綿羊mtDNA變異與產羔數關聯分析

肖 帆,張利平*,吳建平,靳繼鵬,孫渭博,張筱艷

(1.甘肅農業大學動物科學技術學院，蘭州 730070；2.甘肅省農業科學院畜草與綠色農業研究所，蘭州 730070)

綿羊(ovisaries)的繁殖性能是其重要的經濟性狀之一，直接決定著養羊業的生產成本和經濟效益。提高綿羊每胎次的產羔數是提高生產效益的最直接方式，具有十分重要的意義。綿羊的產羔性狀在不同品種間存在明顯差異[1]，我國多數綿羊品種以產單羔為主，繁殖力較低，少數品種產多羔。例如，我國特有的小尾寒羊、湖羊等以產多羔為主，都屬于高繁殖力綿羊品種；而我國其它綿羊品種，如蒙古羊、藏羊等主要以單胎羊為主，產雙羔的比例較低，一般在5%以下[2]。相比于傳統育種方法，通過分子遺傳標記技術篩選出與綿羊產羔數相關的分子標記，就可在羔羊時期鑒定出具有高繁殖力的個體，從而實現綿羊繁殖性能的持續優化提升[3]。綿羊產羔數是一個復雜的數量性狀，遺傳力為0.03～0.10，受遺傳、表觀修飾和激素等的調控，綿羊產羔數性狀受主效基因控制的同時還受微效多基因的調控[4]。目前，已確定影響綿羊產羔數的主效基因有BMPR1B、BMP15、GDF9、B4GALNT2等[5-10]。但基于線粒體DNA(mitochondrion DNA，mtDNA)變異與表型性狀間的關聯分析報道較少。與核DNA遺傳不同的是，mtDNA結構比較簡單，呈共價、閉合的雙鏈環狀結構，從母體到后代通常不發生變化[11]。線粒體是能量代謝中心，通過氧化磷酸化系統產生三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)，因此它們在細胞內有自己的生命過程，其復制和轉錄獨立進行,不受細胞周期的限制[12]。

mtDNA在動物經濟性狀方面的研究較少。Tess等[13]研究發現，牛的產乳性能與線粒體核苷酸變異具有顯著關聯。在豬肥育性狀研究中發現存在mtDNA的遺傳學效應[14]。侯玲靈[15]研究了線粒體異質性在不同品種間和固始雞資源群體中的分布及其對重要經濟性狀的效應。Zhang等[16]采用PCR-SSCP和DNA測序方法檢測了6個中國牛種714個個體的mtDNAND5基因多態性，結果表明，ND5基因變異與早期生長性狀差異顯著。Biase等[17]研究表明，牛mtDNA的tRNA基因變異與個體質量顯著相關。Jeon等[18]研究得出，牛mtDNA的COI、COII、COIII 基因變異與重量性狀差異顯著相關。傅建軍等[19]研究得出，草魚D-loop序列變異對子代生長性狀具有顯著影響,推測可以利用mtDNA多態性信息進行輔助選擇。Aljubouri和Al-Shuhaib[20]通過研究伊朗3種多胎綿羊的D-loop區遺傳多樣性，發現它們在地理分布和表型性狀上存在明顯差異。Wei等[21]研究發現，雖然BMPR1B基因與中國一些綿羊品種或品系的高繁殖力相關，但它并不是影響中國綿羊繁殖力的唯一基因。Niu等[22]比較了藏羊與其他綿羊線粒體全基因組序列，藏羊mtDNA的拷貝數顯著低于薩福克羊，藏羊在12S rRNA的突變還未趨于穩定，確定了藏羊耐缺氧的分子標記。Reicher等[23]研究Afec-Assaf母羊D-loop區和細胞色素b(Cytb)后發現，HB和HC單倍型顯著影響母羊的產羔數性狀。陳曉勇等[24]在薩福克綿羊mtDNA編碼區中發現14個變異位點與產羔數顯著相關。

因此，本試驗采用PCR結合DNA測序技術對小尾寒羊、湖羊、蒙古羊、歐拉羊以及甘肅高山細毛羊的mtDNA多態性進行檢測，并結合產羔數進行關聯性分析，旨在探索mtDNA與綿羊產羔性狀的相關性，尋找影響綿羊繁殖性能的分子遺傳標記，為高繁殖力綿羊的選育提供理論依據和方法。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

