槐杞黃顆粒對肝癌患者血清MMP-7表達的影響及療效觀察

吳云輝 陸許貞 王柯尹

原發性肝癌（PHC）簡稱肝癌，其發病率和死亡率居我國惡性腫瘤的第二位，其中肝細胞癌（HCC）約占90%，具有侵襲性強、生長速度快、轉移范圍廣等特性，是其臨床治療效果差和死亡率高的主要原因［1］。研究發現，基質金屬蛋白酶-7（MMP-7）等基質金屬蛋白酶（MMPs）通過降解細胞外基質（ECM）參與癌細胞的浸潤、生長和遠處轉移等過程，是肝癌等惡性腫瘤發展的必經階段［2］。近年來，中醫臨床治療癌癥的開展得到了醫學界的廣泛認可，已知槐杞黃顆粒可抑制肝癌細胞中MMP-7等基質金屬蛋白酶的表達，進而降低腫瘤細胞的遷移和侵襲力，然而臨床研究資料目前尚缺乏［3］。本研究旨在觀察肝癌患者口服槐杞黃顆粒治療前后的血清中MMP-7水平變化，通過隨訪并進行生存分析以明確其治療效果。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2018年1月至2018年12月本院收治的肝癌患者90例。（1）納入標準：①經臨床和病理確診為肝癌，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期，預計生存期≥3個月；②存在手術禁忌或患者及家屬不愿意接受手術。均行TACE介入治療，未行放化療或其他介入治療；③自愿簽署知情同意書。（2）排除標準：①合并嚴重心、肝、腎、肺等臟器疾病；②合并其他原發惡性腫瘤；③各種因素導致資料無法收集的患者。隨機分為常規治療組和觀察組，每組各45例，另同期選取健康體檢者45例作為正常對照組。常規治療組，男31例、女14例；年齡（52.11±13.20）歲；觀察組，男24例、女21例，年齡（53.58±17.97）歲；對照組，男28例、女17例，年齡（51.16±13.17）歲。三組的性別、年齡等資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組和常規治療組以影像學發現肝占位病灶開始到行TACE術前的病程分別為33.00（43.5）d和31.00（36.50）d，差異無統計學意義（Z=0.827，P=0.408）。觀察組的病因包括乙型肝炎病毒感染31例（68.89%），血吸蟲病14例（31.11%）；38例（84.44%）合并肝硬化；臨床分期Ⅲ期12例（26.67%），Ⅳ期33例（73.33%）。常規治療組的病因包括乙肝病毒感染37例（82.22%），血吸蟲病8例（17.78%）；35例合并肝硬化（77.78%）；臨床分期Ⅲ期17例（37.78%），Ⅳ期28例（62.22%）；兩組肝癌患者的病因、合并癥及臨床分期構成比較，差異均無統計學（P＞0.05）。本研究經醫院醫學倫理委員會批準（2017-107）。

1.2 治療方法 TACE術后，常規治療組給予護肝等對癥處理，觀察組在常規治療組的基礎上加用槐杞黃顆粒（規格：10 g/袋，國藥準字B20020074，廠家：啟東蓋天力藥業有限公司），2袋/次，2次/d，連續口服3個月。

1.3 血清MMP-7檢測 所有受試者分別于TACE治療的前1日、觀察組治療結束的次日空腹采集全血 5～10 ml，置于分離膠-促凝管中，4 ℃低溫離心機以2000 r/min離心10 min，收集血清立即儲存于-70 ℃冰箱。提前20 min從冰箱取出試劑盒和待測樣本血清，室溫下放置至樣本復溶，采用ELISA法檢測MMP-7（試劑盒購自美國R&D公司），檢測程序嚴格按說明書操作，采用全自動定量酶標儀（購自芬蘭Thermo公司）讀取吸光度值。

1.4 觀察隨訪 電話或門診隨訪至2020年7月，了解患者生存情況。生存時間為從TACE術后日期至因肝癌相關死亡日期或隨訪終點。

1.5 統計學方法 采用SPSS 22.0 統計軟件。計量資料符合正態分布以（）表示，方差齊組間比較采用t檢驗；多樣本比較采用單因素方差分析，進一步比較采用LSD-t檢驗；治療前后血清MMP-7水平比較，采用兩因素重復測量的方差分析；偏態分布則以［M（QR）］表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。采用Kaplan.Meier法繪制生存曲線并計算生存率，Log.rank檢驗進行生存分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前三組血清MMP-7水平比較 常規治療組和觀察組的血清MMP-7水平分別為（12.072±4.151）ng/ml和（11.679±4.253）ng/ml，明顯高于健康對照組（1.856±0.772）ng/ml，差異均有統計學意義（t=13.465，14.003，P＜0.001）；常規治療組和觀察組比較，差異無統計學意義（t=0.538，P=0.591）。

