慢性阻塞性肺疾病患者血清NR4A1表達及臨床意義

鄧俊華 王志波 黃表華

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是臨床常見的呼吸系統疾病，以持續性呼吸道癥狀和氣流受限為特征，具有較高的發病率和死亡率[1]。目前認為，有害氣體、有害顆粒所致的氣道和肺組織慢性炎癥反應，在COPD進展過程中發揮重要作用[2-3]。NR4A1(又稱Nur77)是孤兒核受體NR4A亞家族成員之一，可調控機體炎癥反應[4]。既往研究表明，NR4A1與呼吸機所致肺損傷、肺動脈高壓、肺癌等肺部疾病的發生發展均存在密切關系[5]。但NR4A1與COPD的相關研究鮮見報道。本研究旨在分析COPD患者血清NR4A1表達及變化，探討其在COPD診療中的價值，以期為臨床提供依據。

資料與方法

一、一般資料

選取2019年1月至2019年12月我院收治的COPD急性加重期患者(急性加重期組)52例，其中男性36例(69.23%)，女性16例(30.77%)；年齡48～81歲，平均年齡(64.92±8.55)歲。選取同期我院收治的COPD穩定期患者(穩定期組)55例，其中男性37例(67.27%)，女性18例(32.73%)；年齡46～80歲，平均年齡(65.13±9.04)歲。納入標準：①符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)》[6]診斷標準；②近1個月內未使用糖皮質激素；③患者知情同意。排除標準：①合并間質性肺疾病、支氣管哮喘、肺癌、肺結核等其他肺部疾病；②合并嚴重心、肝、腎功能不全者；③自身免疫性疾病、糖尿病、風濕結締組織疾病等。選取同期我院肺功能正常的50例健康體檢者(對照組)，其中男性37例(74.00%)，女性13例(26.00%)；年齡45～82歲，平均年齡(64.41±9.25)歲。三組一般資料比較無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

二、方法

1 樣本采集 采集受試者清晨空腹肘靜脈血5 mL，-20 ℃保存備用。

2 NR4A1檢測 RT-PCR法檢測血清NR4A1表達，按總RNA提取試劑盒說明書提取血清總RNA，采用逆轉錄試劑盒將總RNA反轉錄為cDNA，以cDNA為模板行PCR擴增；反應條件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，35個循環；以β-actin為內參，采用2-ΔΔCt法計算NR4A1相對表達水平。ΔCt=Ct目的基因-Ctβ-actin。

3 肺功能檢查 使用肺功能儀測定受試者肺功能相關指標，包括第一秒用力呼氣容積(FEV1)、第一秒用力呼氣容積占預計值百分比(FEV1% pred)、第一秒用力呼氣容積與用力肺活量比值(FEV1/FVC)、最大呼氣流量(PEF)；并采用COPD評估測試呼吸問卷(CAT)和呼吸困難指數(mMRC)對COPD患者進行評估。

4 炎癥指標 取受試者血清，ELISA法檢測血清白介素6(IL-6)水平，免疫散射比濁法檢測血清C反應蛋白(CRP)水平。

三、統計學方法

結 果

一、臨床指標

相較于對照組，穩定期組和急性加重期組NR4A1、FEV1%pred、FEV1/FVC、PEF、FEV1顯著降低(P<0.05)，而CRP、IL-6顯著增高(P<0.05)；急性加重期組NR4A1、FEV1%pred、FEV1/FVC、PEF顯著低于穩定期組(P<0.05)，而CRP、IL-6、mMRC評分、CAT評分顯著高于穩定期組(P<0.05)(見表1)。

表1 3組各項臨床指標比較

二、相關性分析

急性加重期組和穩定期組血清NR4A1水平均與FEV1、FEV1%pred、FEV1/FVC、PEF呈正相關(P<0.05)，并與CRP、IL-6、mMRC評分、CAT評分呈負相關(P<0.05)(見表2)。

