養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場主要病原菌耐藥性檢測

張業(yè)懷

（廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530007）

隨著養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場飼養(yǎng)動(dòng)物的種類、數(shù)量及排泄物不斷增多，隨之帶來的是環(huán)境污染、動(dòng)物發(fā)病增多，抗生素長期使用導(dǎo)致病原菌耐藥性產(chǎn)生嚴(yán)重。為了更好地防控動(dòng)物疫病發(fā)生，減少環(huán)境污染，降低病原菌耐藥風(fēng)險(xiǎn)，以廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場為調(diào)研對象，對養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場環(huán)境中細(xì)菌種類及主要病原菌污染及耐藥情況進(jìn)行調(diào)查研究，以期為養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場的環(huán)境控制和臨床用藥提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株

選取廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場前期調(diào)查研究分離鑒定獲得的具有致病性作用的大腸桿菌（6 株）、沙門氏菌（5 株）、葡萄球菌（12 株）和不動(dòng)桿菌（6株）共29株。

1.2 培養(yǎng)基及藥敏紙片

普通瓊脂培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基由本實(shí)驗(yàn)室提供；16 種抗生素藥敏紙片（見表1、3），均購自杭州微生物試劑公司。

1.3 試驗(yàn)菌株的藥敏性檢測

采用藥敏紙片瓊脂擴(kuò)散法對種4 主要病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，即將各種病原菌接分別接種肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，然后用滅菌生理鹽水稀釋，用細(xì)菌平板計(jì)數(shù)法測定并稀釋成含菌量為1×106菌懸液，用滅菌棉簽均勻涂布于普通瓊脂平板上，每個(gè)平板均勻地貼5 張藥敏紙片于培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)24～48h，分別用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，每株菌做2個(gè)重復(fù)，判定標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI，2013）推薦的標(biāo)準(zhǔn)，分析4 種主要病原菌的耐藥情況。耐藥率是按同一種細(xì)菌的耐藥株數(shù)除以總株數(shù)×100%來計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種病原菌耐藥性試驗(yàn)

將4 種病原菌（29 株）對16 種抗生素藥敏試驗(yàn)結(jié)果列于表1，從表1可看出，29株細(xì)菌對紅霉素、鏈霉素、卡那霉素、青霉素的耐藥率均較高，分別為86.21%（25/29）、89.66%（26/29）、96.55%（28/29）、79.31%（23/29）；對頭孢噻肟、吡哌酸、恩諾沙星、左氟沙星、環(huán)丙沙星、先鋒霉素和丁胺卡那霉素敏感，其中吡哌酸和頭孢噻肟對4 種主要病原菌未檢出耐藥菌株。

表1 養(yǎng)殖場4種主要病原菌耐藥率

2.2 4種病原菌多重耐藥性檢測

將4 種病原菌對多種抗菌素耐藥的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)列于見表2，結(jié)果表明：4 種病原菌均存在多重耐藥菌株，其中，耐3 種抗生素以上的菌株占86.21%（25/29），耐6 種抗生素以上的菌株占44.83%（13/29），耐9 種抗生素的菌株為4 株，所占比例13.79%（4/29）（見表2）。但不同菌種的菌株多重耐藥現(xiàn)象存在差異，其中大腸桿菌、沙門氏菌和葡萄球菌的所有菌株均具有多重耐藥性。

表2 養(yǎng)殖場4種主要病原菌的多重耐藥性

2.3 不同環(huán)境中病原菌的耐藥性

將不同來源菌株進(jìn)行耐藥性比較，結(jié)果顯示，空氣、水和土壤中的主要病原菌對抗菌藥物的平均耐藥率為30.31%、57.50%、17.91%，水樣本中的分離菌株耐藥性最強(qiáng)（見表3）。

表3 養(yǎng)殖場不同環(huán)境來源菌株的耐藥性

3 討論與結(jié)論

在養(yǎng)殖過程中，抗菌藥物的大量使用或使用不合理，容易導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，往往是從對藥物敏感逐漸變?yōu)槟退帲赡鸵环N藥物到耐多種藥物［1］。隨著耐藥菌株增多及耐藥譜越來越廣，一些在獸醫(yī)臨床上未使用的新型抗菌藥物也表現(xiàn)出很強(qiáng)的耐藥性［2］。本課題研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場的空氣、水體及土壤中存在大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、不動(dòng)桿菌、變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風(fēng)桿菌和李氏桿菌等多種致病菌或條件致病菌，其中以大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、不動(dòng)桿菌為主。

