育齡男女地貧基因檢測與血液學表型的關系

溫凱純 溫錦才 杜淑嫻 鄭博弘

廣東省普寧市婦幼保健計劃生育服務中心檢驗科 515300

地中海貧血(地貧)為珠蛋白生成障礙性貧血，主要是因遺傳基因缺陷使血紅蛋白中一種或多種珠蛋白鏈合成缺陷而導致的貧血或病理狀態，目前尚無根治方法，且中重型地貧治療預后不佳，因此需在婚前及孕前進行基因篩查，以減少地貧患兒的出生。相關報道指出，不同地貧基因型患者的血液學表型存在差異，但目前尚無報道明確指出患者基因型與血液學表型的關系[1]。故本研究通過對普寧市地貧孕齡夫婦進行基因檢測及血液學表型分析，旨在探究育齡男女地貧基因檢測與血液學表型的關系，為制定可行的人群干預計劃及早期檢測方案奠定基礎，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月30日—2019年12月31日到我院進行地中海貧血項目檢測的育齡男女3 820例；年齡20～38歲，平均年齡(29.16±3.61)歲。納入標準：經我院倫理委員會審核通過，患者知情且簽署同意書。排除標準：重大傳染性疾病患者；惡性腫瘤患者；其他血液疾病患者；慢性代謝疾病患者。

1.2 方法 (1)血樣采集：由專業人員按照我院血液采集標準進行血液采集，每位患者采集空腹靜脈血2ml。(2)血液檢測：應用Sysmex XT-2000i 進行血細胞分析，檢測紅細胞平均體積(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白含量(MCH)、血紅蛋白A2(HbA2)。取MCV<82fl或者MCH<27pg為地中海貧血初篩陽性標準[2]。(3)應用 Sebia Capillarys2 FP測定HbA2及HbF。如HbA2<2.5%判為疑似α地貧攜帶者，如HbA2>3.5%，則判為疑似β地貧攜帶者。將上述篩查結果陽性者進行基因檢測以確診。(4)基因檢測：嚴格按照核酸提取操作說明書提取DNA，并放置于-20℃環境中保存備用，采用潮州凱普公司提供的α-及β-地貧基因診斷試劑盒，PCR反應條件α為：95℃預熱15min，熱處理98℃40s、64℃70s、72℃150s，共35個循環，β為：94℃預熱3min，熱處理94℃30s、55℃30s、72℃30s，共40個循環。采用Cap-PCR技術檢測α-地貧基因，α-地貧的診斷標準[3]為患者存在SEA/αα基因、-α3.7/αα基因、-α4.2/αα基因缺失或ααQS/αα基因、ααCS/αα基因、ααWS/αα基因突變；采用RDB-PCR技術檢測β-地貧基因，β-地貧的診斷標準為患者存在16種常見基因突變。

1.3 觀察指標 (1)統計檢查結果，分析地貧基因突變類型。(2)血液學表型參數：比較不同地貧基因類型患者MCV、MCH、HbA2分布情況，分析不同血液學表型參數對α型地貧基因的診斷價值。(3)分析α型地貧基因與血液學表性參數變化的關系。

1.4 統計學方法 應用SPSS21.0軟件分析數據，計量資料以均數±標準差表示，用t檢驗；計數資料以百分比(%)表示，用χ2檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義；采用多元Logistics回歸分析α型地貧基因與血液學表性參數變化的關系；采用ROC曲線分析不同血液學表型參數對α型地貧基因的診斷價值。

2 結果

2.1 基因檢查結果分析 α型地中海貧血的構成比高于β型、α/β復合型(P<0.05)，見表1。

表1 基因檢查結果分析

2.2 不同地貧基因類型患者血液學表型參數分布情況 α型地貧患者的MCV、MCH高于β型、α/β復合型，HbA2低于β型、α/β復合型(P<0.05)，見表2。

表2 不同地貧基因類型患者血液學表型參數分布情況

2.3 不同血液學表型參數對α型地貧基因的診斷價值分析 MCH、HbA2診斷α型地貧基因的AUC>MCV(P<0.05)，見表3、圖1。

表3 不同血液學表型參數對α型地貧基因的診斷價值分析

圖1 不同血液學表型參數診斷α型地貧基因的ROC曲線分析

2.4 α型地貧基因與血液學表性參數變化的關系分析 α型地貧基因與血液學表性參數變化無關(P>0.05)，見表4。

表4 α型地貧基因與血液學表性參數變化的關系分析

3 討論

國內外均有報道指出，α型為地中海貧血的主要基因突變類型[4]。本研究經檢驗，α型地中海貧血的構成比高于β型、α/β復合型，這表明α型地中海貧血為地貧的主要類型，與上述研究結果相同。β型地中海在地中海貧血的三種類型中危害最大，也是我國南方最常見的常染色體遺傳病之一。一旦患兒出現重癥β-地貧，只能通過不斷輸血進行治療，但輸血無法從根本上治愈β-地貧，只能延緩疾病進展，延長患兒生命，而造血干細胞移植為目前唯一一種可以起到治愈效果的治療手段，但尋求合適配型的難度較大，且造血干細胞移植治療費用過高，一般家庭難以承受，進而會增加患兒病死率。本研究發現，β型地貧在地中海貧血患者中的占比為28.03%，高于廣東省平均水平的21.08%，這表明本市應加強β型地貧的篩查，完善β型地貧突變圖譜，并嚴格對適齡人群進行婚前及產前體檢，對攜帶致病基因的人群進行遺傳咨詢和婚配指導，以有效減少β型地貧患兒的出生。

α型地中海貧血是一組常染色體不完全顯性遺傳型慢性溶血疾病，主要是因為α珠蛋白基因缺陷，導致α珠蛋白肽鏈與β珠蛋白肽鏈合成速率不平衡，導致幼紅細胞利用鐵發生障礙，紅細胞參數發生變化。本研究發現，α型患者的MCV、MCH高于β型、α/β復合型，HbA2低于β型、α/β復合型，說明α型地貧基因患者的血液學表型不同于β型、α/β復合型，提示或可通過檢測患者血液學表型來對地貧基因類型進行判斷，為此，筆者進行了進一步研究，結果發現，MCH、HbA2診斷α型地貧基因的AUC>MCV，且均>0.75，說明MCH、HbA2對α型地貧基因具有診斷價值，故可通過檢測MCH、HbA2對地貧基因類型進行初步判斷。另外，本研究發現，α型地貧基因與血液學表性參數變化無關，與既往研究結果存在差異[5-6]，這可能與不同地貧基因類型患者的人數比例不均有關，故后期需調整各地貧基因型患者人數比例以進一步分析地貧基因與血液學表性參數變化的關系。

綜上所述，α型地中海貧血為普寧市地中海貧血的主要類型，且MCH、HbA2對α型地貧基因具有診斷價值，表明可通過MCH、HbA2診斷α型地貧基因。