對比ELISA 反應性、灰區、陰性標本與核酸檢測結果的研究

王梅瑛

（青海省海西州中心血站 質管科，青海 海西 817099）

0 引言

為使血液傳播疾病的發生率有所降低，使窗口期病毒感染減少，縮短檢測時間十分必要，所以兩遍酶聯免疫吸附測定（ELISA）在實際HCV、HBV 及HIV 檢驗中較為普遍，為保證檢測準確性，通常聯合應用核酸檢測及ELISA 檢測[1-3]。ELISA指的是將具有可溶性的抗體或者抗原與聚苯乙烯等載體進行結合，并借助抗體抗原的特異性結合開展免疫反應的定量與定性的檢測方法。核酸檢測主要針對的是病毒內的核酸，此方法可用于查找患者糞便、血液、呼吸道標本中是否有外部入侵的病毒核酸存在，可以確定患者是否發生病毒感染，當檢測結果呈現陽性時，就說明患者身體中存在入侵病毒。因此本文對核酸檢測存在反應性及血清學陰性的標本進行了對比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2017 年1 月至2019 年12 月間100份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 灰區標本和反應性標本以及3000 份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 陰性標本。

1.2 方法

試劑與儀器：核酸檢測試劑及ELISA 檢測試劑廠家不同，前者來自于上海浩源；后者包含抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 試劑，分別來自于北京萬泰、廈門新創。另外還需來自上海浩源公司的全自動核酸檢測反應體系構建系統Pre-NAT 及奧斯邦公司的全自動酶免檢測系統，還有低溫離心機[4-5]。

檢測方法：實施血清學ELISA 檢驗時，需將S/CO 灰區設置為0.8～1，結果存在反應性的標準為數據大于等于1。若不合格，則反應性結果存在于雙試劑中；若反應性出現于單試劑，則還需通過雙孔復檢法應用雙試劑檢測，不合格的結果為兩孔存在反應性。核酸檢測：單人份標本進行HBV/HCV/HIV 核酸分項檢測模式，若出現反應性結果，則需予以復檢對比[6]。陰性結果的標準為首次檢測無反應；若反應性出現于首次檢測標本中，則還需對其實施復檢。

隨訪：若陰性結果出現于ELISA 檢測中，但核酸檢測結果無反應，則需跟蹤隨訪此類獻血者并定期予以復檢。

2 結果

2.1 分析核酸檢測結果

對比核酸檢測結果，實施單陽及雙陽試劑ELISA 檢測的100 份標本結果與其存在差異，僅HBsAg 檢測的灰區標本有一定檢出率，其他檢測無反應，見表1。

表1 100份ELlSA陽性和灰區實施核酸檢測的結果

2.2 酶免S/CO值在核酸鑒別檢測中的分析

ELISA 陰性標本3000 份檢出有反應性的4 份，HBV DNA 存在反應性的有1 份，陽性率為0.033%，陰性為1 份，無反應性存在于核酸檢測HCV RNA及HIV RNA 結果中。HBsAg 陰性及灰區分別為2份及1 份，見表2。

表2 酶免S/CO值在核酸鑒別檢測中的分析

3 討論

能夠由血液進行傳播的疾病比較多，很多疾病都能夠形成菌血癥或者病毒血癥，并通過血液的途徑進行傳播。血液傳播疾病可以通過骨髓或者器官移植、血制品、輸血等方式傳播，也可以通過能夠接觸血液的方式傳播，如吸毒、治療、注射、針灸、醫療檢查、手術器械等，而較為常見的血液傳播疾病如梅毒、病毒性肝炎（乙、丙、丁）、艾滋病等。由于血液傳播疾病的危害性較大，嚴重影響患者的健康，因此早期的篩查對于患者來說非常重要，盡早確定病癥并開展針對性救治，有效的改善患者的預后。

ELISA 原理如下：在固相載體的表面，結合抗體或抗原，并保證免疫活性；將某種酶和抗體或抗原連接，形成酶標抗體或者抗原，此種抗體或抗原既有免疫活性，還存在酶活性。檢測時，可將受檢標本與酶標抗體或抗原按照相應的步驟和固相載體上的抗體或抗原起反應。經過處理后，將酶反應底物加入，而底物會經過催化成為有色產物，由于標本中受檢物質的量和產物量密切相關，因此能按照顏色的深淺有無定量或定性的分析。因酶催化效率極高，因此反應效果較大，此方式敏感度很高。

任何生物都有核酸存在，核酸又包括了核糖核酸（RNA）與脫氧核糖核酸（DNA），病毒中一般只存在一種核酸，DNA 或者RNA，病毒屬于非細胞的生命形態，由蛋白質外殼與核酸長鏈組成，無代謝機構與酶系統，無法獨立完成自我繁殖，所有生活活動均須在宿主細胞中開展。當解析了病毒的基因組序列后，將其與其余物種基因組序列進行對比，就可發現其特異的核酸序列，此時可應用核酸檢測對患者進行檢查，若發現此特異的核酸序列，可證明患者已被此病毒感染。

在血液篩查系統中應用的全自動檢測系統型號為Pre-NARrocleix，該設備在檢測中應用的核酸試劑僅為單人份，使檢測準確性、特異性及敏感性均得到了顯著的提高，有效預防了血液傳播疾病的發生[7]。

經過本文研究可以看出，對抗-HIV、抗-HCV及HBsAg 實施檢測，灰區、單試劑及雙試劑的反應結果存在差異，這與其他學者研究結果類似[8]。同時，檢測中應用雙試劑的不合格率低于單試劑，對單試劑灰區及陽性的標本予以ELISA 復檢，所得陰性結果概率較大，這可能與假反應性結果存在于標本中有關[9-10]。另外，因為本次檢驗中HBV DNA 陽性檢出率的數據不高，所以無法判斷窗口感染期感染率是否會因灰區的設置而降低。對于ELISA 陰性且實施核酸檢測的標本，只有4 份存在反應，HBV DNA 陽性結果為1 份，比HBsAg 單人檢測的陰性率低，其他檢測數據也與部分研究結果存在差異，可能與標本數量小、標本收集地經濟情況以及標本污染有關。除此之外，實驗室常規HBV 灰區的值與ELISA 檢測的S/CO相比較高，所以必須核酸檢驗ELISA 陰性標本。

綜上所述，要鑒別區分HBsAg 灰區或陰性的患者是假陽性、隱匿性感染還是窗口期，需通過跟蹤隨訪予以判斷。