SLCO1B1 521T>C和388A>G基因多態性對冠心病患者阿托伐他汀降脂療效的影響

白 穎，史旭波，王建旗，楊 毅，葛 興，張 弨（.首都醫科大學附屬北京同仁醫院藥學部，北京 00730；.首都醫科大學附屬北京同仁醫院心血管中心，北京 00730）

心血管疾病是全球范圍內造成死亡的首要原因，而低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的升高是心血管疾病的重要危險因素，降低LDL-C可顯著減少動脈粥樣硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）的發病及死亡風險[1]。他汀類藥物目前已被廣泛用于心血管疾病的一級和二級預防[2-5]。阿托伐他汀是目前臨床最常用的降脂藥物之一，臨床應用中發現其降脂療效存在顯著的個體差異，既往研究表明基因多態性在其中發揮重要作用[6]，可能改變編碼蛋白的結構或表達，從而對他汀類藥物的吸收、分布、代謝和排泄產生潛在影響。目前SLCO1B1基因多態性對于藥物療效的影響獲得了較多關注，然而研究結論尚不一致[7]，中國冠心病人群中該基因多態性對于阿托伐他汀降脂療效的影響相關研究較少，因此本研究探索SLCO1B1 521T>C和388A>G基因多態性對于中國冠心病患者阿托伐他汀降脂療效的影響，旨為降脂治療提供有益參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

納入2017年11月– 2018年8月就診于我院門診或住院的冠心病患者。納入標準：①經冠狀動脈造影或冠狀動脈血管CT造影檢查，診斷為冠心病的患者；②未服用過降脂藥物，或曾經服用過但停藥4周以上；③簽署知情同意書。排除標準：①肝功能異常；②中重度腎功能異常；③妊娠哺乳期婦女；④腦血管意外、嚴重創傷、惡性腫瘤；⑤甲狀腺功能減退；⑥死亡或中途退出的患者；⑦服用影響阿托伐他汀療效的其他藥物，如：環孢素、紅霉素、克拉霉素、伊曲康唑等。本研究經過北京同仁醫院倫理審查委員會審批（批號：TRECKY2018-018）。

1.2 治療方法

患者口服阿托伐他汀鈣片（商品名：立普妥，廠家：輝瑞制藥有限公司，規格：20 mg）20 mg，qn。同時收集患者年齡、性別、診斷、合并疾病、應用藥物等基本資料并記錄。

1.3 檢測指標

用藥前及規律服藥12周后，采集空腹靜脈血，檢測甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、肝功能以及肌酸激酶。EDTA抗凝管留存患者血樣，– 20 ℃存放待基因檢測。后采用Sanger測序方法檢測SLCO1B1 521T>C和388A>G基因型，進行分析。

用引物5軟件設計擴增該基因的引物。熱循環程序如下：96 ℃初始變性5 min，然后35個循環，96 ℃變性20 s，52 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，最后72 ℃延伸10 min（PTC-200 PCR，BIO-RAD，USA）。PCR產物經0.7%瓊脂糖凝膠電泳證實擴增，DNA用溴化乙錠顯色。c.100 C>T和鄰近區域進行測序，PCR產物通過添加4 μL ExoSAP?（USB?，美國）在37 ℃和75 ℃下分別添加1 h和15 min進行純化。之后，在10 μL的體積中進行PCR測序并執行2 μL的擴增。FIED PCR產物，1.75 μL Big Dye?終止劑v3.1 5×測序緩沖液（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA），0.32 μmoL引物（反向引物：5′-CCCTGCTACTTCTT-3′）和0.5 μL Big Dye?終止子v.3.1循環測序試劑盒（美國加利福尼亞州福斯特市應用生物系統公司）。循環條件為25個循環，在96 ℃下循環10 s，在50 ℃下循環5 s，在60 ℃下循環4 min。通過乙醇沉淀純化產物。使用Seqscape V.2.5?軟件（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）在ABI Prism?3130設備（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）上進行分析和測序，并與參考序列（NM U 000106）進行比較。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差表示。以χ2檢驗檢測基因型分布是否符合哈迪-溫伯格（Hardy-Weinberg）平衡。用藥前后血脂水平變化比較采用配對t檢驗。不同基因型之間血脂指標變化比較采用方差分析，P < 0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料

本研究共納入80例患者，其中男性53例，女性27例，年齡35 ～ 80歲，平均（59.49±10.53）歲，詳見表1。

表1 患者基線資料Tab 1 Baseline data of patients

2.2 等位基因頻率以及Hardy-Weinberg平衡檢測

檢測結果提示各位點基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（P > 0.05），表明本研究人群具有群體代表性，見表2。

表2 等位基因頻率以及Hardy-Weinberg平衡檢驗Tab 2 Allele frequency and Hardy-Weinberg equilibrium test