大腸桿菌和沙門氏菌是養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場動(dòng)物腸道常見的主要病原菌，采用抗菌藥物聯(lián)合用藥進(jìn)行治療，一般能得到很好的控制。但如用藥不規(guī)范或者存在耐藥菌株，會(huì)導(dǎo)致治療效果差及治療成本增加，給養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場造成經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)長期使用或?yàn)E用抗菌藥物會(huì)造成細(xì)菌的耐藥進(jìn)而發(fā)生耐藥基因的轉(zhuǎn)移，給人類健康造成威脅［4］。研究試驗(yàn)結(jié)果表明，不同的樣本、不同來源的大腸桿菌和沙門氏菌菌株對藥物敏感存在較大差異，且以沙門氏菌耐藥性最高，平均耐藥率為45%，這可能與養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場平常預(yù)防和治療使用抗菌藥物的種類、次數(shù)及作為促生長的飼料添加劑長期使用有關(guān)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場除了承擔(dān)教學(xué)實(shí)習(xí)功能外，也是學(xué)生養(yǎng)殖實(shí)踐基地。學(xué)生為了預(yù)防疾病和促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長，平時(shí)常用一些抗菌藥物作為飼料添加劑。大腸桿菌和沙門氏菌對頭孢噻肟、吡哌酸、恩諾沙星、左氟沙星、環(huán)丙沙星、先鋒霉素和丁胺卡那霉素敏感。

葡萄球菌廣泛分布于自然界中，是養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場中繼發(fā)感染及外科感染的主要病原菌，常引發(fā)皮膚感染滲出性皮炎、蜂窩組織炎、乳房炎、關(guān)節(jié)腫大和膿腫及全身感染如敗血癥、膿毒癥等。據(jù)原衛(wèi)生部2004～2005 年《細(xì)菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)》報(bào)告指出，我國的葡萄球菌特別是金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌耐藥性都在60%以上［5］，本課題研究發(fā)現(xiàn)，葡萄球菌廣泛分布于養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場的空氣、水體及土壤中，分離率在41%（12/29）以上，在動(dòng)物群高密度飼養(yǎng)、氣候悶熱及轉(zhuǎn)群和運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激下，容易發(fā)生葡萄球菌病。研究試驗(yàn)結(jié)果表明，12 株葡萄球菌對紅霉素、鏈霉素、卡那霉素、青霉素嚴(yán)重耐藥，但對頭孢噻吩、吡哌酸、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、左氟沙星和氨卞西林敏感，因此在發(fā)生此類疾病時(shí)可考慮使用這些敏感藥物進(jìn)行治療。

不動(dòng)桿菌是一類不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性、無鞭毛、無動(dòng)力的革蘭氏陰性桿菌，在自然界分布廣泛，是重要的病原菌，能導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生奶牛子宮內(nèi)膜炎、仔豬肺部感染及馬流產(chǎn)等疾病［6］。本試驗(yàn)結(jié)果表明所分離的不動(dòng)桿菌對鏈霉素和卡那霉素耐藥，對頭孢噻吩、恩諾沙星、吡哌酸、阿奇霉素、丁胺卡那霉素、左氟沙星和新霉素敏感。

研究發(fā)現(xiàn)，飼料添加劑中濫用抗菌藥物、發(fā)生細(xì)菌性腸道疾病的動(dòng)物的排泄物沒經(jīng)過無害化處理直接進(jìn)入環(huán)境水體中，已經(jīng)成為耐藥菌株產(chǎn)生的重要源頭，因此養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場應(yīng)嚴(yán)格做好糞污無害化處理，同時(shí)要做好欄舍清潔衛(wèi)生、定期全面消毒、不定期開展細(xì)菌耐藥性監(jiān)測等，指導(dǎo)首選敏感抗菌藥物進(jìn)行疾病治療，防止過度用藥，同時(shí)做好免疫接種工作等，只有這樣才能有效預(yù)防耐藥菌的產(chǎn)生。

綜上所述，通過對本校養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場分離菌株進(jìn)行耐藥性監(jiān)測結(jié)果顯示，本校養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場分離菌株耐藥性比較嚴(yán)重，該監(jiān)測結(jié)果可為養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場的用藥提供依據(jù)，同時(shí)指導(dǎo)制定防護(hù)策略。另外，本研究只選擇了空氣、水和土壤中的主要病原菌進(jìn)行耐藥性分析，但對養(yǎng)殖實(shí)訓(xùn)場環(huán)境中存在的變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風(fēng)桿菌和李氏桿菌等多種致病菌或條件致病菌還未進(jìn)行耐藥性檢測，因此有必要開展進(jìn)一步檢測工作，以便更全面指導(dǎo)臨床用藥，為保護(hù)公共衛(wèi)生安全提出更為合理的防護(hù)建議。