貴州地區非綜合征型耳聾患者GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體DNA12S rRNA基因突變分析

韓巍，蘭莉，楊可婕，葉清，黃維，曹祖威，劉宇清，葉惠平

（1.貴州省人民醫院聽力中心，貴陽 550002；2.貴州醫科大學附屬醫院耳鼻咽喉頭頸外科，貴陽 550004）

耳聾是人類最常見的感覺缺陷性疾病之一。耳聾的致病因素很多，分為環境因素和遺傳因素兩類。遺傳性耳聾分為非綜合征型耳聾（non-syndromic hearing loss，NSHL）和綜合征型耳聾（syndromic hearing loss，SHL）。其中NSHL占遺傳性耳聾的70%以上［1］。遺傳性耳聾存在廣泛的基因變異，流行病學調查研究［2-3］發現，NSHL患者最常見的致病基因為GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體DNA12S rRNA。

隨著分子遺傳學技術的廣泛應用，遺傳因素在NSHL發病中的作用日益受到重視。研究［4］顯示，不同地區、民族的NSHL患者基因突變攜帶率具有顯著差異。本研究調查貴州地區NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA 基因突變情況，分析NSHL的分布特征，旨在為本地區耳聾基因突變熱點個體化診療提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年12月至2019年12月貴州省人民醫院聽力中心經過聽力學檢查（聽性腦干誘發電位、純音測聽、聲導抗）和影像學檢查［5］確診為NSHL，同時完成基因檢測的285例患者為研究對象。所有研究對象外周血采集及臨床資料獲取獲得貴州省人民醫院倫理委員會批準，受試者或家屬知情同意并簽署知情同意書。研究對象年齡4個月～55歲，平均年齡（10.66±8.24）歲，其中，男159例，女126例。漢族112例，苗族63例，侗族45例，布依族34例、土家族31例。排除標準：（1）耳畸形；（2）純音測聽為傳導性耳聾或聲導抗異常；（3）中樞神經系統導致的語言障礙；（4）長期外地居住史。

1.2 基因芯片檢測

抽取受試者外周血3～5 mL，采用耳聾基因芯片檢測試劑盒（北京博奧生物有限公司）進行檢測，共選擇9個突變位點，包括c.235delC、c.235-299delAT、c.235delC/IVS7-2A＞G、c.299delAT、c.IVS7-2A＞G、c.2168A＞G、c.1555 A＞G、c.1494C＞G、c.538C＞T，先對收集的樣本DNA進行PCR擴增，隨后將擴增產物與芯片進行雜交后進行洗滌和干燥，采用晶芯LuxScanTM10K/B微陣列芯片掃描儀掃描，然后收集檢測結果進行分析。

1.3 統計學分析

采用SPSS 19.0統計學軟件對NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA基因突變情況進行統計分析。

2 結果

2.1 貴州地區NSHL患者耳聾基因突變檢出率

結果顯示，285例患者中122例（42%）存在基因突變。按照地區劃分，貴陽、清鎮、安順、凱里和畢節地區突變檢出率分別為9.47%（27例）、8.77%（25例）、8.07%（23例）、6.32%（18例）、10.18%（29例）；按照民族劃分，漢族、苗族、侗族、布依族和土家族突變基因檢出率分別為15.79%（45例）、12.28%（35例）、6.32%（18例）、4.91%（14例）、3.50%（10例）。見表1。

表1 貴州地區不同民族NSHL患者突變基因檢查結果

2.2 GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA位點檢出率比較

結果顯示，GJB2基因突變檢出率為17.89%，其中c.235delC、c.235-299delAT、c.235delC/IVS7-2A＞G、c.299delAT檢出率分別為12.98%、1.75%、1.75%、1.40%；SLC26A4基因突變檢出率為15.09 %，其中c.2168A＞G、c.IVS7-2A＞G檢出率分別為3.16%、11.93%；線粒體DNA12S rRNA 基因突變檢出率為9.5%，其中c.1555 A＞G、c.1494C＞G檢出率分別為8.77%、0.70%；GJB3基因僅c.538C＞T雜合突變1例，檢出率為0.35%。見表2。

表2 NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12SrRNA基因位點檢出率比較

3 討論

已有研究［5］顯示，我國NSHL患者中GJB2、SLC26A4基因突變比例最高。本研究結果顯示，GJB2基因是貴州地區NSHL患者最常見的耳聾突變基因，c.235delC位點是最常見突變位點。不同地區、民族耳聾基因突變存在差異，與以往研究［6］結果一致。

GJB2基因定位于13q11～q12染色體，屬于縫隙連接蛋白家族，在細胞間和離子信息傳遞中發揮重要作用［7］。GJB2基因是國內外研究較多的耳聾基因，由于種族和地域的不同，突變位點及頻率等存在明顯差異，其中以c.30delG、c.35delG、c.167delT及c.235delC檢出率較高，并且有明顯種族特異性［8-9］。研究［10-11］發現歐美國家c.35delG為主要突變位點，我國主要突變位點是c.235delC。本研究結果顯示貴州地區漢族、布依族、苗族、侗族及土家族患者c.235delC位點突變最常見，與以往研究結果一致。

我國GJB3基因突變在耳聾患者中的檢出率＜1%，c.538C＞T是最常見的突變位點［12］。本研究結果顯示GJB3c.538C＞T突變檢出率為0.35%，與以往研究結果基本一致。

研究［13-14］顯示SLC26A4基因定位于人類常染色體7q31位點。我國97.9%大前庭導水管綜合征患者SLC26A4基因發生突變，其中c.IVS7-2A＞G突變占78.9%。我國漢族耳聾人群中c.IVS7-2A＞G基因突變率為8.7%。新疆地區漢族耳聾人群c.IVS7-2A＞G基因突變率高于維吾爾族［15-16］。本研究NSHL患者SLC26A4基因突變檢出率為15.09%，其中c.IVS7-2A＞G為高頻突變位點，檢出率為11.93%。本研究亦發現貴州地區不同民族（漢族、苗族、布依族、侗族及土家族）患者均有SLC26A4基因突變，并且存在差異。

線粒體DNA12S rRNA基因突變是導致NSHL的重要原因之一，而且還會影響氨基糖苷類藥物的敏感性。c.1494C＞T、c.1555A＞G是導致氨基糖苷類耳毒性突變率較高的2個位點［17］。不同民族、地區線粒體DNA12S rRNA基因突變發生率具有明顯差異。高加索人群中c.1555A＞G位點檢出率為0～28.57%。日本NSHL患者c.1555A＞G基因突變率為3.0%～8.7%。我 國NSHL患 者c.1555A＞G基因突變檢出率為6.62%［18］，本研究NSHL患者c.1555A＞G基因突變檢出率為8.77%，與以往研究結果一致。

綜上所述，GJB2基因是貴州地區NSHL患者最常見的耳聾突變基因，c.235delC位點是最常見突變位點。不同地區、民族耳聾基因突變存在差異。本研究樣本量較小，且僅為一家醫院的統計結果，不能準確反應本地區NSHL患者的基因突變發生情況，今后需擴大樣本量來進一步論證。