IL-39 在急性冠狀動脈綜合征中的表達水平及意義

李建民，王 斌，劉 玲，王葉寶，王立春

(江蘇省泰州市人民醫院心內科，江蘇 泰州 225300)

大量研究顯示，動脈粥樣硬化(AS)不僅僅是脂質的積累，也是一種炎性疾病[1-2]。炎性反應在ACS的發生、發展和心室重構中起著重要作用[3-5]。抗炎性反應治療被認為是治療動脈粥樣硬化和ACS的新的希望。有最新的研究顯示，給予ACS患者150 mg/3個月的白介素-1β單克隆抗體卡那單抗(canakinumab)，與對照組相比，隨訪2年，顯著降低了心血管事件的復發率，而與血脂水平降低無關[6]。

IL-39是IL-12家族的新發現的家族成員[7-8]。有研究顯示，它在胰腺癌的疾病發展過程中可能促進炎性反應的發生[9]。同時有研究顯示，在角質細胞中，IL-39可以抑制炎性反應并促進傷口愈合[10]。而在ACS患者中血漿IL-39的水平及其在ACS中的潛在作用仍有待研究。

IL-12家族成員其在炎性反應中作用不一，IL-6作為公認明確的促進炎性因子[11]，而IL-35被認為是一種抑制炎性因子[12，13]。在本研究中，檢測患者血漿IL-6、IL-35、IL-39的水平，并研究其與ACS其他參數的相關性，包括血漿脂蛋白、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶MB(CK-MB)和左心室射血分數(LVEF)。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2018年6月～2019年6月江蘇省泰州市人民醫院150例冠狀動脈造影的患者。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。將其分為三組：對照組52例為冠狀動脈正常者，不穩定型心絞痛組(UAP)組38例為不穩定型心絞痛患者，急性心肌梗死組(AMI)60例為急性心肌梗死患者。按美國心臟協會/美國心臟病學會的ACS指南來識別UAP患者和AMI患者。60例AMI患者的特征均符合世界衛生組織的診斷標準和中國醫學會的指南，包括持續30 min以上的胸痛，心電圖動態變化明顯而明確，心肌酶動態變化。在本文中，UAP組和AMI組共同組成了ACS組。排除標準：①急性或慢性傳染病和自身免疫性疾病;②心肌病和瓣膜性心臟病;③肝臟疾病，腎功能不全，消化系統疾病或血液系統疾病;④甲狀腺功能障礙或癌癥;⑤最近的手術或外傷史;⑥既往有心肌梗死和支架植入病史;⑦他汀類藥物治療史超過一周。從每位患者獲得書面知情同意書。該研究得到中國江蘇省臺州市人民醫院倫理委員會的批準，批準文號為“[2018]TZRY012”。

身穿輕便衣服的患者用電子秤稱重，精確度為0.1 kg，并通過便攜式測距儀以0.1 cm的精確度赤腳測量身高，計算每個患者的BMI(BMI=kg/m2)。每位患者的血壓通過標準的校準血壓計連續測量3次，并將平均值作為患者的血壓。入院后第2天，使用IE 33超聲檢查儀(菲利普斯，埃因霍溫，荷蘭)帶有成人探針對患者進行檢查，并通過面積長度法從心尖四腔視圖測量LVEF。

1.2方法

1.2.1血液準備：入院后24 h內收集每位患者的空腹靜脈血，檢測尿酸(UA)、總膽固醇(TC)(酶法)、三酰甘油(TG)(酶法)、血糖(GLU)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(直接方法)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)(直接方法)。并通過橈動脈穿刺收集所有患者的動脈血。血液在半小時內離心，-80℃保存。

采用雙抗夾心法ELISA檢測：①包被：用Ebi3抗體25 μl，加10 ml緩沖液使終濃度為25 μg/ml。向酶標板各實驗孔加入50 μl，封板，4℃孵育過夜。②封閉：用PBS緩沖液沖洗3次，加入200 μl封閉液，37℃孵育1 h。用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次；拍干板內液體后室溫、晾干，封口膜封板，-20℃保存。③加樣：向待測孔內加入120 μl PBS，再加40 μl待測樣品，向陽性對照孔內加入198 μl PBS，再加2 μl 100 μl/ml標準品，梯度稀釋樣品與標準品。37℃孵育1 h。④加二抗：用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次，向酶標板各實驗孔中加入100 μl稀釋后的二抗(二抗P19 1 μl加5 ml PBS)，37℃孵育30 min。⑤顯色：用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次，向酶標板各實驗孔中加入50 μl TMB，37℃孵育15 min，向酶標板各實驗孔中加入50 μl終止液(0.25M HCl)。⑥比色：酶標儀450 nm處讀取吸光度值。ELISA法檢測了IL-6和IL-35，試劑來自Santa Cruz Company。