2.3 血脂情況

阿托伐他汀給藥后患者血清TG、TC、LDL-C水平均較用藥前顯著降低（P < 0.05），用藥前后HDL-C水平變化差異無統計學意義（P = 0.263），見表3。

表3 阿托伐他汀治療前后血脂變化情況Tab 3 Changes of blood lipid before and after atorvastatin treatment

2.4 SLCO1B1 521T>C對阿托伐他汀降脂療效的影響

研究結果提示，TT基因型與（TC + CC）基因型相比，患者血清TG、TC、LDL-C以及HDL-C的濃度變化率差異無統計學意義（P > 0.05），見表4。

表4 SLCO1B1 521T>C對阿托伐他汀降脂療效的影響Tab 4 Effect of SLCO1B1 521T>C on lipid-lowering efficacy of atorvastatin

2.5 SLCO1B1 388A>G對阿托伐他汀降脂療效的影響

研究結果提示GG基因型與（AA + AG）基因型相比，患者血清TG、TC、LDL-C以及HDL-C的濃度變化率差異無統計學意義（P > 0.05），見表5。

表5 SLCO1B1 388A>G對阿托伐他汀降脂療效的影響Tab 5 Effect of SLCO1B1 388A>G on lipid-lowering efficacy of atorvastatin

3 討論

目前國內外已報道了幾十個基因與阿托伐他汀的療效及安全性相關，如APOE、CYP3A4、CYP3A5、MDR-1、SLCO1B1、ABCB1等[6-7]。其中研究最多、爭議最大的是SLCO1B1基因。SLCO1B1基因位于12號染色體（12p12）短臂，全長108 kb。該基因編碼OATP1B1。OATP1B1特異性分布于肝細胞基底外側膜，介導基質從門靜脈系統向肝細胞的主動轉運。OATP1B1的功能變化影響肝臟中轉運藥物的攝取和清除[6]。阿托伐他汀已被證實經OATP肝臟攝取。OATP的表達和功能差異會導致阿托伐他汀代謝的個體差異。本研究主要探討SLCO1B1基因多態性對于阿托伐他汀降脂療效的影響。本研究結果顯示在中國冠心病患者中，SLCO1B1 521T>C和388A>G變異與阿托伐他汀降脂療效無關。

SLCO1B1基因頻率存在種族差異。本研究中SLCO1B1基因頻率（521C為11.25%，388G為76.87%）與既往研究結果一致[8]，而與其他種族間存在差異[9]，基因頻率的差異可能是造成目前研究結果差異的因素之一。

SLCO1B1 521T>C等位基因突變會導致OATP1B1轉運活性降低，導致肝臟攝取降低，進而使藥物血藥濃度增高[6]。Pasanen等[10]發現阿托伐他汀治療過程中，SLCO1B1 521CC基因型患者的藥-時曲線下面積比521TT基因型患者的大144%。而一項基于人群的隊列研究則發現接受辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀治療的SLCO1B1 521T>C變異患者的藥物療效降低，但對接受阿托伐他汀治療的患者無影響[11]。目前，也有學者探索了中國人群SLCO1B1基因多態性對于阿托伐他汀降脂療效的影響，但結論存在爭議[12-13]，需要注意的是上述研究所納入的人群均為高脂血癥患者，而冠心病較高脂血癥的情況更為復雜。本研究中冠心病合并高脂血癥患者僅占61.25%，一項巴西的研究結果顯示TC、LDL-C基線水平越高者，治療后血脂降低幅度越大[14]，提示阿托伐他汀對于不同基線血脂水平患者的調脂幅度存在差異。另外冠心病患者不可避免的要使用冠心病二級預防藥物如：抗血小板藥物、ACEI/ARB、β-受體阻滯劑等。既往研究表明ACEI和ARB是OATP1B1的底物，可能會影響阿托伐他汀的療效[15]。因此不適宜將既往對高脂血癥人群的研究結果推論至冠心病患者。

本研究為單中心研究，研究人群均為我院冠心病患者，不能代表全部中國人群，存在一定的局限性。研究人數偏少，研究結果可能存在誤差，還需要更大樣本量的研究來進一步證實。

綜上，本研究未發現SLCO1B1 521T>C和388 A>G基因多態性對中國冠心病患者阿托伐他汀降脂療效有影響，考慮該基因變異可能是影響阿托伐他汀療效的因素之一。藥物代謝的遺傳變異除轉運體外，還包括微粒體細胞色素P450酶、細胞膜受體、細胞內受體和離子通道成分的基因變異，均可能會對研究結果有不同程度的影響。目前SLCO1B1可能不能作為遺傳標記物來預測阿托伐他汀對于冠心病患者的降脂療效。未來需要多因素以及大樣本的研究來確定SLCO1B1基因多態性在降脂治療中的作用，為個體化藥物治療提供參考。