苯磺酸氨氯地平片與原研產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)的對(duì)比研究

黃武軍，鄢章龍，付向紅，熊水蓮，宋軍

1.仁和（集團(tuán)）發(fā)展有限公司，江西 樟樹 331200；2.江西制藥有限責(zé)任公司，江西 南昌 330052

苯磺酸氨氯地平片是臨床常用的鈣離子拮抗劑,是在高血壓、冠心病、慢性穩(wěn)定型心絞痛治療過程中常見的藥品選擇之一。最初由Pfizer 公司研發(fā)，最早于1989 年在英國上市片劑Istin，是我國一致性評(píng)價(jià)289 目錄中的一個(gè)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在美國藥典（USP40）、日本藥典（JP16）、中國藥典（2015年版）均有收載［1］。本研究對(duì)苯磺酸氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)檢查的方法進(jìn)行了探討，并對(duì)江西制藥有限責(zé)任公司的再評(píng)價(jià)產(chǎn)品及參比制劑中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Waters2695 高效液相色譜儀系統(tǒng)、Waters2996 二極管陣列檢測器，Waters 2487 紫外檢測器，Empower 工作站；電子分析天平：CP224S電子天平（d=0.1 mg，賽多利斯公司）；CP225D 電子天平（d=0.01 mg，賽多利斯公司）。

1.2 試藥

苯磺酸氨氯地平對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100374-201605，含量：100.0%）；氨氯地平雜質(zhì)I 對(duì)照品（ACCS，批號(hào)：16072501，含量：96.4%）；苯磺酸氨氯地平片參比制劑（原研進(jìn)口，批號(hào)：M69926），苯磺酸氨氯地平片待評(píng)價(jià)產(chǎn)品（批號(hào)1711064、1711093、1711094，由江西制藥有限責(zé)任公司提供）；乙腈、甲醇、均為色譜純（美國天地公司）；三乙胺為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 分析方法

2.1.1 供試品溶液制備取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氨氯地平50 mg），置于50 mL 量瓶中，加流動(dòng)相約40 mL，超聲約30 min 使苯磺酸氨氯地平溶解，取出放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.1.2 對(duì)照溶液制備取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL 中約含氨氯地平0.01 mg 的溶液。

2.1.3 系統(tǒng)適用性溶液取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品5 mg，加濃過氧化氫溶液5 mL，置70 ℃加熱10～30 min。

2.1.4 色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（ACE，4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（取三乙胺7.0 mL，加水稀釋 至1 000 mL，用 磷 酸 調(diào) 節(jié)pH 值 至3.0±0.1）（42∶18∶40）；檢測波長為237 nm；進(jìn)樣體積20 μL。

2.1.5 系統(tǒng)適用性要求系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，氨氯地平峰保留時(shí)間約為8 min，氨氯地平峰與氨氯地平雜質(zhì)I（相對(duì)保留時(shí)間約0.6）之間的分離度應(yīng)大于4.5，理論板數(shù)按氨氯地平峰計(jì)算不低于3 000。

2.1.6 測定法精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3 倍。

2.1.7 限度供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，氨氯地平雜質(zhì)Ⅰ的峰面積乘以2 不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.3%），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.3%），小于對(duì)照溶液主峰面積0.1 倍的色譜峰忽略不計(jì)。

2.2 分析方法確認(rèn)

按照《中國藥典》2015 年版四部通則9101 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，選取專屬性、檢測限、定量限、回收率、精密度、耐用性、穩(wěn)定性作為確認(rèn)指標(biāo)，對(duì)本分析方法進(jìn)行了確認(rèn)，結(jié)果表明本法適用于本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)的檢測［2-12］。

3 雜質(zhì)譜分析

對(duì)本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品生產(chǎn)樣品（批號(hào)1711094）、參比制劑Norvasc（批號(hào)：M69926）的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行高溫、高濕、強(qiáng)光照射試驗(yàn)；對(duì)三批注冊批樣品進(jìn)行長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；參比制劑及三批注冊批樣品進(jìn)行加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果匯總?cè)缦隆?/p>

表1 再評(píng)價(jià)產(chǎn)品與參比制劑在高溫、高濕、強(qiáng)光照射下有關(guān)物質(zhì)對(duì)比

表2 再評(píng)價(jià)產(chǎn)品與參比制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)有關(guān)物質(zhì)對(duì)比

結(jié)果表明，再評(píng)價(jià)產(chǎn)品與參比制劑在長期與加速6 個(gè)月穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，雜質(zhì)均沒有明顯增加，雜質(zhì)含量均符合規(guī)定；但在光照條件下均產(chǎn)生降解雜質(zhì)，經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)，降解雜質(zhì)為苯磺酸氨氯地平雜質(zhì)I，通過數(shù)據(jù)對(duì)比，再評(píng)價(jià)產(chǎn)品中的有關(guān)物質(zhì)含量均低于參比制劑，穩(wěn)定性明顯優(yōu)于參比制劑，且本品的降解雜質(zhì)譜與參比制劑一致。

4 討論

參照《美國藥典》與《中國藥典》苯磺酸氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)的分析方法［13-15］，采用C18 色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）以甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（35∶15∶50）為流動(dòng)相進(jìn)行了確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，苯磺酸氨氯地平與苯磺酸氨氯地平雜質(zhì)分離度為12.9，符合藥典系統(tǒng)適用性的要求，但主峰出峰時(shí)間較長（約21.7 min），于是對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行了優(yōu)化：采用C18 色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）以 甲 醇-乙 腈-0.7% 三 乙 胺（42∶18∶40）溶液對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行了微調(diào)，結(jié)果表明：苯磺酸氨氯地平與苯磺酸氨氯地平雜質(zhì)分離度為8.6，出峰時(shí)間適中（約8.6 min），符合藥典系統(tǒng)適用性的要求，調(diào)整流動(dòng)相比例后的理論塔板數(shù)和拖尾因子均優(yōu)于藥典的流動(dòng)相比例，故選用甲醇-乙腈-0.7%三乙胺（42∶18∶40）作為本品有關(guān)物質(zhì)分析方法流動(dòng)相比例。

本研究中有關(guān)物質(zhì)分析方法采用高效液相色譜法，其方法驗(yàn)證根據(jù)《中國藥典》2015 版四部<9101>藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則和ICH Q2（R1）的要求，對(duì)有關(guān)物質(zhì)分析方法的專屬性、檢測限、定量限、回收率、精密度、耐用性、穩(wěn)定性進(jìn)行了驗(yàn)證，方法簡便、靈敏，具有專屬性，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于本品有關(guān)物質(zhì)檢查。

美國藥典把氨氯地平乳糖加合物與氨氯地平半乳糖/葡萄糖加合物進(jìn)行了單獨(dú)控制，是因?yàn)槠涮幏街泻腥樘牵樘桥c氨氯地平伯氨基發(fā)生美拉德縮合反應(yīng)產(chǎn)生有關(guān)物質(zhì)；本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品處方中無乳糖，故不對(duì)這兩個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行控制；試驗(yàn)中，對(duì)本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品及參比制劑的質(zhì)量進(jìn)行了全面的對(duì)比研究（鑒別、有關(guān)物質(zhì)、含量均勻度、溶出度、含量等），影響因素試驗(yàn)及穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品中的有關(guān)物質(zhì)含量均低于參比制劑，穩(wěn)定性明顯優(yōu)于參比制劑，且本品的降解雜質(zhì)譜與參比制劑一致，表明本再評(píng)價(jià)產(chǎn)品處方、工藝優(yōu)于參比制劑。