選取健康、有產羔記錄的3～4歲小尾寒羊多羔母羊(multiple Small tailed han sheep，XM)63只、湖羊多羔母羊(multiple Hu sheep，HM)47只、蒙古羊雙羔母羊(twins Mongolian sheep，MT)42只、蒙古羊單羔母羊(singletons Mongolian sheep，MS)46只、歐拉羊雙羔母羊(twins Oula sheep，OT)52只、歐拉羊單羔母羊(singletons Oula sheep，OS)50只、甘肅高山細毛羊雙羔母羊(twins Gansu alpine fine wool sheep，GT)42只和甘肅高山細毛羊單羔母羊(singletons Gansu alpine fine wool sheep，GS)48只為試驗對象，取其頸靜脈血5 mL，用EDTA抗凝，迅速送回實驗室，-20 ℃冷凍保存備用。

1.2 提取血液基因組DNA

采用DNA提取試劑盒(天根生化科技有限公司)提取基因組DNA，并通過分光光度計與瓊脂糖凝膠電泳進行質量及濃度檢測。

1.3 PCR反應體系及反應程序

從GenBank(NCBI)中選取綿羊線粒體DNA序列(登錄號為AF 010406.1)，用Primer 5.0軟件設計引物，引物由金唯智有限公司合成，具體如表1所示。

表1 引物序列信息Table 1 Primers sequence information

PCR擴增反應體系為20 μL：Taq Mix 10 μL，RNase-free ddH2O 7 μL，上、下游引物各1 μL，DNA模板1 μL。引物P1的PCR反應程序：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環；72 ℃總延伸10 min。引物P2的PCR反應程序：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃總延伸10 min。引物P3的PCR反應程序：94 ℃預變性3 min；94 ℃變性30 s，66 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，72 ℃總延伸10 min,35個循環。將檢測合格的PCR產物送至生物公司(北京奧科鼎盛生物技術有限公司)進行DNA測序。

1.4 數據分析

測序結果通過DNAMAN軟件對其數據進行拼接，運用NCBI BLAST將試驗綿羊序列與綿羊線粒體DNA標準序列(GenBank AF 010406.1)比對分析，通過DNAsp和MEGA軟件對多態性進行統計分析。用SPSS 21.0軟件Duncan′s法進行多重比較顯著性檢驗，單因素方差分析(One-Way ANOVA)多態性與產羔數的相關性。

2 結 果

2.1 綿羊血液基因組DNA檢測

采用DNA提取試劑盒從采集的綿羊冷凍血中提取DNA，通過1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶清晰，無雜帶等現象，并且分光光度計檢測OD值為1.70～1.90，說明提取的DNA無降解，完整性好(圖1)。

M.DNA相對分子質量標準M.DL2000 DNA marker圖1 綿羊血樣基因組DNA的檢測結果Fig.1 Detection results of sheep blood genomic DNA

2.2 PCR擴增產物檢測

運用引物及其反應程序，以提取的DNA為模板進行PCR擴增。P1、P2、P3引物擴增結果見圖2A、2B、2C，PCR擴增產物大小(分別為321、736、1 421 bp)與預期相近，符合目的片段大小，且條帶清晰無雜帶，可進行下一步測序反應。

2.3 測序結果比對分析

運用NCBI BLAST將試驗綿羊序列與綿羊線粒體DNA標準序列(GenBank AF 010406.1)進行比對分析，結果顯示，同源性達99%以上，證明此序列為目的序列，且在所有個體中沒有檢測到雜合型變異位點。

2.4 綿羊變異位點分析

試驗綿羊群體共有309個變異位點，其中簡約信息位點212個。小尾寒羊194個變異位點，其中簡約信息位點128個；湖羊139個變異位點，其中簡約信息位點106個；蒙古羊198個變異位點，其中簡約信息位點133個；歐拉羊204個變異位點，其中簡約信息位點137個；甘肅高山細毛羊177個變異位點，其中簡約信息位點122個。從變異位點中篩選出16個與產羔數有關的變異位點并進行分析。變異位點的具體分布情況見表2。

表2 不同產羔類型綿羊變異位點統計Table 2 Statistics of variation sites of sheep with different lambing types

