XRCC2在結直腸癌中的表達及其臨床意義

白 聰 ,董志敏

(1.大同市第三人民醫(yī)院病理科,山西大同 037008;2.大同市第二人民醫(yī)院病理科,山西大同037000)

近年來，結直腸癌（colorectal cancer）的發(fā)生率隨著人們生活飲食習慣的改變而逐步呈攀升態(tài)勢[1]。XRCC2(X 射線修復交叉互補蛋白2，X-Ray Repair Cross Complementing Protein 2)是一種蛋白，在同源重組修復過程中具有十分關鍵的作用，可在斷裂的DNA 末端招募到Rad51，促使Rad51 提高，保持基因完整。作為同源重組修復（homology recombination,HR)最為主要的蛋白，Rad51 異常表達與結直腸癌進展具有密切的關系[2]。現階段，雖然在人類諸多惡性腫瘤中發(fā)現CRCC2 表達異常，但是甚少報道結直腸癌組織中CRCC2 表達意義。本研究以300 例結直腸癌患者作為觀察對象，重點分析了CRCC2 在結直腸癌中表達的意義，為臨床預測、防治結直腸癌提供有效參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集201501-201912月大同市第三人民醫(yī)院和大同市第二人民醫(yī)院300例結直腸癌手術患者，包括171 例男性和129 例女性，年齡34～71 歲，中位年齡50 歲。納入標準：經手術病理證實為結直腸癌；術前不曾接受過放化療；均為原發(fā)性。排除合并其他惡性腫瘤、復發(fā)性結直腸癌、臨床資料缺失不完整而影響統(tǒng)計的患者。

1.2 方法

檢測癌組織、癌旁組織（距離癌組織邊緣5 cm 以上的正常黏膜）的XRCC2水平。

1.2.1 qRT-PCR檢測

切取60 mg 癌旁組織、60 mg 癌組織，逆轉錄酶催化之后生成cDNA，采用SYBR Green 法，制備標準曲線。PCR 擴增具體條件為：60 s、94 ℃，30 s、60 ℃，45 s、72 ℃為一個循環(huán)，共循環(huán)35個。

1.2.2 免疫組化染色

用4%多聚甲醛固定組織，石蠟包埋，然后切成4 μm 薄片。脫蠟、脫水處理后，將枸櫞酸鈉0.01 mol/L加入到沸水之中制成pH=6.0 的緩沖溶液，進行高壓熱修復，小火保持熱度并繼續(xù)維持10 min，給予抗原修復，孵育30 min，將內源性過氧化物酶封閉，0.5 h后將XRCC2抗體加入其中，在4 ℃環(huán)境下過夜，第2日置于37 ℃環(huán)境下持續(xù)復溫60 min，取生物素化二抗加入，在37 ℃環(huán)境下持續(xù)孵育60 min，DAB 顯示顏色之后，復染、分化。最后脫水、封片，進行顯微鏡下觀察。

1.3 數據統(tǒng)計處理

利用SPSS22.0 軟件對研究數據進行統(tǒng)計。用均數±標準差表達計量資料并用t 檢驗，方差分析多組數據；用例數或構成比(%)表達計數資料并用卡方檢驗。生存率計算方法以Kaplan-Meier 法為主。Logrank 檢驗影響生存率的單因素，多因素分析則采用Cox模型。檢驗水準α設置為0.05。

2 結果

2.1 結直腸癌XRCC2表達情況

qRT-PCR 檢測提示XRCC2 在癌組織中的表達水平（1.7±0.3）顯著高于 癌旁組織（0.5±0.1）（P=0.0001）；免疫組化染色提示69.67%（209/300）結直腸癌組織XRCC2 陽性，另30.33%（91/300）為結直腸癌組織XRCC2陰性。

2.2 結直腸癌病理特征與XRCC2表達的關系

XRCC2的表達與T分期、TNM分期、M分期、Duke’s分期、腫瘤大小、肝臟轉移、淋巴結轉移有關（P ＜0.05）；與患者年齡、性別、N分期無關（P ＞0.05）。見表1。

表1 結直腸癌病理特征與XRCC2表達的關系

2.3 結直腸癌預后與XRCC2表達的關系

XRCC2 陽性者無復發(fā)生存期(Recurrence-free survival,DFS)中位數38 月、總生存期(Overall survival,OS)中位數41月，顯著短于XRCC2陰性者49月、55月（P ＜0.05）。Cox 多變量分析，結直腸癌預后因素與Duke’s 分期、XRCC2、淋巴結轉移、年齡有關（P ＜0.05）。見表2。

表2 結直腸癌預后與XRCC2表達的關系

3 討論

qRT-PCR 檢測方法具有較高的靈敏度，以此來對比癌組織、癌旁組織中XRCC2表達水平，結果發(fā)現癌組織XRCC2 顯著高于癌旁組織；與此同時進行免疫組化染色檢查，發(fā)現癌組織XRCC2 陽性者占比69.67%。這說明XRCC2表達與結直腸癌的進展具有密切的關系[3]。現階段，臨床發(fā)現在多種惡性腫瘤中XRCC2 存在異常表達，比如胃癌、乳腺癌、大腸癌、膠質母細胞瘤、食管癌等[4]。究其原因，通過同源重組修復的XRCC2 參與DNA 斷裂，保持基因完整，抑制癌灶形成。若XRCC2 表達缺失，將無法有效修復受損的DNA，進而導致染色體異變、畸形，降低細胞基因組的穩(wěn)定性，最終誘發(fā)癌灶[5]。但是相關研究學者認為高水平的XRCC2可導致細胞增殖過度而引起癌灶[6]。現階段，隨著臨床深入研究，發(fā)現癌灶的出現與癌細胞增殖失控有關之外，還與細胞調節(jié)紊亂、細胞凋亡有關[7]。這說明在腫瘤不斷發(fā)展過程中，XRCC2調控機制十分復雜。

本研究還分析了XRCC2表達與結直腸癌病理的關系，結果XRCC2 表達與Duke’s 分期、TNM 分期、T分期、癌灶大小、M分期、肝臟轉移、淋巴結轉移相關，與性別、年齡、N 分期無關。除此之外，XRCC2 水平較低患者的無復發(fā)生存期、總生存期明顯長于XRCC2 水平較高者，深入Cox 分析，結直腸癌預后因素與Duke’s分期、XRCC、淋巴結轉移、年齡有關。可將XRCC2表達作為臨床預判患者預后的主要指標。

總而言之，檢測結直腸癌患者XRCC2表達水平，有助于臨床準確評估結直腸癌患者預后，進而為臨床有效治療結直腸癌患者提供參考。