兩種不同原理化學發光在HIV 抗體初篩試驗中的可行性驗證

朱華

（江蘇省泰興市第二人民醫院檢驗科，江蘇 泰興）

0 引言

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染所導致的乙類傳染病。隨著檢驗技術的不斷發展，HIV 抗體檢測試劑、方法越來越多。靈敏度、特異性高的檢測技術可以大大縮短HIV 檢測的窗口期，對HIV 的早期診斷、早控制、早治療，從而切斷HIV 病毒的傳播具有極大意義。過去十年里本院HIV抗體檢測主要采用ELISA 方法和金標法，但ELISA 方法和金標法受試劑、檢測環境、檢測人員等多種因素的影響較大，存在諸多的局限性[1]。而化學發光技術具有靈敏度高、干擾少、自動化高、速度快等優點，在HIV 抗體篩查實驗室中應用也越來越廣泛[2]。本次研究以免疫印跡試驗法作為金標準，對兩種化學發光的檢測結果進行比較，評價兩種檢測方法在HIV 抗體初篩試驗中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019 年1 月至2020 年12 月本院300 例門診皮膚科及住院輸血前體檢高危患者，其中男性215 例，女性85 例，年齡18-75 歲，平均45 歲。

1.2 試劑

本次研究電化學發光使用希森美康株式會社生產的人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑盒；光激化學發光使用博陽生物科技（上海）有限公司生產的人類免疫缺陷病毒HIV（1+2 型）抗體檢測試劑盒。所用試劑均在有效期之內。

1.3 儀器

電化學發光使用HISCL-5000 全自動免疫分析儀、光激化學發光使用LiCA500 自動光激化學發光檢測儀。所用儀器性能可靠。

1.4 方法

兩種化學發光試驗均嚴格按照各自的試劑使用說明書和儀器標準操作程序(SOP 文件)進行操作和結果的判讀。對兩種方法檢測結果不一致者或初篩試驗陽性者，重新采樣，雙份血清（第1 次采集血清和重采樣本血清）、雙試劑復檢，對任一方法檢測陽性的標本和對照標本都按規定并利用免疫印跡法進行確診試驗[3]。

1.5 統計學方法

利用SPSS20.0 軟件進行統計學分析，計數資料用例（%）表示，采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

300 例樣本中，296 例樣本的兩種方法檢測結果均為陰性,使用免疫印跡法確認HIV 抗體陰性。其余4 例疑似樣本在進一步確診實驗中，電化學發光法檢測結果顯示陽性4 例、陰性0 例，光激化學發光檢測結果顯示陽性2 例、陰性2 例。經確診實驗證實，電發光法假陽性2 例，假陰性0 例；光激化學發光假陽性0 例，假陰性0 例。見表1、2。電化學發光和光激化學發光在HIV 抗體初篩試驗中的陽性率對比，差異無統計學意義(P=0.417＞0.05)；光激化學發光檢測法陽性率為0.67%(2/300)，特異性為100%[298/（298+0）]，靈敏度為100%[2/（2+0）]，電化學發光法陽性率為1.33%(4/300)，特異性為99.3%[298/（298+2）]，靈敏度100%[2/(2+0)]。光激化學發光、電化學發光的特異性、靈敏度對比，差異無統計學意義（P＞0.05）

表1 300 例患者HIV 抗體檢測結果（n）

表2 光激化學發光與電化學發光比較（n）

3 討論

電化學發光分析是通過電極對含有化學發光物質的某化學體系施加一定的電化學信號(包括電壓和電流)，一直產生某種新物質，該物質能與體系中存在的化學物質反應或自身進行分解反應，反應不但提供足夠的能量，而且還能產生合適的發光體并接受該反應的釋放能量，形成激發態發光體，不穩定的激發態返回基態時便發出與該發光體性質相一致的發射光，用光電倍增管等普通光學手段測量發光光譜或發光強度從而對物質進行痕量分析。具有靈敏度高、特異性強、線性范圍寬、重現性好、試劑穩定、操作簡單、結果易觀察、部分試劑可重復利用的優點[4]。

光激化學發光技術使用的是均相體系化學發光檢測技術，參與免疫反應的一個抗體上包被了感光珠(sensibead)，內含酞菁(魯米諾類化學發光物質)；另一個抗體上包被了發光珠(chemibead)，內含二甲基噻吩衍生物及Eu 螯合物。在目標抗原存在的情況下，可形成夾心免疫復合物，目標抗原可使兩個抗體上標記的感光珠和發光珠緊密的連接在一起，在680nm 激發光下，可完成魯米諾氧途徑化學發光過程。整個能量(光)的產生、傳遞和放大過程十分穩定，不易受到pH 值、離子強度和溫度的影響。具有反應時間更短、靈敏度更高、特異性更強的優點[5]。

目前已證實HIV 抗體分為HIV-1 型抗體、HIV-2 型抗體兩種亞型，HIV-1 型流行較廣泛，呈全球性流行趨勢，毒力較強潛伏期較短；HIV-2 型流行性局限，毒力弱，但發病潛伏期較長，比較隱匿，無論HIV-1 型還是HIV-2 型在進入人體后都主要侵犯人體免疫系統，最終導致機體免疫功能缺陷，從而引起各種機會性感染和腫瘤的發生。因此，同時篩查HIV-1 型、HIV-2 型抗體會大大提高HIV 抗體檢出率[6]。本次研究中光激化學發光的基礎原理是一種均相免疫反應，其所用試劑在均相條件下，采用雙抗原夾心免疫光激化學發光檢測人血清中的HIV（1+2 型）抗體。而電化學發光是一種異相免疫反應，采用兩步法的化學發光免疫分析法，檢測HIV-1、HIV-2 型抗體和P24 抗原。患者通常在感染HIV 后6-8 周（窗口期）才產生抗體。同時檢測HIV-1、HIV-2 和P24 抗原可縮檢測短窗口期，以滿足臨床的需求。本研究中，光激化學發光和電化學發光的特異性、靈敏度對比，差異無統計學意義（P＞0.05），均適用于HIV 抗體初篩試驗，電化學發光的陽性率稍高于光激化學發光，而光激化學發光特異性稍高，可能基于兩種方法的原理差異。本次研究中兩種化學發光靈敏度均為100%，靈敏度高在HIV 抗體篩查方面更能體現其優勢，可以有效降低HIV 漏檢帶來的風險。根據《全國艾滋病檢測技術規范》要求，對HIV 抗體初篩有反應的樣本，必須用原試劑雙孔或兩種試劑進行復檢試驗[7,8]。此研究中兩種化學發光均可選作各自的替代方法進行復檢試驗。