2.5 不同繁殖力綿羊的變異位點基因型分布差異分析

采用SPASS 21.0軟件檢測試驗綿羊A1099T、T1112C、C13576T、T13837C、T13855C、T15445C、T15627C、T15657C、T15668C、A15714G、T15732C、A15923G、T15956C、G15977A、A16101G和C16429T位點基因型分布差異，如表3～表9所示。T15445C、T15627C位點基因型分布一致。在A1099T位點，小尾寒羊多羔母羊(XM)與蒙古羊單羔母羊(MS)、歐拉羊雙羔母羊(OT)、歐拉羊單羔母羊(OS)、甘肅高山細毛羊雙羔母羊(GT)、甘肅高山細毛羊單羔母羊(GS)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)；湖羊多羔母羊(HM)也與蒙古羊單羔母羊(MS)、歐拉羊雙羔母羊(OT)、歐拉羊單羔母羊(OS)、甘肅高山細毛羊雙羔母羊(GT)、甘肅高山細毛羊單羔母羊(GS)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。在T1112C、C13576T、T13837C和T13855C位點，小尾寒羊多羔母羊(XM)與湖羊多羔母羊(HM)之間基因型分布均無顯著差異(P>0.05)，但小尾寒羊多羔母羊(XM)與其余試驗組綿羊群體之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)，同時湖羊多羔母羊(HM)與其余試驗組綿羊群體之間基因型分布也均有顯著性差異(P<0.05)。

表3 A1099T和T1112C位點基因型分布差異檢測結果Table 3 Results of genotype distribution difference at A1099T and T1112C sites

表4 C13576T、T13855C和T13837C位點基因型分布差異檢測結果Table 4 Results of genotype distribution difference at C13576T,T13855C and T13837C sites

從表5中可知，在T15445C、T15627C位點，歐拉羊雙羔母羊(OT)與蒙古羊單羔母羊(MS)之間基因型分布無顯著差異(P>0.05)，與其余試驗組的綿羊群體之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)；在T15657C位點，歐拉羊雙羔母羊(OT)與小尾寒羊多羔母羊(XM)、歐拉羊單羔母羊(OS)、湖羊多羔母羊(HM)、蒙古羊雙羔母羊(MT)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。

表5 T15445C、T15627C和T15657C位點基因型分布差異檢測結果Table 5 Results of genotype distribution difference at T15445C,T15627C and T15657C sites

從表6中可知，在T15668C位點，蒙古羊雙羔母羊(MT)與其余試驗組綿羊群體之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。在A15714G位點，蒙古羊雙羔母羊(MT)與小尾寒羊多羔母羊(XM)、湖羊多羔母羊(HM)、甘肅高山細毛羊雙羔母羊(GT)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。

表6 T15668C和A15714G位點基因型分布差異檢測結果Table 6 Results of genotype distribution difference at T15668C and A15714G sites

A.P1擴增產物檢測結果；B.P2擴增產物檢測結果；C.P3擴增產物檢測結果。M.DNA 相對分子質量標準A.The amplification products of P1;B.The amplification products of P2;C.The amplification products of P3.M.DL2000 DNA marker圖2 擴增產物檢測結果Fig.2 Detection results of amplification products

從表7中可知，在T15732C位點，歐拉羊單羔母羊(OS)與歐拉羊雙羔母羊(OT)、甘肅高山細毛羊單羔母羊(GS)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。在A15923G位點，甘肅高山細毛羊雙羔母羊(GT)與歐拉羊雙羔母羊(OT)、甘肅高山細毛羊單羔母羊(GS)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。

表7 T15732C和A15923G位點基因型分布差異檢測結果Table 7 Results of genotype distribution difference at T15732C and A15923G sites

從表8中可知，15956C位點小尾寒羊多羔母羊(XM)與湖羊多羔母羊(HM)之間基因型分布差異不顯著(P>0.05)，湖羊多羔母羊(HM)與蒙古羊雙羔母羊(MT)之間基因型分布差異不顯著(P>0.05)，但小尾寒羊多羔母羊(XM)和湖羊多羔母羊(HM)與其余試驗組綿羊群體之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)；蒙古羊雙羔母羊(MT)與歐拉羊雙羔母羊(OT)之間基因型分布有顯著性差異(P<0.05)。G15977A位點小尾寒羊多羔母羊(XM)與湖羊多羔母羊(HM)、歐拉羊雙羔母羊(OT)之間基因型分布有顯著性差異(P<0.05)，歐拉羊雙羔母羊(OT)和歐拉羊單羔母羊(OS)之間基因型分布有顯著性差異(P<0.05)。

