原發性乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞及腫瘤干細胞的組織病理學指標及其與預后的關系*

劉英霞

廣東省惠州市第一人民醫院病理科 516000

乳腺癌是臨床最為常見的惡性腫瘤，好發于女性群體中，極少部分男性也可能發病。隨著人們生活方式的改變，以及工作、生存壓力的不斷增加，乳腺癌的發病率逐年上升，嚴重威脅到了人們的健康乃至生命安全[1]。原發性乳腺癌是指發生于乳腺本身，而不是繼發于其他組織器官轉移而形成的惡性腫瘤，占到了乳腺癌的95%以上[2]。至今，原發性乳腺癌的病因并未明確。近年來，在原發性乳腺癌發病率不斷上升的背景下，學界對其發病機制既病因的研究不斷深入，取得了理想的成績。研究表明[3]，外周血循環細胞的存在，可能與原發性乳腺癌的發病、發展以及預后密切相關，腫瘤干細胞可能影響著早期腫瘤微轉移。基于臨床相關研究報道，為進一步了解原發性乳腺癌的發病機制及原因，本研究針對乳腺癌患者進行外周血循環腫瘤細胞及腫瘤干細胞進行檢測，并與健康體檢者進行對比分析，旨在為臨床防治提供更為科學、先進的理論基礎。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年1月—2020年6月收治的80例原發性乳腺癌患者作為研究對象，將其視為疾病組。納入標準：(1)經細胞學、組織病理學等檢查確診為原發性乳腺癌[4]；(2)均為女性，精神和認知正常，可配合完成基本交流溝通；(3)臨床資料完整、齊全。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤者；(2)伴有全身感染性疾病者；(3)存在嚴重心腦血管疾病者；(4)妊娠期或哺乳期者。另納入同期50例體檢健康者作為對比，將其視為對照組，排除原發性乳腺癌者，自愿參與，簽署知情同意書。疾病組：年齡26～65歲，平均年齡(43.12±2.58)歲；婚姻狀況，已婚67例，未婚13例；臨床分期，Ⅰ期26例，Ⅱ期34例，Ⅲ期20例；淋巴結轉移情況：N0 49例，N1～3 31例。對照組：年齡24～63歲，平均年齡(42.94±2.55)歲；婚姻狀況，已婚41例，未婚9例。兩組各主要基本資料具有均衡性(P>0.05)，有可比性。

1.2 檢測方法 (1)標本采集：于清晨空腹狀態下，抽取兩組外周血10ml作為標本。樣本采集后，進行離心處理，收集血漿層和淋巴細胞分離液交界面的白膜層(即環狀乳白色單個核細胞層)，吸出單個核細胞，將磷酸緩沖鹽溶液(PBS)5ml加入其中，經離心管反復洗2次，將上層血清予以去除。(2)細胞角蛋白19(CK19)陽性標記：取CK19-FITC和抗FITC各10μl，將其加入洗后的離心管中標記細胞，加入PBS將體積補足，在溫度4～8℃避光環境下，進行孵育(約10min)，同時將10～20倍標記體積的PBS進行細胞洗滌，隨后進行10min的離心處理，將上層血清去除后，再次洗滌。加入1ml PBS所得的陽性細胞進行離心處理(5min)，之后一并去除上層清液，使用10μl PBS進行混勻，再次離心處理2min，2ml涂片，在熒光顯微鏡下，通過臨床組織病理學觀察方法進行細胞涂片視野完整掃描，陽性細胞計數，選取視野采集圖片保存。(3)CD44+/CD24-/low檢測：將CD44-FITC抗體滴加于涂片，保持37℃溫度環境，使用PBS(0.1mol)反復洗滌3次，時間控制在15min左右。利用熒光顯微鏡，進行掃描和檢測(同CK19陽性標記)。

2 結果

2.1 兩組CK19和CD44+/CD24-/low陽性率比較 疾病組CK19、CD44+/CD24-/low陽性率均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。如表1所示。

表1 兩組CK19陽性率的比較[n(%)]

