羥苯磺酸鈣對血清肌酐測定干擾的研究進展

陳墨馨 俞明朝 張宇 趙衛(wèi)紅

(南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院老年腎科，江蘇 南京 210029)

血清肌酐是評價腎小球濾過功能的重要指標，其檢測方法主要有苦味酸法和肌氨酸氧化酶法(簡稱酶法)。羥苯磺酸鈣是一種廣泛運用于臨床的微血管保護劑，1997年被納入《歐洲藥典》，1998年被列入《英國藥典》，2001年左右進入中國市場〔1〕。羥苯磺酸鈣最初用于治療糖尿病視網(wǎng)膜病變，具有抑制視網(wǎng)膜微動脈瘤形成和減輕出血滲出等作用〔2〕。此外，羥苯磺酸鈣的治療適應證還包括慢性腎功能不全〔3〕、慢性靜脈功能不全〔4〕等。近年來，羥苯磺酸鈣對酶法檢測血清肌酐的負性干擾作用已引起臨床工作者與檢驗學家的廣泛關注。本文對羥苯磺酸鈣對血清肌酐測定干擾的研究進展進行綜述。

1 羥苯磺酸鈣的藥理作用與藥物代謝

羥苯磺酸鈣，化學名為2，5-二羥基苯磺酸鈣。羥苯磺酸鈣保護血管的藥理機制主要體現(xiàn)在以下兩個方面：羥苯磺酸鈣可增加微血管壁阻力，降低其病理性高通透性，減少出血與滲出；羥苯磺酸鈣可降低血液黏稠度，抑制血小板活化與聚集，防止血栓形成引起血管狹窄或堵塞〔5〕。

在臨床上使用的羥苯磺酸鈣劑型主要有膠囊與片劑兩種。羥苯磺酸鈣的常規(guī)用法是3次/d，500 mg/次。在患者口服500 mg羥苯磺酸鈣后3～10 h，患者體內的血藥濃度可維持在6 μg/ml以上。服藥6 h后，血藥濃度達峰值，約為8 μg/ml。羥苯磺酸鈣在體內代謝的過程中不會進入腸肝循環(huán)。絕大部分羥苯磺酸鈣以原形排泄，僅有10%的劑量會轉化為代謝產物排泄。在用藥后24 h內，約有50%劑量的藥物會從尿中排泄，剩余50%則會通過糞便排出。羥苯磺酸鈣的血漿半衰期約為5 h，用藥24 h后血藥濃度約為3 μg/ml。

2 羥苯磺酸鈣的用藥進展

2.1羥苯磺酸鈣治療慢性腎功能不全 慢性腎功能不全是由于各種病因導致的腎臟結構的進行性損傷與功能的進行性下降，在全世界范圍內發(fā)病率高達8%～16%〔6〕。當病情進展到終末期時，患者會出現(xiàn)氮質血癥、水電解質失衡、高血壓、貧血、腎性骨營養(yǎng)不良等一系列癥狀，嚴重影響生活質量。患者所需的透析治療會給家庭和社會帶來極大的經(jīng)濟負擔及精神壓力〔7〕。其中，糖尿病腎病是慢性腎病的一種重要類型，導致終末期腎衰竭的40%～50%的病因就是糖尿病腎病〔8〕。糖尿病腎病的發(fā)病機制包括機體長期存在的糖代謝與脂代謝紊亂、一氧化氮/活性氧、血管內皮生長因子/血管內皮生長因子受體等系統(tǒng)失衡等。這些因素進一步損傷血管壁，引起腎間質纖維化與腎單位萎縮退化，逐漸發(fā)展為腎功能失代償，導致腎功能不可逆性下降〔9〕。

羥苯磺酸鈣可通過多種機制改善糖尿病引起的腎損傷，實現(xiàn)對腎臟的保護作用。Zhou等〔10〕加用羥苯磺酸鈣治療糖尿病腎病患者時發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，實驗組24 h尿蛋白含量、血清炎癥標志物(五聚素-3、單核細胞趨化因子、高敏C反應蛋白、細胞間黏附分子)和內皮功能障礙標志物(血管內皮生長因子、內皮素-1)水平顯著降低；羥苯磺酸鈣也可通過激活內皮細胞一氧化氮合成酶，使血清一氧化氮含量上升，發(fā)揮抗氧化作用。Cai等〔11〕研究表明，羥苯磺酸鈣可降低凋亡信號分子Bim蛋白的表達，保護腎近端小管上皮細胞免受葡萄糖誘導的細胞凋亡，從而達到改善腎功能、減輕腎臟病理性改變的目的。

