三葉青嫩枝單芽扦插繁殖技術

謝志亮，王盼，曾光輝，康華靖,3*

(1.溫州市農業科學研究院，浙江 溫州 325006；2.磐安縣中藥產業發展促進中心，浙江 金華 322300；3.溫州市農林漁生態系統增匯減排重點實驗室，浙江 溫州 325006)

三葉青又名三葉崖爬藤、蛇附子、石抱子、石猴子、石老鼠、金線吊葫蘆，為葡萄科崖爬藤屬多年生蔓生藤本植物，主要分布于浙江、江西、福建、湖南、湖北、廣東、廣西等10多個省區，是我國特有的名貴珍稀藥用植物[1]。三葉青以塊根或全草入藥，具有抗病毒、抗炎、鎮痛與解熱、保肝等作用，且毒副作用小，是西藥無法代替的“植物抗生素”[2]。臨床上主要用于治療病毒性腦膜炎、乙型腦炎、病毒性肺炎、黃疸性肝炎等，特別是塊根對小兒高燒有特效[3]，是抗腫瘤常用藥物，對肺癌[4-5]、肝癌[6]、胃癌[7]、腸癌[8]、宮頸癌[9]等癌細胞具有抑制增殖和促進凋亡的作用。

三葉青生長于郁閉度較高、腐殖質含量高、濕度大、排水透氣的山坡灌叢、山谷、溪邊林下巖石縫中[2]，以北緯27.3°以北的武夷山及福建、浙江、江西靠近武夷山的部分山區的三葉青最為正宗，而以浙江產三葉青為上品[10]。因其對光照、溫度、濕度等生長環境的要求嚴苛，自然條件下生長速度緩慢，產量極低。加之三葉青抗腫瘤作用等藥理實驗的證實，其藥效被過分的宣傳夸大，近年來人為無節制的采挖，野生三葉青已經處于瀕臨滅絕狀態[3]。2012年三葉青被浙江省政府列入浙江省重點保護野生植物名錄，野生三葉青的采集利用受《浙江省野生植物保護辦法》(浙政令[2010]277號)制約。因此，開展三葉青野生資源人工栽培種關鍵技術研究，對珍稀三葉青資源保護和保障人民身體健康有重要意義。由于三葉青人工栽培的研究起步較晚，目前扦插繁殖雖已有報道[11-13]，但使用的插條主要是2～3 a生插條，插條用量大，所需時間較長，難以滿足規模化栽培的需求。本研究采用多因素多水平的正交試驗，以生根率、平均生根數、平均最大根長、萌芽率、新梢長、根鮮重和干重為扦插生根質量的指標，探索三葉青單芽扦插繁殖的最佳組合方法，為三葉青野生資源保護及其產業化栽培提供育苗技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料

供試三葉青為野生小葉三葉青，2016年11月采挖自溫州永嘉山區，盆栽于溫州市農業科學研究院智能溫室大棚內。

1.2 方法

采用L16(45)正交設計研究不同基質、激素種類及濃度組合、激素處理時間等對三葉青帶葉單芽扦插成活與生長的影響。于2017年6月4日剪取三葉青當年生幼嫩枝條(春梢)，剪成帶葉單芽插條，插條下端長4～5 cm，上端離芽約2 cm，扦插深度為芽剛好露出基質為宜。每處理15條插條，重復3次。扦插后及時噴霧30 min，后期根據氣候及土壤干濕情況等進行噴霧。1個月后即7月4日調查生根率、萌芽率、新梢長。隨機選取9株，調查其1級根數量、最大根長，并洗凈根系吸干水分，用電子分析天平稱量根鮮重，80 ℃烘干12 h后再稱量根干重。驗證試驗于7月15日開始，按照上述方法進行，處理時間同樣為1個月。

1～4水平：基質(A)分別為草炭、1/2珍珠巖+1/2草炭、1/2珍珠巖+1/2蛭石和1/3珍珠巖+1/3草炭+1/3蛭石；時間(B)分別為5、15、30和60 s；NAA(C)分別為0、50、100和150 mg·L-1；IBA(D)分別為0、50、100和150 mg·L-1；IAA(E)分別為0、50、100和150 mg·L-1。

