UFC1在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及意義*

田祖國，高 陸，翁春嵐，劉水玉

遵義醫科大學附屬醫院血液內科，貴州遵義 563003

彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤最常見的類型，占所有非霍奇金淋巴瘤的35%～40%，由于DLBCL在臨床、分子遺傳學及免疫表型等方面具有高度異質性，現階段臨床上主要行化療，雖然化療的有效性較高，但化療的敏感性會影響總體效果，遠期預后不佳[1-2]。尋找與DLBCL發生、發展有關的生物標志物對DLBCL的早期診斷及治療具有重要意義。研究發現，類泛素蛋白與惡性腫瘤，包括血液系統惡性腫瘤的發生、發展密切相關[3]。UFC1是一個新鑒定的類似泛素結合酶E2，屬于類泛素Ufm1修飾系統(Ufm1)[4-5]。而UFC1在DLBCL中的表達情況鮮見相關研究報道。本研究擬研究UFC1在DLBCL中的表達情況，探討其在DLBCL診療中可能的價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012年1月至2015年1月于遵義醫科大學附屬醫院40例DLBCL患者石蠟標本作為DLBCL組，以20例反應性淋巴結炎患者石蠟標本作為對照組。收集40例DLBCL患者的臨床特征資料，包括患者年齡、性別、國際預后指數(IPI)評分、Ann Arbor分期、美國東部腫瘤協作組(ECOG)評分、結外受累數目、B癥狀、血清乳酸脫氫酶(LDH)、BCL-2蛋白、Ki-67水平等。

1.2方法 采用En Vision法進行免疫組化染色[試劑：Anti-UFC1抗體(Abcam公司，貨號ab189252)；免疫顯色試劑盒EnVisionTMFLEX+、Mouse、HighpH(DAKO K800211)等]。結果判定標準采用免疫風險得分(IRS)評分方法，對陽性細胞的數量及染色強度進行綜合評分，以兩者相加后的總分進行結果判定，>4分為陽性，≤4分為陰性。結果由2名病理科醫師雙盲法讀片判斷。

1.3在線數據庫分析UFC1在腫瘤中的表達 GEPIA數據庫[6](http://gepia.cancer-pku.cn/index.html)是由北京大學基于TCGA和GTEx數據庫建立的在線分析數據庫，包含9 736份腫瘤組織標本和8 587份正常組織標本。Oncomine數據庫[7](https://www.oncomine.org/resource/main.html)已經收集了715個數據集的86 733份標本的基因表達數據，整合了GEO、TCGA和已發表的文獻等來源的RNA和DNA-seq數據。兩個數據庫均可用于分析基因表達差異、預測共表達基因等，本研究利用GEPIA及Oncomine數據庫分析UFC1在多種類型腫瘤及DLBCL中的表達。

1.4GEO數據庫 GEO數據庫[8](http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)是一個國際公共數據庫，用于存儲高通量和二代測序基因組數據集，可提供一些基于網絡的工具和策略來幫助用戶查詢、分析和可視化數據。GSE10846[7]數據集中收錄了181例采用CHOP方案化療的DLBCL患者基因表達譜及DLBCL患者隨訪、生存時間等臨床信息。本研究根據這181例患者的UFC1表達均值將其分為高表達組和低表達組，分析UFC1基因表達與DLBCL患者生存的關系。

1.5Pathway Commons數據庫 Pathway Commons數據庫[9](http://www.pathwaycommons.org)是公開應用的通路數據庫，能夠瀏覽并搜索來自多個來源的基因通路信息。當前包含了來自9個數據庫(超過1 400個通路和687 000個相互作用的數據)，本研究利用Pathway Commons數據庫研究與UFC1具有相互作用的相關基因。

1.6統計學處理 采用SPSS17.0軟件對數據進行數據處理及統計分析，組間比較采用χ2檢驗；GEO數據生存數據應用Gramphpadprism 8.1進行生存分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1腫瘤數據庫中UFC1的表達 GEPIA數據庫分析顯示，UFC1在DLBCL、肝細胞癌(LIHC)、胸腺瘤(THYM)及膽管癌(CHOL)中均呈高表達(P<0.01)，而在腎嫌色細胞癌(KICH)中呈低表達；Oncomine數據庫顯示，UFC1在DLBCL、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、黑色素瘤及白血病中存在明顯高表達；而Oncomine數據庫進一步分析顯示，UFC1在DLBCL中表達明顯升高，其中以活化B細胞型DLBCL中UFC1高表達更明顯。

2.2UFC1的染色表現 在反應性淋巴結炎組織中UFC1染色強度鏡下表現見圖1。

2.3UFC1的組織表達 40例DLBCL組織中有37例UFC1表達陽性，20例反應性淋巴結炎組織中有5例UFC1蛋白表達陽性，差異有統計學意義(P<0.001)。

