化學發光免疫法和酶聯免疫吸附法在乙型肝炎病毒血清學檢驗中的應用效果

吳福斌，李國棟

（1.東港市疾病預防控制中心檢驗科，遼寧丹東 118300；2.東港市中心醫院傳染科，遼寧丹東 118300）

乙型肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的疾病，該病傳染性強，隨著病情的發展可出現肝硬化、肝癌等。臨床上對乙肝感染的判斷主要是通過乙肝病毒血清標志物的檢驗，而在檢驗方法上，化學發光免疫法（CLIA）和酶聯免疫吸附法（ELISA）是主要的檢測方法，其中ELISA具有操作簡單、技術成熟的優點，但是其重復性不佳，且靈敏度不高，易出現假陽性、漏檢等情況[1-2]。CLIA是近年來的新型檢驗技術手段，是半定量的檢測方法，能提高乙肝的早期檢出率，且重復性好，靈敏度與特異度高[3]。本研究基于此對比分析CLIA與ELISA在乙肝病毒血清學檢驗中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2020年12月東港市中心醫院收診的133例疑似乙型肝炎患者。入選患者中男性79例，女性54例；年齡23～77歲，平均（45.9±11.3）歲。納入標準：伴有惡心嘔吐、肝區疼痛、既往有與乙肝患者接觸史者。排除標準：既往有肝臟器質性病變疾病者；合并其他傳染性疾病者；伴有精神疾病者。患者或家屬對本研究知情同意，且經東港市中心醫院醫學倫理委員會批準此項研究。

1.2 方法 采集患者外周空腹靜脈血10 mL，將其分別置于兩個試管中，每個試管5 mL，分別用CLIA檢測和ELISA檢測乙肝病毒血清學檢測。血液標本在4 ℃環境下離心處理，轉速為3 000 r/min，離心10 min后，取上層清液待檢。其中CLIA檢測采用全自動化學發光免疫分析儀檢測表面抗原（HBsAg）、表面抗體（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗體（HBeAb）、核心抗原（HBcAb）等五項乙肝病毒血清學標志物；ELISA檢測采用洗板機和酶標儀進行檢測。熒光定量PCR檢測采用Roche LC480實時熒光分析儀和配套試劑檢測，以上3種檢測方法均按照說明書操作。

1.3 觀察指標 ①比較兩種檢測方法對乙肝五項病毒血清學標志物檢測的陽性率。②以PCR檢測結果為金標準，比較兩種檢測方法診斷乙肝的準確度、靈敏度、特異度，準確度=真陽性例數+真陰性例數/總受檢例數。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%。CLIA：HBeAg的臨界值指數≥1.00，則檢測結果判定為陽性，ELISA：HBcAb相對光強度/臨界相對光強度≤1.00，HBsAg、HBsAb相對光強度/臨界相對光強度≥1.00均可判定為陽性。③比較兩種檢測方法對HBsAg的檢測結果。

1.4 統計學分析 使用SPSS 24.0統計軟件進行數據分析，計數資料以[例(%)]表示，組間行χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 陽性率 兩種檢測方法對5項血清學指標的陽性率比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；CLIA檢測對HBsAg、HBeAg的陽性率均顯著高于ELISA檢測，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢測方法陽性率比較[例(%)]

2.2 診斷效能 金標準下，ELISA與CLIA診斷乙肝的準確度、靈敏度及特異度比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表2、3。

表2 兩種檢測方法的診斷結果(例)

表3 兩種檢測方法的診斷效能(%)

2.3 HBsAg檢測 經CLIA檢測HBsAg為陽性的有127例，其中HBsAg低水平的標本共有88例，ELISA最低水平HBsAg（HBsAg≤0.5 ng/mL）的檢出率為81.82%（72/88），見表4。

表4 兩種檢測方法對HBsAg的檢測結果比較

3 討論

由于乙型肝炎病毒的傳染性較強，因此早期檢出感染乙肝病毒的人群，并采取有效的措施干預，對于預防乙肝的流行有重要意義[4]。

ELISA是經典的檢測乙型肝炎的方法，但其實施的是定性檢測，無法進行定量分析，檢測結果存在一定誤差[5]。CLIA是近年來在臨床檢驗工作中得到廣泛應用的一種化學發光測定技術，具有高靈敏度、高特異度的特點，能有效識別出各種逃逸的變異株，減少人為因素的干擾，準確率較高[6-7]。本研究中，兩種方法檢測HBsAb、HBeAb、HBcAb的陽性率比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），CLIA檢測HBsAg、HBeAg的陽性率均高于ELISA，提示在乙肝病毒血清學檢測中，CLIA檢測對HBsAg、HBeAg的靈敏度更高。

CLIA檢測中采用的顆粒表面積大，體積小，因而檢測中有更大的反應面積，且標志物的循環利用，能延長發光時間，增加強度，準確的反應出HBV感染的進程，提高檢測結果的準確度和靈敏度[8]。本研究中，CLIA與ELISA對乙肝診斷的準確度、靈敏度、特異度比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），ELISA最低水平HBsAg（HBsAg≤0.5 ng/mL）的檢出率低于CLIA，提示兩種檢測方法在乙肝的診斷中均有較高的應用價值，對于低水平的HBsAg檢測，CLIA的靈敏度更高，其能進行半定量檢測，更加迅速地檢出HBsAg，避免低水平HBsAg標本的假陰性結果。

綜上，CLIA和ELISA在乙肝診斷中均有較高價值，但CLIA能進行半定量分析，在HBsAg、HBeAg的檢測中靈敏度更高，值得推廣。