羥苯磺酸鈣與其他藥物聯(lián)合使用治療糖尿病腎病也被廣泛應用于臨床。如羥苯磺酸鈣聯(lián)用血管緊張素轉化酶抑制劑治療糖尿病腎病，可延緩病情，保護腎臟。血管緊張素轉化酶抑制劑可通過抑制血管緊張素轉換酶，減少血管緊張素Ⅱ的生成，并增強腎素的活性，通過擴張腎小球出球小動脈減輕腎小球毛細血管內壓、降低腎小球濾過膜通透性，從而緩解血尿、蛋白尿等臨床表現(xiàn)。賈海燕等〔12〕通過運用羥苯磺酸鈣聯(lián)合第三代血管緊張素轉化酶抑制劑福辛普利，觀察組24 h尿蛋白水平的下降顯著高于對照組，表明羥苯磺酸鈣可明顯提高糖尿病腎病的臨床療效。羥苯磺酸鈣與前列地爾的聯(lián)合用藥，也可用于治療糖尿病腎病。前列地爾可下調血管生成素-2與炎性介質白細胞介素-8的水平，通過改變腎臟血流動力學、抗腎臟纖維化等機制來延緩糖尿病腎病的進展。Qin等〔13〕研究運用羥苯磺酸鈣聯(lián)合前列地爾，聯(lián)合用藥的觀察組血清中小分子蛋白質(如β2-微球蛋白、胱抑素C和視黃醇結合蛋白)水平顯著低于僅使用前列地爾的對照組。同時，觀察組血清中的炎性細胞因子，如腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6和C反應蛋白水平也顯著低于對照組。以上結果表明，羥苯磺酸鈣聯(lián)用前列地爾，可增強前列地爾的抗炎作用并提高療效。

除了糖尿病腎病之外，羥苯磺酸鈣對于其他各種病因所致的慢性腎功能不全也具有很好的治療作用，如慶大霉素引起的藥物性腎損傷。Jafarey等〔14〕構建慶大霉素誘導的腎功能不全大鼠模型，研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，羥苯磺酸鈣治療組的血清肌酐、尿素氮水平顯著下降，血清肌酐清除率顯著上升，腎功能得到顯著改善。通過進一步深入的組織學研究，發(fā)現(xiàn)在慶大霉素損害的腎臟組織中，羥苯磺酸鈣可抑制慶大霉素介導的氧化性物質丙二醛含量的升高。丙二醛是一種生物體內氧化應激反應的終產物，可與蛋白質、核酸等大分子交聯(lián)聚合，具有生物毒性。此外，研究還采用鐵離子還原力法對腎臟組織抗氧化性進行評價，發(fā)現(xiàn)羥苯磺酸鈣治療組的抗氧化性顯著升高，顯示了羥苯磺酸鈣在慶大霉素腎損傷模型中發(fā)揮的抗氧化作用。

2.2羥苯磺酸鈣治療糖尿病視網(wǎng)膜病變 糖尿病視網(wǎng)膜病變是繼糖尿病腎病之外，糖尿病的另一種嚴重并發(fā)癥。在我國糖尿病人群中，糖尿病視網(wǎng)膜病變的平均發(fā)生率高達40%，是造成中老年人群視力損傷甚至后天性失明的重要原因〔15〕。對于有發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變潛在風險的患者來說，血糖監(jiān)測、健康教育、運動鍛煉及進行必要的藥物治療和手術干預都可延緩病情的發(fā)展。臨床上廣泛使用羥苯磺酸鈣治療糖尿病視網(wǎng)膜病變，已有40多年歷史。研究表明，羥苯磺酸鈣可能通過以下機制治療糖尿病視網(wǎng)膜病變：①減少白蛋白的滲漏，降低毛細血管通透性，保護血眼屏障〔16〕。②抑制血小板活化與聚集，降低血液黏稠度〔17〕。③抑制血管內皮細胞凋亡，維持血管壁的完整性〔18〕。④抑制炎癥信號分子p38、核因子-κB的活化〔19〕。

