實時熒光核酸恒溫擴增技術(shù)在婦女生殖道病原體感染診斷中的應(yīng)用價值

劉 江 王小翠

齊齊哈爾市第一醫(yī)院,黑龍江 齊齊哈爾 161005

沙眼衣原體、解脲脲原體在婦女生殖道病原體感染中較為常見，極易導(dǎo)致泌尿生殖系統(tǒng)炎癥[1]。實時熒光核酸恒溫擴增技術(shù)(SAT)源自RNA恒溫擴增技術(shù)(TMA)，是較為新型的一種核酸檢測技術(shù)，可同時對尿液、拭子進行檢測，非侵入性操作，具有較高的特異性、靈敏性，臨床應(yīng)用價值高[2]。本研究選取197例疑似婦女生殖道病原體感染患者，探討實時熒光核酸恒溫擴增技術(shù)的臨床應(yīng)用效果。如下所示。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年10月-2019年10月197例疑似婦女生殖道病原體感染患者，年齡25-48歲，平均年齡(32.56±3.26)歲。患者均出現(xiàn)尿頻、瘙癢、白帶增多等癥狀。

1.2方法 樣本均為婦女宮頸拭子，采用專用無菌拭子置入陰道中取宮頸樣本，且在取樣后及時送檢。

解脲支原體采用培養(yǎng)法、SAT進行檢測，在進行培養(yǎng)法進行檢測時，將宮頸拭子及時接種到培養(yǎng)基，放置到35攝氏度、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，持續(xù)48h。

沙眼衣原體采取免疫層析膠體金檢測法、SAT進行檢測，膠體金檢測樣本按照試劑說明書進行操作。

解脲支原體、沙眼衣原體在采用SAT進行檢測，采取熒光ABI7500型PCR儀予以檢測，根據(jù)試劑盒、儀器操作說明書完成操作,擴增條件42℃1min,實施40個循環(huán),熒光素通道FAM,dt值≤35可認(rèn)為是陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS20.0處理分析，計數(shù)資料經(jīng)X2檢驗，計量資料經(jīng)t檢驗，若P<0.05說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1沙眼衣原體檢測結(jié) 免疫層析膠體金檢測沙眼衣原體陽性率為3.55%(7/197)，SAT檢測陽性率為5.08%(10/197)，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(x2=0.553，P=0.457)。見表1。

表1 沙眼衣原體檢測結(jié)果(n)

2.2解脲脲原體檢測結(jié)果 培養(yǎng)法陽性率為54.31%(107/197)，SAT檢測陽性率為51.27%(101/197)，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(x2=0.367，P=0.545)。見表2。

表2 解脲脲原體檢測結(jié)果(n)

3 討 論

婦女生殖道病原體感染中，CT、UU導(dǎo)致的感染幾率較高，而且極有可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)女性不孕、早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)死亡等，是較為常見的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題[3]。CT、UU導(dǎo)致的生殖道感染往往經(jīng)性接觸傳播，通常屬于隱匿性感染，無特殊表現(xiàn)，因此臨床診斷時極易漏診。對患者進行臨床檢測時，常規(guī)方法主要為涂片、培養(yǎng)、免疫學(xué)等，往往需要較長時間，而且有的方法特異性較差，導(dǎo)致臨床診斷治療受到極為不良的影響。因此需選取更為適宜的方法進行臨床診斷[4]。

經(jīng)研究可知，免疫層析膠體金檢測沙眼衣原體陽性率與SAT陽性率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異；培養(yǎng)法陽性率與SAT陽性率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。由此可知，將免疫層析膠體金、培養(yǎng)法作為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，采取SAT進行檢測，兩者在陽性率方面無明顯對比差異。

SAT是核酸恒溫擴增技術(shù)與實時熒光檢測技術(shù)進行結(jié)合的核酸檢測技術(shù)。

SAT是將RNA作為起始模板，經(jīng)M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶形成1個雙鏈DNA拷貝，通過T7-RNA多聚酶由此DNA拷貝形成多個RNA拷貝，且每個RNA拷貝由反轉(zhuǎn)錄起進入到下個擴增循環(huán)帶，由熒光標(biāo)記探針和RNA拷貝進行特異性結(jié)合，可形成熒光。此熒光信號能夠通過熒光PCR儀進行實時捕獲，可對擴增產(chǎn)物的形成進行直觀反映[5]。與傳統(tǒng)DNA方法相比較，其靈敏度、特異性較高，而且反應(yīng)較為穩(wěn)定，可有效擴增，反應(yīng)時間較短，而且操作較為簡單，不必進行溫度循環(huán)、于恒溫器、水浴鍋內(nèi)可予以核酸提取，而且由于RNA容易降解，所以不會導(dǎo)致嚴(yán)重低污染。解脲脲原體經(jīng)SAT檢測呈現(xiàn)陽性，通過培養(yǎng)法檢測顯示陰性，通常認(rèn)為是采集拭子內(nèi)病原菌含量較少，培養(yǎng)靈敏性較低，也有可能是處于感染早期，導(dǎo)致病原體DNA量少，但RNA量較多，通過SAT可能夠?qū)NA進行檢測，因此可顯示為陽性[6]。對CT、UU進行SAT檢測顯示陰性，培養(yǎng)法顯示陽性，極有可能是因標(biāo)本未合理保存導(dǎo)致RNA丟失造成的。

總之，SAT檢測在婦女生殖道病原體沙眼衣原體、解脲支原體感染診斷中具有明顯效果，而且操作簡單，可進行推廣使用。