喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達及與臨床病理特征的相關性研究

文 娟

湖南省湘潭市中心醫院病理科 411100

喉癌是指發生于喉部上皮的惡性腫瘤，主要臨床癥狀為聲音沙啞、咽喉異常感、疼痛、血痰、吞咽困難、呼吸困難等，嚴重威脅患者的生命健康[1]。并且大量研究表明[2-3]，早期發現喉癌能夠通過放射或鐳射局部切除進行治療，且術后能夠發聲，對于后期患者需接受范圍更大之手術或全喉切除，需借助人工發聲器說話。非染色體結構維持蛋白凝縮蛋白復合體Ⅰ亞單位H(NCAPH)是一種蛋白復合體，在細胞分裂過程中對染色體的組裝和分裂起著重要的作用；Survivin是凋亡抑制蛋白家族成員，能夠抑制細胞凋亡，參與腫瘤的發生與發展；p53是一種腫瘤抑制基因，可使細胞分裂終止于復制前期與合成期，誘導細胞凋亡[4]。三者均在早期診斷其他癌癥中起到重要的作用。鑒于此，本文為了研究喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達及與臨床病理特征的相關性，選取2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者組織標本和同期在我院治療的43例聲帶息肉患者組織標本進行對比。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018年12月—2019年12月收治的43例喉癌患者組織標本，定為觀察組；選擇同期在我院治療的43例聲帶息肉患者組織標本，定為對照組。觀察組中男25例，女18例；年齡38～65歲，平均年齡為(51.62±10.27)歲。對照組中男24例，女19例；年齡38～66歲，平均年齡為(51.65±10.30)歲。兩組的性別、年齡等比較差異無統計學意義(P>0.05)。本次研究獲得我院倫理委員會的認證。納入標準：(1)觀察組經術前活檢確診為喉鱗狀細胞癌者，對照組經頻閃喉鏡確診為聲帶息肉者；(2)近1個月內未進行其他方式進行治療者；(3)知情本次研究，簽署知情同意書者。排除標準：(1)精神障礙者；(2)伴有心、肝、腎等功能不全者；(3)接受過專業發聲或歌唱學習者。

1.2 試劑及藥品 從武漢三鷹生物有限公司購買多克隆兔NCAPH抗體，稀釋濃度為1∶100；從北京中山生物技術有限公司購買單克隆鼠Survivin、p53抗體。北京中杉金橋生物技術有限公司購買從免疫組染色(SP)試劑盒、二氨基聯苯胺(DBA)顯色試劑盒。

1.3 方法 先用10%甲醛固定喉癌組織標本和聲帶息肉組織標本，然后用石蠟包埋進行切片(厚度為4μm)，并用免疫組織化學SP染色處理(先脫蠟水化，用10%H2O2封閉10min，在pH=6.0的檸檬酸鹽緩沖液中行高溫高壓抗原修復并加血清封閉；然后加一抗孵育，用DAB染色，蘇木素復染，脫水，透明封片)。選取自制磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設定為陰性對照，以陽性組織切片設定為陽性對照，按照購買試劑盒的操作說明進行操作。涉及儀器包括石蠟切片機、顯微鏡、電熱恒溫干燥箱等。喉癌組織標本和聲帶息肉組織標本NCAPH、Survivin、p53表達情況：喉癌組織標本中細胞核出現棕黃色或棕褐色顆粒判定為NCAPH陽性細胞；喉癌組織標本中細胞質或/和細胞核出現淡黃至棕黃色顆粒判定為Survivin陽性細胞；喉癌組織標本中細胞核出現棕黃至褐色顆粒判定為p53陽性細胞。其中在400倍鏡下隨機發現500個細胞中NCAPH陽性細胞>10%判定為陽性，≤10%判定為陰性。在400倍鏡下隨機發現500個細胞中Survivin陽性細胞>5%判定為陽性，≤5%判定為陰性。在400倍鏡下隨機發現500個細胞中p53陽性細胞>5%判定為陽性，≤5%判定為陰性。統計喉癌患者的性別、年齡、淋巴有無轉移、分化程度、臨床分型、病理分級、臨床分期等，分析喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達與臨床病理特征的相關性。

2 結果

2.1 兩組組織標本中NCAPH、Survivin、p53表達情況比較 相比于對照組，觀察組組織標本中NCAPH、Survivin、p53陽性率明顯更高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組組織標本中NCAPH、Survivin、p53的表達情況比較[n(%)]

2.2 喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達與臨床病理特征的相關性分析 喉癌患者性別、年齡、臨床分型與喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的陽性表達無相關性(P>0.05)。喉癌患者淋巴轉移、分化程度、病理分級和臨床分期隨喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53陽性率顯著增高(P<0.05)。見表2。

表2 喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的表達與臨床病理特征的相關性分析[n(%)]

3 討論

喉癌在頭頸腫瘤家族中比較常見，發病率占全身癌癥的1%～5%。大量研究表明[5-6]，早期發現、早期診療對于減輕喉癌的危害非常重要，及時治療能夠降低并發癥，提高術后生存率，保留喉的發音功能。并且臨床影像診斷喉癌往往處于晚期，術后影響患者發音功能，增加并發癥。同時在惡性腫瘤的診斷、侵襲與預后的預測中分子與基因標志物日益受到重視[7]。

NCAPH、Survivin、p53均為惡性腫瘤分子與基因標志物，且相關研究報道[8]，其在喉癌的發生、發展中起著重要的作用。本文結果發現，喉癌患者組織標本中NCAPH、Survivin、p53陽性率明顯高于聲帶息肉組織標本。分析其原因，首先NCAPH在癌細胞有絲分裂過程中能夠促進染色體的組裝和分離，參與調節拓撲異構酶Ⅱ的活性，從而促進癌細胞的分裂；另外，Survivin因結構簡單，能夠較強抑制異常突變細胞凋亡，延長癌細胞的存活時間，促進癌細胞的生長、增殖等；并且p53蛋白的生物活性較高，與DNA的復制和修復有密切的關系，對促進細胞分裂增生具有重要的作用，在惡性腫瘤中較常見。故喉癌患者組織標本中NCAPH、Survivin、p53的陽性表達率較高。

另外本文發現，喉癌患者性別、年齡、臨床分型與喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53的陽性表達無相關性。喉癌患者淋巴轉移、分化程度、病理分級和臨床分期隨喉癌組織中NCAPH、Survivin、p53陽性率顯著增高。進一步說明NCAPH、Survivin、p53與喉癌發展密切相關，均有望成為腫瘤診斷的分子標記物及治療的新靶點。

綜上所述，NCAPH、Survivin、p53在喉癌組織中均有不同程度的陽性表達，且喉癌患者淋巴轉移、分化程度、病理分級和臨床分期隨NCAPH、Survivin、p53陽性率顯著增高。