2.3羥苯磺酸鈣治療慢性靜脈功能不全 慢性靜脈功能不全是由于下肢靜脈瓣功能障礙或下肢肌肉不能正常泵血，致使靜脈血液大量淤積在下肢的一類疾病。患者可出現(xiàn)下肢疼痛、關節(jié)腫脹、靜脈曲張等臨床表現(xiàn)，影響外觀、行動不便，嚴重降低其生活質量。Leal等〔19〕使用羥苯磺酸鈣治療慢性靜脈功能不全患者，發(fā)現(xiàn)治療組腓腸肌泵血情況得到顯著改善，且腿部疼痛等癥狀得到顯著緩解。Rabe等〔20〕使用羥苯磺酸鈣治療356例慢性靜脈功能不全患者，治療前70%患者表現(xiàn)出腿部沉重乏力的癥狀，治療9 w后僅剩余10%患者仍存在該癥狀，表明羥苯磺酸鈣對慢性靜脈功能不全的癥狀有顯著的改善作用。

2.4羥苯磺酸鈣的其他應用 由于其強大的血管保護功能，羥苯磺酸鈣除了被用于治療以上3種疾病之外，在其他疾病的治療中也發(fā)揮著重要作用。色素沉著性紫癜性皮膚病是一種由細胞免疫介導的良性毛細血管疾病，主要表現(xiàn)為廣泛的微血管炎癥，該病易復發(fā)，對傳統(tǒng)治療有耐藥性。羥苯磺酸鈣可抑制內皮細胞活化，降低毛細血管脆性與通透性，可被用于緩解微血管炎癥。Gupta等〔21〕研究使用羥苯磺酸鈣與傳統(tǒng)藥物聯(lián)合治療色素沉著性紫癜性皮膚病，病情得到顯著改善。此外，羥苯磺酸鈣也正在被研究用于治療白內障〔22〕、肝臟缺血-再灌注損傷〔23〕、阻塞性黃疸〔24〕等多種疾病。

3 羥苯磺酸鈣對血清肌酐測定干擾的研究進展

肌酐是人體骨骼肌肌酸的代謝產物，自其產生后，每天以相對恒定的速率釋放到全身血液循環(huán)中。肌酐在腎小球自由濾過，腎臟既不吸收也不代謝肌酐，并且血清肌酐檢測快速簡便，因此其是臨床評估腎小球濾過功能的常用方法〔25〕。目前，實驗室測定血清肌酐最常用的兩大方法分別是苦味酸法和酶法〔26〕。苦味酸法會受到維生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、葡萄糖、蛋白質、膽紅素等多種物質的干擾，不宜用于黃疸、溶血等情況下患者的肌酐測定，特異性較差〔27〕。1973年，McLean等〔28〕將肌酐酶與苦味酸法相結合，實現(xiàn)了半酶法。20世紀70年代，肌氨酸氧化酶等肌酐測定的工具酶實現(xiàn)了商品化，酶法測定肌酐逐漸成熟。酶法與苦味酸法相比，具有樣本量小、速度快、特異性高等優(yōu)點〔29〕。2006年，美國國家腎病教育計劃(NKDEP)實驗室工作組推薦使用酶法代替苦味酸法進行血清肌酐測定〔30〕。然而，酶法仍會受到維生素C、葡萄糖、兒茶酚胺等某些物質的影響。