1.3 統計與分析

利用SPSS 19.0對數據進行整理、統計與分析。

2 結果與分析

2.1 對生根率、根數和根長的影響

插條扦插10 d左右即從剪口、節上、節間開始發根。從表1看出，除處理1外，其余15個處理的生根率均為100%，各處理間整體上無顯著差異。

表1 各處理組合對生根及植株萌芽生長的影響

不同處理間插條的平均生根數差異較大(7.2～33.7根)。比較極值可知，影響插條根數量的主次因子為B>A>C>D>E。分析K值(各水平下指標的數值之和)可知，各因素分別以A4、B2、C3、D4、E3為最優水平，即平均生根數量的最佳組合為A4B2C3D4E3。從最大根長來看，插條的平均最大根長在9.5～17.8 cm。比較極值可知，影響最大根長的主次因子為A>C>D>B>E。分析K值可知，因素分別以A4、B2、C2、D2、E3為最優水平，即最大根長的最佳組合為A4B2C2D2E3。

2.2 對萌芽率和新梢長的影響

萌芽率除處理9～12較低外(以處理9最低，為6.7%)，其余12個處理的萌芽率均達100%(表1)。極值分析表明，對三葉青萌芽率影響最大的為因素A(基質)，而因素B、C、D和E影響無差異。比較K值可知，各因素分別以A1、A2、A4、B3、C2、D1、E3為最優水平，即A1(A2、A4)B3C2D1E3為誘導腋芽萌發的最佳組合。新梢平均長度與萌芽率相似，以9～12處理的新梢長度最短(小于3 cm)。而其余12個處理的新梢長度均在11 cm以上，最長達到14.1 cm。極值分析表明，影響新梢長度的主次因子為A>E>B>D>C。比較K值可知，各因素分別以A4、B4、C3、C4、D1、E2為最優水平，即新梢長度的最佳組合為A4B4C3(C4)D1E2。

2.3 對平均根鮮重和干重的影響

表1顯示，平均單株根鮮重以處理1(0.17 g)最小、處理15最大(0.45 g)。極值分析表明，影響平均根鮮重的主次因子為A>C>B>E>D。比較K值，各因素分別以A4、B2、C2、D4、E1、E2為最優水平，即平均根鮮重的最佳組合為A4B2C2D4E1(E2)。平均單株根干重與平均根鮮重相似，以處理1最小，為0.023 g；最大為處理15，為0.041 g。極值分析表明，影響平均單株根干重的主次因子為A>C>E>D>B。比較K值，各因素分別以A3、B2、C2、D4、E2為最優水平，即平均根干重的最佳組合為A3B2C2D4E2。

2.4 驗證試驗

影響三葉青嫩枝單芽帶葉插條生根數、生根長度、根鮮重、根干重、萌芽率和新梢長度的因素主要為基質，而影響生根數量的因素主要為處理時間。綜合分析后認為A4B2C2D4E3較為適宜三葉青嫩枝單芽帶葉扦插，即基質為1/3珍珠巖+1/3草炭+1/3蛭石，用NAA 50 mg·L-1+IBA 150 mg·L-1+IAA 100 mg·L-1浸蘸15 s。驗證試驗結果表明，三葉青生根率和萌芽率均達到100%，其中平均根數28.5條，最大根長16.4 cm，平均梢長16.2 cm，平均根鮮重0.36 g，平均根干重0.034 g。

3 討論

三葉青資源稀缺而需求量大，藥材市場上供不應求，偽混品眾多，嚴重影響臨床療效。吉慶勇等[14]的研究結果顯示，對于三葉青最主要的活性成分黃酮，人工種植植株和野生植株沒有顯著的差異，這表明人工種植的三葉青能夠代替野生三葉青滿足市場的藥用需求。因此，三葉青人工種植取代野生資源的依賴勢在必行，探討三葉青種苗高效無性扦插繁殖技術對野生三葉青種質資源保護和三葉青的產業化發展具有重要意義。