表2 NR4A1與臨床指標的相關性分析

三、NR4A1對COPD的診斷價值

NR4A1診斷COPD穩定期的AUC為0.785(95%CI：0.437～0.762)，敏感性為87.2%，特異性為74.2%。NR4A1診斷COPD急性加重期的AUC為0.822(95%CI：0.629～0.977)，敏感性為92.7%，特異性為80.4%。

討 論

缺氧與感染反復發生是造成COPD患者病情加劇的主要原因，可引起呼吸道黏膜出血、水腫、粘液分泌物增多，從而導致肺通氣功能障礙，甚至引發繼發性感染[7]。NR4A1是一種立即早期基因的產物，定位于人染色體12q13，分子量大小65～75kD[8]。本研究顯示，急性加重期組和穩定期組血清NR4A1表達均明顯低于對照組(P<0.05)，且急性加重期組低于穩定期組(P<0.05)。結果提示，血清NR4A1表達隨著COPD加重而降低，其可能參與了COPD的發生發展，但機制尚未明確。

目前，NR4A1已被證實與機體炎癥反應密切相關，但其在不同炎癥性疾病中卻發揮著截然不同的作用。Huang等[9]研究顯示，2型糖尿病患者外周血NR4A1、TNF-α、IL-6表達均較健康人群顯著增加(P<0.05)，且NR4A1與TNF-α、IL-6表達呈正相關(P<0.05)，提示NR4A1表達上調與2型糖尿病患者慢性炎癥狀態有關。Kurakula等[10]發現，相較于野生型小鼠，NR4A1基因敲除小鼠在OVA誘導下出現更為明顯的呼吸道炎癥細胞浸潤；而過表達NR4A1可使得人肺上皮細胞NF-κB分泌減少，進而抑制呼吸道炎癥反應。Reddy等[11]研究證實，COPD患者肺組織及支氣管上皮細胞中均可見NR4A1表達下調；此外，在香煙煙霧誘導的COPD模型小鼠肺組織中亦可見NR4A1低表達，而敲除NR4A1可加劇COPD模型小鼠氣道炎癥反應。本研究發現，COPD患者血清CRP、IL-6表達顯著高于健康人群(P<0.05)，且急性加重期組高于穩定期組(P<0.05)，與既往研究一致[12-13]；且急性加重期組和穩定期組NR4A1表達均與CRP、IL-6表達存在明顯負相關。結合既往研究推測，NR4A1對COPD進展的調控作用可能與其對炎癥介質的調節有關。

本研究顯示，急性加重期組和穩定期組患者FEV1、FEV1%pred、FEV1/FVC、PEF等肺功能指標均較對照組顯著降低(P<0.05)，且急性加重期組上述指標較穩定期組下降更為明顯(P<0.05)，說明隨著COPD病情加重，患者肺功能逐步減弱[14-15]。此外，急性加重期組和穩定期組NR4A1表達與FEV1、FEV1%pred、FEV1/FVC、PEF呈正相關，提示NR4A1低表達與COPD患者氣流阻塞程度密切相關。mMRC評分是COPD患者呼吸困難癥狀評估及病情綜合評估的重要指標，可提示患者急性加重風險及遠期死亡風險。CAT評分是評價COPD對患者健康狀態的損害程度。本研究顯示，急性加重期組mMRC評分、CAT評分顯著高于穩定期組(P<0.05)，且急性加重期組和穩定期組血清NR4A1水平與mMRC評分、CAT評分呈負相關(P<0.05)。說明NR4A1表達變化可在一定程度上提示COPD病情嚴重程度及未來急性加重風險。進一步分析發現，NR4A1診斷COPD穩定期的敏感性和特異性分別為87.2%、74.2%；診斷COPD急性加重期的敏感性和特異性分別為92.7%、80.4%。提示血清NR4A1診斷COPD的敏感性和特異性較高，是COPD臨床診斷的潛在生標志物。

綜上所述，COPD患者血清孤兒核受體NR4A1表達下調，其表達與肺功能及炎癥指標密切相關，監測血清NR4A1表達對COPD診斷具有一定的臨床價值。