高效液相色譜法測定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中對(duì)乙酰氨基酚的溶出度

郭倩倩 荊 輝 河南省三門峽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 472000

復(fù)方氨酚烷胺膠囊，是常用的感冒類用藥。常用于緩解感冒所引起的發(fā)熱、頭痛等癥狀，對(duì)預(yù)防感冒也有一定效果[1-3]。其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》，在該標(biāo)準(zhǔn)中，未規(guī)定溶出度的檢查。而溶出度的高低對(duì)于固體制劑在人體內(nèi)起作用大小非常關(guān)鍵，也可以從側(cè)面考察該藥的制備工藝等參數(shù)[4-6]。為了進(jìn)一步了解復(fù)方氨酚烷胺膠囊在人體中的溶出情況。我們選用高效液相色譜法來測定對(duì)乙酰氨基酚的溶出量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Waters e2695高效液相色譜儀系統(tǒng)(Empower 2操作系統(tǒng))，Waters 2998二極管陣列檢測器，天津市天大天發(fā)科技有限公司ZRS-8G型智能溶出儀，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司SK2510HP超聲波清洗器，德國賽多利斯BSA224S電子分析天平。所用儀器均在檢定周期內(nèi)。

1.2 試劑 色譜純醋酸(南京化學(xué)試劑股份有限公司)，色譜純甲醇(天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)，水為超純水，分析純鹽酸(鄭州龍達(dá)化工產(chǎn)品有限公司)。對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100018-201610)；復(fù)方氨酚烷胺膠囊(四川依科制藥有限公司，批號(hào)：190102、181105、180704)。

2 方法

2.1 溶出條件設(shè)置 根據(jù)《中國藥典》(2015年版)通則0931[7]的相關(guān)要求，該復(fù)方制劑溶出采用第一法轉(zhuǎn)籃法。每個(gè)轉(zhuǎn)籃內(nèi)放1粒樣品，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100r/min，取樣時(shí)間設(shè)定為45min。溶出溶液為0.1mol/L的鹽酸。

2.2 高效液相色譜條件設(shè)置 高效液相色譜柱使用Agela C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇∶1%醋酸水溶液(15∶85),柱溫箱設(shè)定溫度為(30±2)℃，檢測波長設(shè)置為254nm，流動(dòng)相流速設(shè)置為1.0ml/min。

2.3 供試品溶液制備 取0.1mol/L的鹽酸6份,每份900ml，分別加入6個(gè)溶出杯中，將加入溶出液的溶出杯超聲20min以排除氣泡。超聲完畢后，放入溶出儀，待溶液溫度穩(wěn)定在37℃時(shí)，放下轉(zhuǎn)籃，以100r/min開始轉(zhuǎn)動(dòng)，計(jì)時(shí)開始，在特定的時(shí)間取樣10ml，過濾，取續(xù)濾液3ml加入10ml棕色容量瓶中，用0.22μm的濾膜過濾后進(jìn)行色譜分析。

2.4 對(duì)照品溶液制備 精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品20.12mg，置于100ml的棕色容量瓶中，加適量流動(dòng)相超聲使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml，加入10ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.5 進(jìn)樣及計(jì)算 精密吸取對(duì)照品、供試品溶液各10μl按照上述條件進(jìn)行色譜分析，根據(jù)對(duì)乙酰氨基酚的色譜峰面積，對(duì)其含量進(jìn)行計(jì)算。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液6份，每份1ml，分別置于100ml、50ml、25ml、20ml、10ml、5ml棕色的容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度。搖勻后，按照“2.2”和“2.5”中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)。峰面積作為縱坐標(biāo)(Y)，濃度作為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸分析。可得回歸方程為：Y=30 675X+568.45(r=0.999 7)；提示在2.07～207.66μg/ml的范圍內(nèi)，對(duì)乙酰氨基酚線性關(guān)系良好。

3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，按照“2.2”和“2.5”中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算其RSD為0.9%。對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品的色譜圖見圖1。

圖1 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品色譜圖

3.3 回收率試驗(yàn) 取已知對(duì)乙酰氨基酚含量的復(fù)方氨酚烷胺膠囊內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚10mg)10份,每份10mg，分別置于100ml棕色容量瓶中，分別精密稱取對(duì)照品適量分別加入容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容至相應(yīng)刻度，搖勻后濾過，按照“2.2”和“2.5”中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.4 溶出度試驗(yàn) 按照“2.1”中設(shè)置的溶出度方法，分別取3批樣品各6粒，加入溶出儀進(jìn)行試驗(yàn)，在15min取樣檢測；同法，另取樣品進(jìn)行試驗(yàn)，分別在30min、45min、60min取樣進(jìn)行檢測。另取對(duì)照品28.03mg，加入100ml棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容至刻度。按照“2.2”和“2.5”中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)。計(jì)算各樣品相對(duì)于標(biāo)示量的平均溶出度。結(jié)果表明，在45min時(shí)，溶出率基本可以達(dá)到100%。見表2。

表2 溶出度試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

4.1 取樣時(shí)間的選擇 《中國藥典》(2015年版)規(guī)定，硬膠囊劑的崩解時(shí)限為30min，在30min時(shí)取樣發(fā)現(xiàn)溶出率在75%左右，這說明在30min的時(shí)候，對(duì)乙酰氨基酚還沒有完全釋放到溶液中。這可能和藥物的制備方法、工藝等有關(guān)。在45min時(shí)取樣檢測發(fā)現(xiàn)溶出率基本在100%左右，因此，筆者將取樣的時(shí)間定到45min。

4.2 溶出介質(zhì)的選擇 對(duì)乙酰氨基酚呈酸性且在水溶液中不易溶，因此，不能選擇水作為溶出介質(zhì)。0.1mol/L的鹽酸溶液接近人胃液的溶度，在此種溶液中進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，更符合人吃藥后藥物轉(zhuǎn)化的實(shí)際情況，并且對(duì)乙酰氨基酚在此種酸性溶液不易解離，利于應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行測定。

4.3 溶出轉(zhuǎn)速的選擇 根據(jù)《中國藥典》(2015年版)中的實(shí)例，轉(zhuǎn)速一般為50r/min、75r/min和100r/min，本試驗(yàn)按照這三個(gè)轉(zhuǎn)速均進(jìn)行了試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用50r/min、75r/min時(shí)，完全溶出所需要的時(shí)間較長。為了節(jié)約時(shí)間，更快速、準(zhǔn)確地得到試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)采用100r/min進(jìn)行試驗(yàn)。本試驗(yàn)采用環(huán)境友好的試劑進(jìn)行試驗(yàn)。能快速、準(zhǔn)確地測定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中對(duì)乙酰氨基酚的溶出度。測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。利用溶出度試驗(yàn)，更準(zhǔn)確地模擬了藥品在體內(nèi)的溶出狀況，為安全用藥提供了科學(xué)依據(jù),建議在標(biāo)準(zhǔn)中加入對(duì)其溶出度的檢查。