表8 T15956C和G15977A位點基因型分布差異檢測結果Table 8 Results of genotype distribution difference at T15956C and G15977A sites

從表9中可知，在A16101G位點，歐拉羊雙羔母羊(OT)與小尾寒羊多羔母羊(XM)、湖羊多羔母羊(HM)、蒙古羊雙羔母羊(MT)、蒙古羊單羔母羊(MS)、歐拉羊單羔母羊(OS)、甘肅高山細毛羊雙羔母羊(GT)之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。在C16429T位點，歐拉羊雙羔母羊(OT)僅與蒙古羊單羔母羊(MS)之間基因型分布差異不顯著(P>0.05)，與其余試驗組綿羊群體之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。

表9 綿羊A16101G和C16429T位點基因型分布差異檢測結果Table 9 Results of genotype distribution difference at A16101G and C16429T sites

2.6 綿羊變異位點與產羔性狀的相關性分析

對試驗綿羊群體的變異位點與產羔性狀的關聯分析結果見表10，結果顯示，在T15445C和T15627C位點，歐拉羊產羔數C型(2.000只)均顯著高于T型(1.489只)(P<0.05)。T15657C位點，歐拉羊產羔數C型(1.800只)顯著高于T型(1.459只)(P<0.05)。T15668C位點，蒙古羊產羔數C型(2.000只)顯著高于T型(1.452只)(P<0.05)。T15732C位點，歐拉羊產羔數T型(1.530只)顯著高于C型(1.000只)(P<0.05)。A15923G位點，甘肅高山細毛羊產羔數G型(1.800只)顯著高于A型(1.425只)(P<0.05)。T15956C位點，歐拉羊產羔數T型(1.550只)顯著高于C型(1.230只)(P<0.05)。G15977A位點，歐拉羊產羔數A型(1.736只)顯著高于G型(1.457只)(P<0.05)。C16429T位點，歐拉羊產羔數T型(1.695只)顯著高于C型(1.455只)(P<0.05)。

表10 綿羊mtDNA變異位點與產羔性狀的相關性Table 10 Correlation between mtDNA variation sites and litter size in sheep

2.7 綿羊mtDNA單倍型與產羔性狀的相關性分析

試驗綿羊mtDNA有9個與產羔數顯著相關的突變位點(15445、15627、15657、15668、15732、15923、15956、15977、16429)形成28個單倍型，個體數大于試驗綿羊總數5%的單倍型有4種，其在群體中的具體分布如表11所示。

表11 顯著變異位點單倍型群體分布Table 11 Population distribution of haplotype at significant variation sites

表12顯示了mtDNA顯著突變位點形成的單倍型與產羔數的相關性分析結果，歐拉羊的TTCTTACGC(Hap_2)單倍型母羊產羔數(1.778只)顯著大于TTTTTACGC(Hap_1)單倍型和TTTTTATGC(Hap_4)單倍型母羊產羔數(1.386和1.167只)。但歐拉羊的TTCTTACGC(Hap_2)單倍型母羊產羔數與TTTTTACAT(Hap_3)單倍型母羊產羔數(1.625只)無顯著性差異。通過從整體上分析所有不同產羔類型試驗綿羊單倍型與產羔數的關系發現，TTTTTATGC(Hap_4)單倍型母羊產羔總數(2.254只)顯著大于其他單倍型。

表12 顯著變異位點單倍型與產羔數的相關性Table 12 Correlation between haplotypes at significant variation sites and litter size

