細(xì)胞角蛋白CK14和CK18在早期宮頸癌中的表達(dá)及意義分析

馬延偉

河南省葉縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 467200

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，高發(fā)于絕經(jīng)后女性，近年來發(fā)病呈年輕化趨勢[1]。臨床分期Ⅰa～Ⅱa期的宮頸癌患者以手術(shù)治療為主，預(yù)后較好，但部分患者病情進(jìn)展快，預(yù)后不理想[2]。目前臨床中對宮頸癌診斷的分子標(biāo)志物較多，但能夠用于早期病情進(jìn)展及預(yù)后評估的分子標(biāo)志物很少[3]。細(xì)胞角蛋白(CK)是一類細(xì)胞中間絲蛋白，已發(fā)現(xiàn)54種基因型，人體不同類型上皮細(xì)胞中表達(dá)不同基因型的細(xì)胞角蛋白，腫瘤組織中細(xì)胞角蛋白表達(dá)可用于患者診斷及預(yù)后評估[4]。研究者發(fā)現(xiàn)，CK14低表達(dá)可能與胃癌患者術(shù)后癥狀復(fù)發(fā)有關(guān)[5]；CK18表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后明顯相關(guān)[6]。本文比較了正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、早期宮頸癌組織中CK14、CK18表達(dá)水平，分析其與早期宮頸癌患者病理指標(biāo)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年1月—2018年6月在本院行宮頸手術(shù)切除樣本的石蠟切片。根據(jù)病理檢查結(jié)果分為正常宮頸組30例，宮頸上皮內(nèi)瘤變組30例(低級別瘤變15例、高級別瘤變15例)，早期宮頸癌組60例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理組織活檢確診為早期宮頸癌；(2)病理確診為宮頸上皮內(nèi)瘤變組織者未合并其他系統(tǒng)腫瘤；(3)正常宮頸組織為距離病灶3cm的癌旁組織。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有免疫系統(tǒng)疾病，近3個(gè)月有免疫治療史；(2)臨床資料不完整者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。

1.2 方法 組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定后石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟至水后高溫、高壓修復(fù)抗原，滴加鼠抗人CK14單克隆抗體(1∶300)、鼠抗人CK18單克隆抗體(1∶300)，4℃過夜，磷酸緩沖液洗滌后滴加HRP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG(1∶2 000)，室溫下孵育30min，加DAB顯色10min、蘇木素復(fù)染、脫水、封片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察。檢測試劑購于上海群己生物科技有限公司。

1.3 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 取5個(gè)高倍鏡視野，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，黃色或棕黃色顆粒為陽性染色，陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例：≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～74%、≥75%依次記0～4分。細(xì)胞染色強(qiáng)度：無色、黃色、棕黃色、黃褐色分別記0～3分。二者評分相乘后0～3分為陰性，4分及以上為陽性。

2 結(jié)果

2.1 各組CK14和CK18表達(dá)情況分析 CK14陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，在正常宮頸組織中表達(dá)于棘細(xì)胞層與顆粒層之間，見圖1。正常宮頸組、宮頸低級別上皮內(nèi)瘤變組、宮頸高級別上皮內(nèi)瘤變組、早期宮頸癌組CK14陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；CK14陽性率與宮頸病變程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.426，P<0.01)。CK18陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，在正常宮頸組織中無表達(dá)，在宮頸低級別上皮內(nèi)瘤變組織中表達(dá)于基底層上部，在宮頸高級別上皮內(nèi)瘤變組織中表達(dá)于基底層中上部，見圖2。在宮頸癌組織中完全覆蓋鱗狀上皮層CK18陽性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；CK18陽性率與宮頸病變程度呈正相關(guān)(r=0.704，P<0.01)。見表1。

圖1 CK14在不同宮頸組織中的表達(dá)(SP法，×100)

圖2 CK18在不同宮頸組織中的表達(dá)(SP法，×100)

表1 各組CK14和CK18陽性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2 CK14、CK18表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 不同病理類型、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的宮頸癌患者CK14陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中腺鱗癌CK14陽性率最高，其次為鱗癌，腺癌最低；組織分化中等的CK14陽性率明顯高于低分化者；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CK14陽性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。不同病理類型、組織分化程度的宮頸癌患者CK18陽性率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中鱗癌和腺癌CK18陽性率明顯高于腺鱗癌，組織分化中等的CK18陽性率明顯低于低分化者。見表2。

表2 CK14、CK18表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征關(guān)系[n(%)]

3 討論

細(xì)胞角蛋白屬于細(xì)胞骨架的中間絲蛋白家族，在細(xì)胞分化各階段和不同類型上皮細(xì)胞中表達(dá)存在差異。研究者發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞角蛋白具有組織特異性和高度保守性，與上皮角質(zhì)細(xì)胞活性明顯相關(guān)，在維持上皮細(xì)胞形態(tài)及功能中發(fā)揮重要作用[7]。相關(guān)研究顯示，細(xì)胞角蛋白CK14在非小細(xì)胞肺癌、胃癌、食管鱗狀細(xì)胞癌等多種惡性腫瘤組織中均存在表達(dá)，但與腫瘤病變程度的關(guān)系不一致，在非小細(xì)胞肺癌、胃癌組織中CK14陽性率與病變程度呈正相關(guān)，在食管鱗狀細(xì)胞癌中CK14陽性率與病變程度呈負(fù)相關(guān)[8-9]。本文結(jié)果顯示，細(xì)胞角蛋白CK14陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，隨著宮頸病變程度的增加CK14陽性表達(dá)率逐漸下降，提示CK14低表達(dá)可能為宮頸表皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變的一個(gè)特異性標(biāo)志物。進(jìn)一步分析顯示，宮頸癌患者CK14陽性率與宮頸癌患者病理類型、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況明顯相關(guān)，CK14陽性率越高宮頸癌組織分化程度越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越低，預(yù)后越好。

研究者發(fā)現(xiàn)，CK18廣泛表達(dá)于乳腺癌、胃腸道癌等多種惡性腫瘤，能夠用于鑒別腺癌和鱗癌，可作為輔助診斷乳腺癌和胃癌的分子生物標(biāo)志物[10]。本文中細(xì)胞角蛋白CK18陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，在正常宮頸組織中不表達(dá)，陽性表達(dá)率與宮頸癌惡性程度呈正相關(guān)，表明CK18高表達(dá)能夠提示宮頸表皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變。同時(shí)，鱗癌和腺癌CK18陽性率明顯高于腺鱗癌，組織分化中等的CK18陽性率明顯低于低分化者，說明CK18在一定程度上能夠預(yù)測宮頸病變的發(fā)展趨勢，CK18陽性表達(dá)的宮頸癌患者未來病情可能進(jìn)一步發(fā)展，而陰性表達(dá)患者病情發(fā)展的可能性較小。但CK14、CK18對宮頸癌病情發(fā)展和預(yù)后的預(yù)測價(jià)值仍需進(jìn)一步大樣本長期隨訪研究。