顯著組織特異性和穩定性，可作為某些疾病的生物標志物，近年研究表明，miRNA在胰腺疾病的發生發展過程中占據重要地位，對消化道疾病診斷的靈敏度及準確性較高，具有作為生物標記物的潛能[16-18]。

miR-29c是miR-29家族成員之一，研究表明

miR-29c在多種癌組織中如結腸癌、胃癌、白血病等呈下調表達[19-20]，與腫瘤發生發展和轉移具有明顯相關性，具有抑制腫瘤細胞增殖、轉移、耐藥等作用，并可作為判斷惡性腫瘤預后的重要指標。本研究結果顯示，死亡組SAP患者血清miR-29c水平顯著低于生存組，差異有統計學意義（P<0.05），表明血清miR-29c水平可能作為評價SAP患者的重要預后指標。本研究通過比較存活組和死亡組SAP患者的CT分級和血清miR-29c水平，表明CT等級越高、血清miR-29c水平越低，病死率越高，預后越差，本研究logistic回歸分析結果顯示，APACHEⅡ評分、CT分級、血清miR-29c均是影響SAP患者死亡的獨立危險因素。進一步ROC曲線分析結果顯示，血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積、靈敏度、特異度分別為0.966、96.8%、88.9%，表明血清miR-29c對SAP患者不良預后具有較高預測價值。CT分級聯合血清miR-29c預測SAP不良預后的曲線下面積、靈敏度、特異度分別為0.972、96.8%、90.7%，表明CT分級聯合血清miR-29c對SAP患者不良預后預測價值較高，推測兩者聯合對預測SAP患者的預后具有重要臨床意義。

綜上所述，CT分級、血清miR-29c均是影響SAP患者死亡的獨立危險因素，應用CT分級聯合血清miR-29c對SAP患者不良預后具有較高預測價值。由于本研究的局限性，樣本數量較少，后期應擴大樣本數量，進一步探究CT分級聯合血清miR-29c評估SAP預后的臨床價值。

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（收稿日期：2021-02-18） （本文編輯：姬思雨）