早在1986年，Guder等〔31〕首先報道了羥苯磺酸鈣對酶法檢測血清肌酐水平的干擾現(xiàn)象。近年來，越來越多的臨床研究證實了此觀點。齊志宏等〔32〕研究表明使用羥苯磺酸鈣治療時，7個月內動態(tài)隨訪檢測血清肌酐結果波動較大，且與血清尿素水平變化不一致。Guo等〔33〕使用8種來自不同公司的酶法試劑盒，測定不同濃度羥苯磺酸鈣對同一濃度血清肌酐樣品的影響，發(fā)現(xiàn)當羥苯磺酸鈣濃度大于2 μg/ml時，羥苯磺酸鈣的濃度越高，對血清肌酐水平的負性干擾則越明顯。臨床上羥苯磺酸鈣的推薦用藥方案是3次/d、500 mg/次。根據(jù)其藥物代謝特點，服藥后3～10 h，患者的血藥濃度約穩(wěn)定在6 μg/ml。因而羥苯磺酸鈣在穩(wěn)態(tài)血藥濃度下，會對血清肌酐的檢測產生明顯的負性干擾作用。李毅等〔34〕使用不同濃度血清肌酐樣品進行研究，發(fā)現(xiàn)羥苯磺酸鈣主要對較低濃度(小于300 μmol/L)的肌酐樣品檢測引起較大的干擾效應。隨著肌酐濃度的升高，干擾效應逐漸趨于穩(wěn)定。在臨床上，血清肌酐的正常范圍標準為45～105 μmol/L。因此，對于血清肌酐水平小于300 μmol/L的龐大患者群體，羥苯磺酸鈣的干擾效應可能會嚴重影響臨床工作者對患者病情的評估與療效的判斷。

酶法測定血清肌酐的原理，是采用肌酐水解酶催化肌酐生成肌酸，繼而水解為肌氨酸和尿素，其中肌氨酸再經(jīng)反應生成過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶催化下反應生成紫色絡合物，再通過比色反應確定肌酐含量〔35〕。有研究表明〔36〕羥苯磺酸鈣對酶法檢測血清肌酐結果的負性干擾作用可能與羥苯磺酸鈣的還原性有關，羥苯磺酸鈣可消耗酶法反應中參與反應的過氧化氫，從而抑制顯色，導致肌酐水平的假性偏低。此外，羥苯磺酸鈣可分解為兩個基團，肌酐可與其中1個基團牢固結合生成新物質，這種化學結合也可能是羥苯磺酸鈣使肌酐水平下降的另一重要原因。

羥苯磺酸鈣對酶法檢測血清肌酐存在干擾，但對苦味酸法檢測血清肌酐的干擾卻鮮有報道。戴瑩潔等〔37〕觀察到使用酶法檢測肌酐時，羥苯磺酸鈣濃度在4 μg/ml以上就會明顯干擾檢測結果。使用苦味酸法檢測肌酐時，羥苯磺酸鈣濃度在64 μg/ml以上也不會對結果產生明顯干擾，認為羥苯磺酸鈣對苦味酸法檢測肌酐基本沒有干擾。因此，臨床醫(yī)師開具血清肌酐檢查時，可備注標明患者正在使用羥苯磺酸鈣，用于提示檢驗工作者在必要時可選擇苦味酸法進行重復、多次檢測，以提高血清肌酐結果測定的準確性。

此外，羥苯磺酸鈣除了對血清肌酐的測定有負性干擾作用之外，也可能對血清中的其他生化指標的檢測產生影響，如尿酸、三酰甘油、糖化白蛋白等〔38〕。這些指標的變化也需要引起臨床工作者的重視，需結合患者自身情況與用藥史，進行綜合分析與全面判斷。但已有文獻報道，羥苯磺酸鈣對血清胱抑素C的干擾作用并不顯著〔33〕。在反應早期腎損傷方面，胱抑素C的敏感性也優(yōu)于肌酐〔39〕。因此，對于服用羥苯磺酸鈣的患者而言，胱抑素C可能比肌酐更能準確反映腎功能的真實水平，不失為臨床工作者決策時重要的參考指標。

綜上，隨著羥苯磺酸鈣在臨床的普及與推廣，其對酶法檢測血清肌酐的負性干擾作用也不容忽視。對于腎功能不全的患者，定期檢測血清肌酐對于準確評估疾病進展和制定治療方案至關重要。因此，明確這種干擾現(xiàn)象的存在，對臨床與檢驗工作都具有重要意義。然而，羥苯磺酸鈣對血清肌酐測定干擾的詳細機制、臨床上如何避免或減小干擾及能否找到比血清肌酐更準確特異的指標來反映腎功能，有待進一步研究。