注：A為UFC1 1分；B為UFC1 2分；C為UFC1 3分。

2.4UFC1表達與DLBCL患者臨床特征的關系 對納入的DLBCL患者的UFC1表達與其臨床特征進行分析，發現進展期(Ⅲ、Ⅳ期)DLBCL患者UFC1蛋白表達陽性率明顯高于局限期(Ⅰ、Ⅱ期)患者(P=0.047)；而UFC1表達陽性率在不同年齡、性別、IPI評分、ECOG評分、結外受累數目、B癥狀、LDH、BCL-2蛋白、Ki-67水平患者間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 UFC1表達與DLBCL患者臨床特征的關系[n(%)]

續表1 UFC1表達與DLBCL患者臨床特征的關系[n(%)]

2.5UFC1表達與DLBCL生存預后關系 根據GEO數據庫資料分析顯示，UFC1高表達的DLBCL患者總生存期更短(P=0.009)，見圖2。

圖2 UFC1表達與DLBCL患者生存預后關系

2.6UFC1調控網絡分析 Pathway Commons數據庫分析顯示，UFC1與24種其他基因存在相互作用關系，包括AR、ATP6V1F、CLNS1A、KIRREL3、LDHB、LYPLA2、NEDD8、OGA、RPS27A、STAT1、TCF3、TYMS、UBA3、UBA5、UBA52、UBB、UBC、UNK、USP9X、VCL、VHL、WDYHV1、YKT6、ZFYVE19。

3 討 論

DLBCL是非霍奇金淋巴瘤中最常見的類型，無論在形態學還是臨床特征上，DLBCL都具有明顯的異質性，有相當一部分DLBCL患者治療效果不佳，患者的生存期存在明顯差異。研究DLBCL可能的發病機制對于DLBCL的診斷、治療及預后判斷均有積極的臨床意義。泛素-蛋白酶體系統(UPS)介導細胞內泛素化的蛋白質經蛋白酶體降解，可高效并高選擇性地降解細胞內蛋白質，如細胞周期調節蛋白、癌基因和抑癌基因產物及變性變構蛋白等[10]。繼泛素在20世紀70年代中期被發現后，與泛素類似的小蛋白家族不斷被報道，并被稱為泛素樣蛋白(UBLs)，其成員不斷增加。目前已經鑒定出9大類17種的類泛素蛋白，包括NEDD8、SUMO、ISG15、FUB1、FAT10、Atg8、Atg12、Urm1和UFM1[4]。

UFC1是一個新鑒定的類似泛素結合酶E2，在人體定位于1號染色體上。Ufm1首先被Uba5(E1)激活，然后被轉移給Ufc1(E2)，再被轉移給Ufl1(E3)，最后共價結合到靶蛋白上。目前發現的靶蛋白有C20orf116[11]、CDK5RAP3/LZAP[12]。有研究發現，與正常組織和細胞系相比，UFC1在乳腺癌組織和細胞系中呈高表達[13]。沉默的UFC1抑制了乳腺癌細胞的多種生物學活性，而乳腺癌細胞也起著miR-34a海綿的作用LncRNA，UFC1通過miR-34a/CXCL10軸調控乳腺癌的生物學活性，為乳腺癌提供了新的診斷標志物和潛在的治療靶標[14]。有研究以UFC1基因為對象，結果顯示，在正常的HBL100乳腺細胞系中的mRNA表達最低，而在乳腺癌細胞系MCF7、MDA-MB231、MDA-MB-453中的表達明顯增強，并且在乳腺癌細胞系MDA-MB-453中的表達最強；Western-blot檢測結果也顯示，在乳腺癌組織中UFC1基因的表達明顯高于正常乳腺組織，其表達量的不同，提示UFC1基因與乳腺癌的發生和發展有著密切關系[15-17]。

本研究首先應用在線數據庫分析UFC1的表達，顯示其在多種惡性腫瘤中均有異常的高表達，其與腫瘤有較為密切的關系。并且兩個數據庫均證實UFC1在DLBCL中也呈明顯的高表達，提示其與DLBCL的發病可能存在相關性。進一步將納入的標本采用免疫組化檢測，證實在DLBCL患者標本中UFC1表達明顯高于反應性淋巴結炎患者標本。將DLBCL患者的臨床特征進行分析，發現進展期(Ⅲ、Ⅳ期)DLBCL患者UFC1表達明顯高于局限期(Ⅰ、Ⅱ期)DLBCL患者，而DLBCL患者的臨床分期可能影響患者的臨床預后。因本研究隊列病例數較少，隨訪脫落數據偏多，筆者選擇GEO數據庫中包含DLBCL長期隨訪數據的GSE10846數據集分析UFC1表達與DLBCL生存預后關系，結果顯示，UFC1高表達的DLBCL患者總生存期更短。在Pathway Commons數據庫中檢索UFC1基因，發現其與多種腫瘤基因均存在相互作用關系，比如NEDD8與淋巴瘤密切相關，其作為淋巴瘤治療靶點已初步取得了臨床效果[18]。由此推測UFC1可能與多種腫瘤機制相關。

綜上所述，UFC1在DLBCL患者中呈異常高表達，UFC1的異常高表達與DLBCL較晚分期等存在相關性，并提示UFC1高表達的DLBCL患者可能存在不良預后。UFC1在多種腫瘤中異常表達，并且與多種腫瘤基因存在相互作用的可能，其深入的作用機制有待未來的進一步研究。