研究認為，插穗生長年限是影響三葉青枝條扦插繁殖的重要因素[11]。周小卿等[10]認為，半木質化的三葉青枝條含營養物質多且整條枝都具有運輸水分的功能，在能保證足夠濕度的情況下，插穗留的葉片多，光合作用強，合成有機物多，從而促進長根。胡春梅等[15]對三葉青不同插穗類型對生根質量指數影響的研究也表明，半木質化帶2片葉的效果最好，半木質化帶1片葉的效果次之，嫩枝帶2片葉的效果居第三，嫩枝帶1片葉的效果最差。然而，袁蓮蓮等[12]則認為三葉青扦插繁殖以當年生嫩枝為佳。本試驗用嫩枝單芽的扦插試驗結果也表明，生根率為100%，萌發率整體也較高，根和新梢生長良好。另外，通過觀察，本試驗中扦插后10 d開始生根，時間遠遠短于同類相關研究[15]。由此可見，嫩枝單芽扦插不僅能節約用枝，還能快速大量繁育幼苗。

本試驗的扦插基質種類對插條平均生根數、平均生根長度、平均根鮮重、平均根干重、平均萌芽率和新梢平均長度均有顯著影響。已有相關研究表明，新鮮黃泥基質對三葉青扦插效果最好，其生根數量最多，生根率最高，生根長度最長[11,15]。分析認為，這是由于新鮮黃泥質地疏松，具有較好的吸水保水性能，清潔干凈、污染少，含有胡敏酸為微酸性土壤，能促進植株發新根[16]。本試驗的結果也表明透氣有保水的基質配方——1/3珍珠巖+1/3草炭+1/3蛭石的扦插基質效果最佳。

植物生長調節劑種類、濃度及浸泡時間對三葉青根的生長發育均有顯著影響。胡春梅等[15]研究認為，IBA對生根率、平均根數、平均根長、生根質量等各項指標都表現最好，NAA的效果次之，究其原因，生長素類的NAA和IBA含有硫脲基團，能使細胞壁松馳，促進合成蛋白質等物質，能促進植物根細胞的生長。華金渭等[13]研究也表明，用6-BA和IAA的混合液能促進三葉青1 a生枝插條的生根。本試驗結果表明，NAA對三葉青扦插生根的平均根數、最大根長及根的干鮮重影響較大。從植物生長調節劑不同濃度處理對三葉青生根情況的影響效果來看，植物生長調節劑處理的濃度為100 mg·L-1時，三葉青扦插繁殖生根效果最好，生根率最高，平均根數最多，平均根長最長。玉屏等[17]研究表明，激素濃度為1 000 mg·L-1時，扦插于黃壤、黑壤中效果均較好。同樣，吉慶勇等[11]認為，用2～3 a生的老枝在1 000 mg·L-1IBA中浸漬10 s后扦插于黃土中生根效果最佳。本文NAA處理最佳濃度為50 mg·L-1。這與上述研究差異較大，濃度相差較大的原因有可能與選擇的枝條年齡有關。

4 小結

采用正交試驗設計，研究基質、外源激素種類與濃度組合及浸蘸時間對當年生帶葉單芽嫩枝(春梢)扦插成活的影響表明，扦插基質類型是影響單芽插條萌芽率、新梢長度、最大根長、根鮮重和根干重的主要因素，而影響嫩枝帶葉單芽插條生根數量的主要因素是激素處理時間。綜合試驗結果認為，當年生帶葉單芽嫩枝插條用NAA 50 mg·L-1+IBA 150 mg·L-1+IAA 100 mg·L-1浸蘸15 s后，扦插于1/3珍珠巖+1/3草炭+1/3蛭石的基質上效果最佳。驗證試驗也表明，上述組合處理1個月后的生根率和萌芽率均達100%，平均最大根長16.4 cm，平均每株生根28.5條，根鮮重0.36 g，根干重0.034 g，新梢長度16.2 cm，部分插條葉腋處有2個新梢萌發。