2.2 治療前后常規治療組和觀察組血清MMP-7水平比較 見表1。

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

組別 治療前 治療后 F值 P值常規治療組 12.072±4.151 11.663±4.329 3.010 0.090觀察組 11.679±4.253 9.461±3.907* 53.710 ＜0.001 F值 0.268 9.496 P值 0.607 0.004

2.3 隨訪情況與生存分析 90例患者均獲得隨訪，隨訪時間為4～29個月，中位隨訪時間為13個月；常規治療組刪失病例1例，為隨訪結束時未死亡病例，該組中位生存時間為11個月，第1、2年的生存率分別為37.78%和23.53%；觀察組刪失病例5例，其中4例為隨訪結束時未死亡病例，1例在隨訪18個月時退出研究為脫落病例，其余均結束隨訪，中位生存時間為16個月，第1、2年的生存率分別為64.44%和44.83%；兩組患者的生存率比較，差異有統計學意義（χ2=5.095，P=0.024）。生存曲線見圖1。

圖 1 肝癌患者總體生存曲線

3 討論

肝癌浸潤與轉移是一個復雜的過程，其中腫瘤微環境中ECM被降解，形成轉移灶是關鍵的步驟［4］。MMPs是一族活性依賴于鋅離子和鈣離子的內源性蛋白水解酶，近年來研究發現MMPs與肝癌惡性腫瘤的浸潤和轉移關系密切［5］。MMP-7又稱基質溶解素，具有廣泛的作用底物，是MMPs主要成員之一，能降解 Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白（FN）、層粘連蛋白（LN）和可溶性彈性蛋白等多種ECM，通過滅活а1抗胰蛋白酶來激活其他MMPs，進一步降解ECM及基底膜，破壞腫瘤入侵的自然屏障，還能調節VEGF受體等影響內皮細胞的活力參與腫瘤血管新生［6］，進而促進腫瘤的浸潤、生長和轉移。黎爵等［7］研究表明，肝癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌等多種惡性腫瘤中都有MMP-7高表達，并與病情進展密切相關。本研究結果顯示，兩組肝癌患者的血清 MMP-7 水平明顯高于正常對照組，提示血清MMP-7升高可能參與肝癌的進展。

槐杞黃顆粒是由槐耳菌質配伍中藥枸杞子、黃精而制成的顆粒劑。枸杞子補肝明目，可促進肝損傷的修復和肝細胞再生；黃精補氣而兼潤養，抗疲勞抗氧化，具有益氣滋陰之功效；槐耳菌質是槐杞黃顆粒主要成分，歷代本草書籍記載槐耳有“治風”“破血”“益力”之功效，具有提高機體免疫力等功能［8］。其他惡性腫瘤既往研究顯示，槐耳能通過抑制MMPs表達而降低腫瘤細胞的遷移和侵襲力，將槐耳顆粒和輔助化療聯合應用，乳腺癌患者總生存率顯著提高，預后明顯改善［9］。推測血清中的MMP-7等水平下降與TIMPs抑制MMPs的活性相關，從而削弱了腫瘤細胞的遷移能力［10］。本研究觀察組患者在常規治療的基礎上口服槐杞黃顆粒，治療后的血清MMP-7水平明顯下降，與治療前及常規治療組治療后比較，差異均有統計學意義（P＜0.001），提示槐杞黃顆粒也能降低肝癌患者的MMP-7表達水平。經隨訪，觀察組患者的中位生存時間也明顯長于常規治療組對照組，差異具有統計學意義（P＜0.001），可推測聯合槐杞黃顆粒治療可延長患者的生存時間。肝癌的常規治療，目前國內外主要采用手術、放療、介入治療，但效果不太理想，TACE殺死大部分腫瘤中央部分的癌組織，術后腫瘤完全壞死率僅為0%～4.8%［11］，在取得一定療效的同時安全性也較大，因此選擇TACE術治療的肝癌患者逐漸增多。本研究為減少偏倚，選用TACE術作為常規治療，其它常規治療方案聯合槐杞黃顆粒治療的相關研究今后將擴大病例數量進一步開展。

綜上，槐杞黃顆粒可能通過降低MMP-7水平，進而影響通過MMP-7激活的多種MMPs成員在肝癌細胞的表達，從而降低肝癌的浸潤轉移能力。提示聯合槐杞黃顆粒治療可以起到抑制腫瘤轉移的作用，可能將在肝癌發病中扮演重要角色，成為防治肝癌的選擇之一。