3 討 論

綿羊繁殖力的高低取決于排卵的數量、卵子的受精能力、性成熟的時間、胎產羔數等。綿羊繁殖性狀中的胎產羔數性狀存在3種方式：一胎產一羔，也稱單胎性狀，是指母羊一生中每胎都只產1只羔羊，其母羊稱單胎母羊；一胎產雙羔，也稱雙胎性狀或雙羔性狀，是指母羊一生中有過一胎產2只羔羊的，其母羊稱雙羔羊或雙胎羊；一胎產多羔也稱多胎性狀或多胎性，是指母羊一生中有過一胎產3只或3只以上羔羊的，其母羊稱多胎羊。mtDNA的多態性與人類各種疾病及動物經濟性狀有關。研究發現，畜禽重要經濟性狀，如雞的增重與產蛋量，奶牛產奶量、乳脂量、乳脂率和蛋白含量，豬的增重，羊的增重與產毛量等性狀，都存在著核外基因效應。李楊等[25]采用DNA測序和PCR-RFLP方法，對瓢雞線粒體DNACOX3基因變異與生長、屠體性狀進行了關聯分析，結果表明，C10669T位點基因型間生長性狀差異顯著。Qin等[26]研究發現，荷斯坦奶牛產奶量與ATPASE8/6的單倍型顯著相關，因此ATPASE8/6的單倍型可能是影響荷斯坦奶牛產奶量的分子標記。線粒體DNA有拷貝數多、突變率高、母系遺傳且參與氧化磷酸化合成ATP等特點，且ATP是細胞最重要的能量來源，因此mtDNA直接影響ATP的合成，進而影響與體內能量代謝密切相關的重要經濟性狀[27]。由此可見，mtDNA的遺傳變異可用來分析畜禽重要經濟性狀核外基因效應，并進一步將其應用于標記輔助選擇來改良畜禽品種，提高動物生產效率。產羔數是綿羊生產中重要的經濟性狀。線粒體是卵母細胞內最多的細胞器，其mtDNA拷貝數變異及結構突變累積可導致細胞內ATP合成減少，從而影響卵母細胞質量、受精能力及胚胎的發育潛能[28]。由此可見，mtDNA突變使線粒體結構、功能發生改變，從而影響線粒體代謝和氧化呼吸功能，直接影響ATP含量，從而影響卵母細胞減數分裂和卵母細胞受精率[29]。牟天伊等[30]討論了卵母細胞mtDNA拷貝數與卵母細胞質量、胚胎發育的相關性，研究結果顯示，mtDNA突變可引起線粒體結構、功能的改變，同時也與卵母細胞受精有關。產羔數性狀在核基因上的研究非常豐富，但線粒體DNA變異與產羔數性狀的關系研究較少。因此，本試驗分析mtDNA編碼區及D-loop 區變異與產羔數的相關性具有重要意義。

mtDNA是細胞核外的遺傳物質，共價閉合的環狀雙鏈DNA具有結構簡單、分子拷貝數高、結構穩定、進化速度快、分子質量小、無組織特異性等特點[31]。Reicher等[23]在mtDNA編碼區序列發現的245個變異位點中，有26個是非同義突變，有8個序列在22個tRNA 中也出現了變異。本試驗采用PCR結合DNA直接測序技術對試驗綿羊多態性進行檢測，并結合產羔數進行關聯性分析，5個品種試驗綿羊群體共有309個變異位點，其中簡約信息位點212個；試驗綿羊群體在D-loop區共有264個變異位點，簡約信息位點194個。陳曉勇等[24]以杜泊、陶賽特、薩福克綿羊為研究對象，通過線粒體基因組測序發現，杜泊羊的mtDNA編碼區存在25個突變位點，陶賽特羊mtDNA編碼區存在20個突變位點，薩福克羊mtDNA編碼區存在77個突變位點。本試驗結果與陳曉勇等[24]的研究相比，mtDNA D-loop 區序列不編碼蛋白，因而該區域在進化上受選擇壓力較小，表現出更為豐富的多態性。

本試驗篩選出16個與產羔數有關的變異位點并進行分析。A1099T、T1112C、C13576T、T13837C和T13855C位點在XM與HM之間基因型分布均無顯著差異(P>0.05)，XM與MS、OT、OS、GT、GS之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)。陳曉勇等[24]分析了薩福克綿羊mtDNA的17個變異位點，結果顯示，16S rRNA區域的A1099T、T1112C、T1932G、C2443T以及多肽編碼區的A3949G、A8039G、A8515G、A8779G、C13576T、T13837C、C13855T位點對產羔數影響顯著(P<0.05)。根據不同繁殖力綿羊變異位點基因型分布差異分析推測，A1099T、T1112C、C13576T、T13855C和T13837C位點對于小尾寒羊和湖羊產羔性狀有一定的影響，T15668C位點影響蒙古羊產羔數，T15445C、T15627C、T15657C、T15732C、G15977A、A16101G和C16429T位點影響歐拉羊產羔數，A15923G位點影響甘肅高山細毛羊產羔數。

