HPLC 法同時測定心可舒膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1 和人參皂苷Rb1 的含量

董曉茜，鄢長余，姜范成

（1 遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽；2 大連市檢驗檢測認證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連）

0 引言

三七為五加科植物三七的干燥根及根莖，具有散瘀止血、消腫定痛的作用。臨床主要用于咯血、吐血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛[1]。心可舒膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二冊[2]，標(biāo)準(zhǔn)中對三七藥材的質(zhì)量無有效的控制，因此本實驗參考相關(guān)文獻[3-8]對三七中的有效成分進行了相關(guān)研究，制定了相應(yīng)的含量測定方法，以期對三七藥材的質(zhì)量進行控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2489/2695 液相色譜儀；Sartorius BP211D、SartoriusBP221S 電子天平。

1.2 試劑與試藥

三七皂苷R1（110745-201921，90.4%）、人參皂苷Rg1（110703-201933，98.9%）、人參皂苷Rb1（110704-202028，93.1%）對照品來自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

采 用Thermo SCIENTIFIC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈（A）-水梯度洗脫(0-20min，20A →36A；20-27min，36A →20A)；檢測波長:203nm；流速:1.0ml/min；柱溫:30℃。

2.1.2 溶液的制備

（1）對照品溶液

精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，分別置100ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液，分別精密量取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品儲備液1ml、4ml、4ml，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，作為混合對照品溶液。

（2）供試品溶液

取本品10 粒內(nèi)容物，精密稱定，研細，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

（3）陰性樣品溶液

取缺三七的陰性樣品，按“2.1.2.2”項下的方法制備陰性樣品溶液并進行測定，記錄色譜圖，結(jié)果陰性無干擾（見圖1-圖3）。

圖1 Sp 圖

圖2 陰性圖

圖3 St 圖

2.2 方法學(xué)驗證

2.2.1 線性范圍的考察

精密吸取對照品溶液，分別制成每1ml 含5μg、10μg、20μg、40μg、80μg、100μg 的溶液。在上述色譜條件下分別進樣測定。以質(zhì)量濃度（X，mg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1。

表1 不同成分的線性關(guān)系

2.2.2 精密度考察

取同一供試品溶液連續(xù)進樣6 次，測得峰面積的RSD為0.8。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24h 進樣測定。測得峰面積的RSD 為0.9。結(jié)果表明供試品溶液中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1三種成分在24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 重復(fù)性考察

取同一批供試品，平行制備6 份供試品溶液，測定，記錄各組分色譜峰面積。含量測定結(jié)果RSD 為0.8%。

2.2.5 加樣回收率試驗

取已知含量的心可舒膠囊約0.25g，精密稱定，共6 份，分別加入三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品儲備液0.5ml、3ml、2ml，按“2.1.2”項下（2）方法制備供試品溶液，測定，計算加樣回收率。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的平均回收率(n=6)分別為99.3%、99.3%、99.3%，RSD 為1.0%、0.8%、0.5%。見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

3 討論

3.1 提取溶劑和方法的選擇

為了兼顧3 種成分的溶解性，參考中國藥典的提取方法，本試驗對甲醇以及不同比例的甲醇-水溶液進行了考察，結(jié)果表明3 種成分在甲醇提取情況下，提取效率較高，雜質(zhì)峰較少，因此選擇甲醇作為提取溶劑。由于該制劑中三七為原藥材粉碎直接入藥制成膠囊，因此比較了加熱回流和超聲提取兩種方式對提取效率的影響，結(jié)果顯示加熱回流的效果要好于超聲提取。并對加熱回流的時間進行了考察，最終確定甲醇溶液加熱回流提取1h 作為提取方法。

3.2 流動相的選擇

由于皂苷類成分極性較大，色譜分離需要時間較長，本試驗參考相關(guān)文獻及《中國藥典》2015 年版一部人參、三七藥材項下，以及含有三七藥材的中成藥等相關(guān)項下，試驗了多種等度、梯度的流動相系統(tǒng)，最后根據(jù)色譜時間、分離度、理論塔板數(shù)、基線漂移等方面綜合考慮，最終確定了“2.1.1”項下的流動相系統(tǒng)。