白細胞介素-22在慢性阻塞性肺疾病穩定期患者外周血中的變化及其作用機制

趙娜 冷報浪 王海燕 徐佳

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是一種以持續呼吸系統癥狀和氣流受限為特征的常見疾病，具有高發病率、高致殘率、高死亡率等臨床特點。香煙煙霧（CS）暴露導致大、小氣道的炎癥［1］，吸煙是慢阻肺發生和發展的重要危險因素［2］。免疫炎癥介質引起持續的免疫炎癥細胞浸潤及其產生的破壞性蛋白酶在COPD肺損傷中起關鍵作用［3］。其中，白細胞介素-22（IL-22）是強效的免疫炎癥介質之一，而關于COPD患者的痰液及氣道中IL-22水平升高的作用機制尚不明確。本文觀察COPD穩定期患者血清IL-22、IL-8和中性粒細胞計數的相關性，探討血清中IL-22的水平變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2018年3月至2019年3月在本院住院的COPD穩定期患者30例，作為觀察組。其中，男20例、女10例；年齡60～80歲，平均（64.81±7.26）歲。（1）納入標準：①符合2018年Gold指南中的診斷標準［4］；②年齡≥60歲；③患者及家屬知情同意。（2）排除標準：①納入前1個月內有呼吸道感染史；②合并肺部感染、哮喘、支氣管擴張、肺纖維化等其他呼吸系統疾??；③合并嚴重心、肝、腎功能不全，惡性腫瘤。另同期選取本院健康體檢者28例，作為對照組。納入標準：無COPD、哮喘、支氣管擴張等慢性呼吸系統病史，無過敏史，近1個月內無呼吸道感染及服用藥物史。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 （1）抽取研究對象清晨空腹外周靜脈血5 ml，4℃環境下靜置30 min，以2500 r/min離心10 min，離心半徑13.5 cm，分離血清后-70 ℃保存。采用IL-22和IL-8試劑盒（天津安諾瑞康生物技術有限公司，ab119543，ac119442）檢測血清IL-22和IL-8水平，嚴格按照說明書進行操作。采取雙抗體夾心法，稀釋標準品和待檢血清，將稀釋好的標準品和待檢血清加入酶標板中，37 ℃孵育30 min，洗板，加入酶標試劑，同前再行孵育、洗板，之后加入顯色劑，顯色10 min，加入終止液，450 nm波長，酶標儀（帝肯 Sunrise）測定OD值。（2）所有研究對象入院時常規抽取外周靜脈血2 ml，置于EDTA-K2抗凝管中充分混勻，分離血清后，用全自動血細胞分析儀（希森美康 XN-1000）及配套試劑檢測外周血白細胞及中性粒細胞計數。

1.3 觀察指標 血清IL-22、IL-8表達水平，白細胞、中性粒細胞計數。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件。計量資料符合正態分布以（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料以n（%）表示，采用確切概率法或χ2檢驗；應用Pearson進行相關性檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 見表1。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別 n 年齡（歲） 男/女（n）吸煙［n（%）］WBC（×109/L） CRP（mg/L）觀察組 30 48.1±7.26 20/10 12（40） 6.19±1.28* 19.11±5.60*對照組 28 59.4±8.14 20/8 9（32） 3.44±2.23 14.20±4.08

2.2 兩組血清IL-22、IL-8的表達水平比較 見表2。

表2 兩組血清IL-22、IL-8的表達水平比較［ng/ml，（）］

表2 兩組血清IL-22、IL-8的表達水平比較［ng/ml，（）］

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別 n IL-22 IL-8觀察組 30 49.5±13.1* 18.26±4.22*對照組 28 19.2±4.01 4.13±1.04 t值 2.308 2.802 P值 0.000 0.000

2.3 兩組外周血白細胞及中性粒細胞計數比較 見表3。

表3 兩組外周血白細胞及中性粒細胞計數比較［×109/L，（）］

表3 兩組外周血白細胞及中性粒細胞計數比較［×109/L，（）］

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別 n 白細胞總數 中性粒細胞計數觀察組 30 6.19±1.28* 4.63±1.57*對照組 28 3.04±2.23 3.75±1.62 t值 27.391 13.290 P值 0.002 0.003

2.4 Pearson相關性分析 COPD穩定期患者的血清IL-22水平與IL-8水平呈正相關（r=0.313，P＜0.05）；COPD穩定期患者的血清IL-8水平與外周血中性粒細胞計數呈正相關（r=0.683，P＜0.05）。見圖1-2。

圖1 血清IL-22與IL-8相關性分析

圖2 血清IL-8與中性粒細胞計數的相關性分析

3 討論

IL-22是IL-10細胞因子家族成員之一，主要由Th17細胞和3型固有免疫細胞（ILC3s）分泌的細胞因子，在黏膜炎癥和免疫監視方面發揮重要作用，能夠招募中性粒細胞至受損部位，并且可以誘導大量趨化因子和炎癥細胞因子的產生［5］，說明IL-22具有促炎或致病作用。LIU等［6］研究發現，吸煙伴肺功能正?；颊吆虲OPD患者血清及痰中的IL-22水平明顯高于不吸煙肺功能正常組。本研究結果顯示，COPD穩定期患者的血清IL-22、IL-8及中性粒細胞水平均高于對照組（P＜0.05），表明IL-22可能在COPD的發病機制中起重要作用。Pearson相關性分析顯示，IL-22與IL-8水平呈正相關（P＜0.05），IL-8與中性粒細胞計數呈正相關（P＜0.05），提示IL-22可能獨立于感染之外促進COPD患者中性粒細胞氣道炎癥。IL-8作為一種重要的中性粒細胞趨化因子，參與中性粒細胞氣道炎，也被認為對COPD的發展具有潛在的作用［7］。LIU等［6］研究發現，在COPD患者的支氣管上皮細胞，IL-8具有較高的基線表達水平，且循環血中IL-8水平與肺功能呈負相關，因此IL-8可能是一個降低中性粒細胞募集的靶點。本研究發現，COPD患者血中性粒細胞計數較對照組升高，提示COPD患者存在突出的中性粒細胞氣道炎癥。中性粒細胞分泌的中性粒細胞彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、蛋白酶-3、MMP-8、MMP-9可促進肺泡的破壞，導致肺氣腫［8］。

本研究尚未解決的問題如下：僅對COPD穩定期患者的血清IL-22表達情況進行分析，未明確其在氣道及肺組織中的表達情況；僅對IL-22在COPD患者中的病理機制做初步研究，獲得的結果尚不能完全證明其在氣道炎癥方面的作用，需阻斷IL-22或基因敲除進行進一步探討。