2 結果

2.1基線特征：三組年齡、收縮壓、空腹血糖、CK、CK-MB、LVEF比較，差異有統計學意義(P<0.05)。兩兩比較結果：身高、體重、BMI、LDL、TG、LVEDD兩兩比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組一般資料比較

2.2三組血清IL-39表達比較：UAP和AMI組血清IL-39均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；UAP組和AMI組之間的IL-39水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表2、圖1。

表2 三組IL-39、IL-35和IL-6的表達比較

圖1 對照組、UAP和 AMI組之間IL-39的差異

2.3IL-39與血清中其他因子之間的相關性：IL-39在所有患者中均與IL-35、收縮壓和HDL呈正相關，而與IL-6、CK、CK-MB、年齡、GLU呈負相關，其中與IL-35正相關最高，與IL-6負相關最高。見表3。

表3 血清中IL-39與其他因素的相關性

2.4ACS組中IL-39與IL-35相關(r=0.239，P=0.018)，如圖2所示。

圖2 ACS組中IL-39和IL-35的相關性

2.5不同發作時間下IL-39的表達：在AMI組中，根據發病時間分組，發現IL-39的表達先下降然后上升，但差異無統計學意義(P>0.05)。表4。

表4 不同發作時間IL-39表達

2.6AMI患者抽吸組和非抽吸組比較：其IL-39均差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 抽吸組與非抽吸組各臨床指標比較

整理左前降支閉塞的AMI組共19例，未發現IL-39與LVEF之間的相關性(r=0.052，P=0.808)。

3 討論

動脈粥樣硬化不僅僅是脂質的積累，也是一種炎性疾病。炎性反應的靶向治療有可能成為冠心病治療的新熱點[6]。白介素被認為是調節動脈粥樣硬化進展中的重要因素。研究證實，白介素-12家族各成員(IL-12、IL-23、IL-27、IL-35、IL-39等)是通過JAK/STAT(JAK/信號轉導和激活轉錄)途徑傳導信號，參與了動脈粥樣硬化形成和發展的作用[14]。其中IL-12、IL-23為促進冠狀動脈粥樣硬化的發展，IL-35、IL-Y為抑制AS的發展，IL-27對AS具有促進及抑制的雙向作用。IL-39在ACS中的表達及意義研究不多。

本文首先檢測ACS患者血清IL-39、IL-6、IL-35、cTnI、CK-MB和LVEF水平。結果顯示ACS患者血液中IL-39水平較正常人明顯降低。所有患者血清IL-39水平與IL-35、收縮壓、HDL呈正相關，與IL-6、CK、CK-MB、年齡、空腹血糖呈負相關。其中，IL-35為正相關，IL-6為負相關。IL-39與LVEF無相關性。

IL-35是公認的抗炎因子，能有效抑制效應T細胞(Teff)的增殖和激活，誘導iTr35細胞的產生[15-16]。作為一種抑制性細胞因子，它還可以在自身免疫性疾病和病毒性傳染病中發揮作用[17-18]。IL-6作為一種明確的促炎因子，是參與機體炎性反應、促進動脈粥樣硬化發生發展的重要中介物質[19-20]。IL-39在ACS中的表達明顯降低，與IL-6呈負相關，與IL-35呈正相關。我們的結果提示IL-39可能在ACS的發展過程中抗炎性因子。

按心肌梗死發病時間分組，雖然IL-39表達水平隨心肌梗死發生時間呈先下降后上升的趨勢，但差異無統計學意義(P>0.05)。我們檢測冠脈內的IL-39表達與外周表達無明顯差異，提示IL-39在ACS的發病機制中更可能是一種慢性全身性炎性反應，無局部炎性加重或者增強分泌的功能。我們未能發現急性心肌梗死(AMI)中IL-39和LVEF之間的明顯相關性，甚至在左前降支(LAD)閉塞引起的急性前壁心肌梗死中也是如此。我們認為IL-39作為一種抗炎因子，在AMI發生發展過程中不能預測其預后。

總之，IL-39在ACS中表達水平明顯下降，可能作為ACS發生發展的一種抗炎癥因子，可能作為ACS治療的新靶點。但其表達與急性心肌梗死發病時間無關，與LVEF無關，不能作為心肌梗死預后的指標。