GLCCI1 基因位點 rs37972、rs37973 基因多態性與難治性哮喘間的關系

冷秋平 王文藝 陳麗萍

新疆維吾爾自治區人民醫院呼吸與危重癥醫學科,新疆 烏魯木齊 830002

難治性哮喘是指除外患者藥物依從性和導致支氣管哮喘惡化等因素后，經過6個月及以上的規范化應用兩種或超過兩種的支氣管哮喘控制藥物治療和管理后仍不能理想控制的哮喘[1]。研究發現支氣管哮喘患者糖皮質激素誘導轉錄因子1 基因位點基因突變可引起機體對糖皮質激素吸入治療的反應性下降，因此我們擬通過探索分析rs37972、rs37973 的基因多態性和新疆地區難治性哮喘患者間關系，為新疆地區的難治性哮喘患者的個體化及精準治療提供理論依據。

1 對象與方法

1.1研究對象 對我院住院規范化吸入ICS/LABA 治療6月及以上的支氣管哮喘患者進行隨訪，從中納入支氣管哮喘完全控制者30 例(ACT 評分 25 分)：女17例，男13例，平均年齡為(51.74±16.89)歲；難治性哮喘者30例(ACT 評分<20 分)，女18例，男12例，平均年齡為(49.23±12.05)歲；同期健康體檢者30例，女16例，男14例，平均年齡為(50.12±11.25)歲，均已簽署過知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1DNA 制備 依照 Greiner 公司提供全血基因組 DNA 試劑盒說明書進行 DNA 制備。

1.2.2基因位點選取 通過盲篩的方法在UCSC 數據中選取GLCCI1 的位于啟動區的基因位點rs37972、rs37973。

1.2.3引物設計 應用美國 Sequenom 公司 MassARRAY Assay Design 軟件進行引物設計。

1.2.4基因分型檢測 應用多重 PCR 技術、MassARRAY的 i-PLEX 單堿基延伸技術，并最終通過基質輔助激光解吸附電離飛行時間質譜分析質譜技術進行分型檢測。

1.3數據分析 采用 SPSS 22.0 數據分析軟件系統進行。計量資料應用均數±標準差；組間基因型或等位基因分布頻率的比較應用χ2檢驗，計算相對風險度(OR)和 95%可信區間(CI)；3 種基因型間比較應用方差分析，2 種基因型間比較應用 t 檢驗。P<0.05，有統計學差異。

2 結 果

2.1rs37972、rs37973 SNP 位點基因型分布情況 rs37972存在三種基因型(CC/CT/TT)、rs37973存在三種基因型(AA/AG/GG)可發現水腦畸形、無腦或露腦畸形、前腦無裂畸形、胸腹壁缺損、右位心、胸外心、單心室、嚴重心內膜墊缺損(12-13+6)、體蒂異常、肢體或長骨完全或部分缺失、形態異常等。通常按照胎兒從上到下、從頭到腳的順序依次逐項檢查，可避免因遺漏掃查內容而造成的漏診[6]。

使用HWE軟件檢測基因型的P值，與哈迪-溫伯格平衡定律相符，具總體代表性。

2.2rs37972 和 rs37973 基因型的比較 rs37972 的基因型分布頻率三組間比較，無統計學差異(P>0.05)。rs37973 基因型分布頻率三組間比較，差異無統計學意義(P>0.05)；GG 基因型頻率顯著高于正常對照組，P=0.041，但因三組間比較P>0.05，差異無統計學意義。詳見表1、表2。

表1 rs37972 基因型及等位基因分布頻率比較

表2 rs37973基因型及等位基因分布頻率比較

3 討 論

研究表明，GLCCI1是 GC誘導炎癥細胞凋亡的早期信號，若GLCCI1表達水平降低，將會直接引起炎癥細胞凋亡的減少，從而降低機體對糖皮質激素的敏感性，而 rs37972、rs37973 的基因多態性可致患者對糖皮質激素治療的敏感性降低[2]。目前尚未見文獻報道rs37972、rs37973 基因多態性與難治性哮喘的關系。本研究中，我們對新疆地區支氣管哮喘人群進行 GLCCI1 的 rs37972、rs37973 基因多態性檢測，但未能發現難治性哮喘與rs37972、rs37973 的基因多態性存在相關性；但支氣管哮喘完全控制組的 rs37973 的 GG 基因型頻率顯著高于正常對照組(P=0.041)，表明攜帶 GG 基因型支氣管哮喘患者對糖皮質激素應答弱，可能通過調節GLCCI1 基因表達在糖皮質激素應答方面起作用。但本研究樣本量較小，結果可能存在偏差，有待后續增加樣本量進一步深入研究。