2.2 淋巴結轉移、臨床分期與CK19陽性率的關系 淋巴結轉移N0患者CK19陽性率明顯低于N1～3患者，差異有統計學意義(P<0.05)。臨床分期Ⅰ期患者CK19陽性率明顯低于Ⅱ期、Ⅲ期患者，差異有統計學意義(P<0.05)。如表2所示。

表2 淋巴結轉移、臨床分期與CK19陽性率的關系[n(%)]

2.3 淋巴結轉移、臨床分期與CD44+/CD24-/low陽性率的關系 淋巴結轉移N0患者CD44+/CD24-/low陽性率略低于N1-3患者，但差異無統計學意義(P>0.05)。臨床分期Ⅰ期患者CD44+/CD24-/low陽性率略低于Ⅱ期、Ⅲ期患者，但差異無統計學意義(P>0.05)。如表3所示。

表3 淋巴結轉移、臨床分期與CD44+/CD24-/low陽性率的關系[n(%)]

3 討論

乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，是因乳腺上皮細胞發生增殖失控，進而出現惡性病變所致。根據2018年國際癌癥研究機構(IARC)調查的最新數據顯示，原發性乳腺癌在全球女性癌癥中的發病率為24.2%，而這其中接近53.0%的患者發生在發展中國家[5]。盡管隨著乳腺癌早期篩查及治療策略和方法的普及，全球乳腺癌的死亡率有一定的下降趨勢，但是在我國廣大的農村地區，死亡率的下降趨勢并非十分明顯，原發性乳腺癌的防治形勢仍不容樂觀[6]。因此，有必要加強對原發性乳腺癌發病機制及原因的探究。乳腺癌轉移是影響預后的主要因素，其轉移途徑較多，其中血行散播是重要途徑之一，而外周血循環腫瘤細胞是這一途徑的必要條件，若能夠在外周血中檢測出循環腫瘤細胞，則可以為腫瘤發生微轉移提供有力證據[7]。對于這一觀點，有學者對其原因進行了分析，認為外周血循環腫瘤細胞的分化增殖能力有限，甚至不具備分化增殖能力，只有部分腫瘤干細胞對腫瘤的發生和發展發揮作用，也只有腫瘤干細胞有腫瘤形成能力，且可達到遠處組織器官，并形成轉移灶[8]。由此不難看出，針對乳腺癌患者外周血中的腫瘤干細胞檢測，其重要性不言而喻。為此，本研究針對乳腺癌患者進行外周血循環腫瘤細胞及腫瘤干細胞進行檢測，通過納入80例原發性乳腺癌和50例健康體檢者進行對比分析，在CK19陽性、CD44+/CD24-/low標記后發現，疾病組CK19、CD44+/CD24-/low陽性率明顯高于對照組(P<0.05)，說明了原發性乳腺癌患者存在CK19高陽性表達的現象。進一步對不同臨床特征的原發性乳腺癌患者CK19陽性率進行分析發現，淋巴結轉移N1～3和臨床分期Ⅱ期、Ⅲ期患者的CK19陽性率要顯著高于N0和Ⅰ期患者(P<0.05)，提示原發性乳腺癌外周血中可檢測到外周血循環腫瘤細胞和腫瘤干細胞，且與淋巴結轉移和臨床分期密切相關。在不同臨床特征原發性乳腺癌患者CD44+/CD24-/low陽性率分析方面，淋巴結轉移情況不同、臨床分期不同的患者相比較，盡管存在一定的差異，但是并不顯著(P>0.05)，說明了腫瘤干細胞的陽性率受到淋巴結轉移和臨床分期的影響不大，但是從數據上看，隨著淋巴結轉移程度和臨床分期增加，CD44+/CD24-/low陽性率不斷上升，因此可能仍舊會受到一定的影響，但是影響并不顯著。

綜上所述，外周循環腫瘤細胞在原發性乳腺癌患者中存在高表達現象，陽性率受到臨床分析和淋巴結轉移的影響，但腫瘤干細胞所受影響不大。