在mtDNA分子中分編碼區和非編碼區。非編碼區即線粒體基因組的D-loop區，存在高度突變并控制著mtDNA的復制與轉錄[31]。相比編碼區，D-loop區序列不編碼蛋白，是mtDNA的調控區域，但研究表明，它的突變與惡性腫瘤及動物經濟性狀有關。近幾年，在腫瘤mtDNA突變的研究中，日益發現D-loop區也是很重要的熱點突變區域，D-loop區的突變可能是使線粒體功能紊亂既而促進腫瘤發生的一個重要因素[32]。Tsai等[33]研究表明，豬的mtDNA變異數與卵母細胞質量有25%的相關性，發育正常卵母細胞的mtDNA拷貝數與16383位點變異水平正相關，該變異位點是mtDNA轉錄和復制的調控區域，mtDNA單倍型影響豬的繁殖能力，可以作為一個標記，以補充現有的選擇方法，識別高產豬。陳曉勇等[24]研究表明，杜泊羊mtDNA的13個 非同義突變對產羔數均無顯著影響，陶賽特綿羊mtDNA的9個非同義突變位點均與產羔數關聯不顯著，薩福克綿羊中發現的14個變異位點與產羔數顯著相關。本試驗通過對試驗綿羊群體變異位點與產羔性狀的關聯分析結果表明，T15668C變異位點對蒙古羊產羔數影響顯著(P<0.05)，T15445C、T15627C、T15657C、T15732C、T15956C、G15977A和C16429T變異位點對歐拉羊產羔數影響顯著(P<0.05)，A15923G變異位點對甘肅高山細毛羊產羔數影響顯著(P<0.05)。陳曉勇[34]研究表示，mtDNA遺傳變異對產羔數性狀影響顯著(P<0.05)。Reicher等[23]研究Afec-Assaf母羊D-loop區和細胞色素b(Cytb)顯示，mtDNA多態性影響母羊的產羔數性狀，HB和HC單倍型顯著影響母羊的產羔數性狀。本研究顯示，Hap_2單倍型影響歐拉羊母羊產羔數，但通過從整體上分析所有試驗綿羊單倍型與產羔數的關系發現，Hap_4型對綿羊產羔數有顯著影響，而Hap_2和Hap_4單倍型的不同之處在T15657C位點(第3個堿基C-T)和T15956C位點(第7個堿基C-T)。試驗綿羊群體在T15657C變異位點檢測到T→C突變，發生突變最多的是OT，最少的是OS；而T型個體數占比最高的是HM(93.62%)和XM(90.48%)，T型的OT個體數占比較低，為76.92%。在T15956C位點，各品種T型個體數占比從高到低依次是XM(52.38%)、HM(38.30%)、MT(23.81%)、OS(20.00%)、MS(15.22%)、GT(14.29%)、GS(12.50%)、OT(5.77%)；各品種C型個體數占比從高到低依次是OT(94.23%)、GS(87.50%)、GT(85.71%)、MS(84.78%)、OS(80.00%)、MT(76.19%)、HM(61.70%)、XM(47.62%)，本研究與Reicher等[23]的研究結果類似，都證實了mtDNA遺傳變異對綿羊產羔數性狀存在遺傳效應。

4 結 論

本試驗篩選出16個與產羔數有關的變異位點并進行分析。在A1099T、T1112C、C13576T、T13837C和T13855C位點，HM與XM基因型分布基本一致。T15668C變異位點，MT與MS之間基因型分布有顯著性差異(P<0.05)，也對蒙古羊產羔數影響顯著(P<0.05)。在T15445C、T15627C、T15657C、T15732C、G15977A和C16429T位點，OS與OT之間基因型分布有顯著性差異(P<0.05)，也對歐拉羊產羔數影響顯著(P<0.05)。在A15923G位點，GT與GS之間基因型分布均有顯著性差異(P<0.05)，對甘肅高山細毛羊產羔數影響顯著(P<0.05)。Hap_2型顯著影響歐拉羊母羊產羔數，Hap_4對綿羊產羔數也具有一定的影響。