乙肝兩對(duì)半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)診斷慢性乙型肝炎的臨床價(jià)值

曹惠

江蘇省揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 （江蘇揚(yáng)州 225200）

慢性乙型肝炎是一種常見(jiàn)的傳染性疾病，患者臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、腹脹、惡心、畏食與乏力，病情嚴(yán)重者還會(huì)有脾大、肝掌、蜘蛛痣及慢性肝病面容伴隨出現(xiàn)[1]。該疾病的傳播途徑包括醫(yī)源性傳染、輸血、母嬰及密切生活接觸等，且疾病病程較長(zhǎng)，治愈難度大，隨著病情進(jìn)展，可發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌，對(duì)患者生命質(zhì)量與身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響[2-3]。乙肝兩對(duì)半即乙肝五項(xiàng)，包括乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）、乙肝e 抗體（hepatitis B e antibody，HBeAb）、乙肝e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）[4-5]。乙型肝炎病毒DNA 通常是指乙型肝炎病毒基因，為一般病毒感染最敏感、直接的指標(biāo)，若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則提示具有傳染性或存在病毒復(fù)制[6]。為提高慢性乙型肝炎的診斷準(zhǔn)確率，改善患者預(yù)后，本研究探究慢性乙型肝炎診斷中乙肝兩對(duì)半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月至2020年3月我院收治的115例慢性乙型肝炎患者，男63例，女52例；年齡24～78歲，平均（47.05±2.38）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整；自愿參與本研究并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型傳染??；合并其他病毒性肝炎；急性乙型肝炎；中途退出。

1.2 方法

乙肝兩對(duì)半檢測(cè)：抽取患者清晨空腹靜脈血4 ml，于室溫下放置30 min，按照3 000 r/min 的速度離心5 min，取上清液，待用；采用科美化學(xué)發(fā)光儀LICA500，博陽(yáng)生物科技（上海）有限公司試劑盒檢測(cè)乙肝兩對(duì)半；正常參考值為，HBcAb ≤15 PEIU/ml，HBeAb ≤3 PEIU/ml，HBeAg ≤0.7 PEIU/ml，HBsAb ≤10 mIU/ml，HBsAg ≤0.20 mIU/ml[7]。

乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)：采用7500型定量PCR儀（AB Applied Bio systems 公司）及乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（圣湘公司）進(jìn)行檢測(cè)；從-20 ℃冰箱取出核酸釋放劑、內(nèi)標(biāo)、酶混合液、PCR 反應(yīng)液及定量參考品A、B、C、D 和陰、陽(yáng)性對(duì)照平衡并恢復(fù)至室溫后混勻，3 000 r/min 瞬時(shí)離心10～15 s 后待用；根據(jù)待測(cè)樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及定量參考品A～D 數(shù)量，按比例取相應(yīng)量的反應(yīng)液、酶混合液及內(nèi)標(biāo)，充分混勻成PCR-mix，3 000 r/min 瞬時(shí)離心后備用；每個(gè)PCR 反應(yīng)管中加入核酸釋放劑5 μl，并依次加入待測(cè)樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及定量參考品A～D各5 μl 混勻，每管加入PCR-mix 40 μl，混勻后離心30 s，上機(jī)檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

分析乙肝兩對(duì)半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)的結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 乙肝兩對(duì)半檢測(cè)結(jié)果

HBcAb、HBeAg、HBsAg 均為陽(yáng)性，即大三陽(yáng)患者共有33例，構(gòu)成比為28.70%；HBcAb、HBeAb、HBsAg 均為陽(yáng)性，即小三陽(yáng)患者共有40例，構(gòu)成比為34.78%，見(jiàn)表1。

表1 乙肝兩對(duì)半檢測(cè)結(jié)果

2.2 乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)結(jié)果

所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)結(jié)果平均值為（3.27±0.42）×106IU/ml；大、小三陽(yáng)患者的乙型肝炎病毒DNA 定量測(cè)定值均高于其他類型患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)結(jié)果分析（IU/ml，±s）

表2 乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)結(jié)果分析（IU/ml，±s）

模式 例數(shù) DNA 定量檢測(cè)結(jié)果1 33 （3.58±0.23）×107 21 （1.33±0.12）×106 3 40 （1.41±0.15）×107 4 10 （1.46±0.18）×103 5 6（1.23±0.11）×104 2（1.79±0.48）×103 F 236.589 P＜0.001 6 5

3 討論

現(xiàn)階段，乙型肝炎病毒感染已經(jīng)發(fā)展成為一個(gè)全球公共衛(wèi)生問(wèn)題[8]。我國(guó)為慢性乙型肝炎大國(guó)，且近年來(lái)患者數(shù)量明顯增多，雖然疫苗的廣泛推廣使感染率有所降低，但該病依舊屬于需要被重視的嚴(yán)峻健康衛(wèi)生問(wèn)題[9]。流行病學(xué)研究顯示，我國(guó)約有3千萬(wàn)慢性乙型肝炎患者，并且隨著病情進(jìn)展，最終演變成為肝硬化的患者占15%[10]。臨床診斷肝炎時(shí)，通常會(huì)將血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高作為一個(gè)重要評(píng)價(jià)依據(jù)，但臨床實(shí)踐顯示，部分非肝炎的肝臟疾病患者也存在血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高的現(xiàn)象，故該項(xiàng)指標(biāo)水平升高在肝炎診斷中的應(yīng)用受到了一定限制。隨著免疫學(xué)、生物學(xué)技術(shù)水平的提高，臨床發(fā)現(xiàn)了越來(lái)越多新型肝炎病毒，這為慢性乙型肝炎的診斷創(chuàng)造了有利條件[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，115例慢性乙型肝炎患者中，大三陽(yáng)患者共有33例，構(gòu)成比為28.70%；小三陽(yáng)患者共有40例，構(gòu)成比為34.78%；所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)結(jié)果平均值為（3.27±0.42）106IU/ml；大、小三陽(yáng)患者的乙型肝炎病毒DNA 定量測(cè)定值高于其他類型患者（P＜0.05）。究其原因，乙肝兩對(duì)半為臨床測(cè)定血液內(nèi)乙型肝炎病毒的血清學(xué)標(biāo)志，大三陽(yáng)提示為急性或慢性乙型肝炎，具有較強(qiáng)傳染性；而小三陽(yáng)提示為傳染性相對(duì)較弱的急性或慢性乙型肝炎[13]。乙肝兩對(duì)半檢測(cè)不僅操作簡(jiǎn)單，且檢測(cè)結(jié)果能準(zhǔn)確反映機(jī)體的病毒免疫反應(yīng)狀態(tài)，可為疾病治療、預(yù)后評(píng)價(jià)提供重要參考依據(jù)。乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)是一種利用DNA 對(duì)乙型肝炎病毒進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，可用來(lái)判斷乙型肝炎病毒的復(fù)制情況[14]。通常情況下，臨床將乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)結(jié)果超過(guò)103判定為陽(yáng)性，將103～105判定為低量復(fù)制，將≥107判定為大量復(fù)制。乙肝兩對(duì)半難以對(duì)病毒復(fù)制情況進(jìn)行判斷，而乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)則能有效彌補(bǔ)該缺陷，故兩者聯(lián)合檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值更加明顯。

綜上所述，乙肝兩對(duì)半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA 定量檢測(cè)在慢性乙型肝炎診斷中具有一定臨床價(jià)值。