血清可溶性甘露糖受體在肝癌患者中的表達及其臨床意義

黃程榮，李太平，汪 靜，張 浩，謝 然，王 琴

原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球第六大常見癌癥，其發(fā)病率和病死率不斷上升，早期5年總生存率為50%～70%，晚期低于5%。目前甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)作為肝癌診斷的經(jīng)典血清學標志，在部分肝癌患者中呈陰性，易造成臨床漏診而使部分患者失去最佳的治療機會。因此，單一進行AFP檢測無法對肝癌的診斷及預后提供準確信息。

甘露糖受體(mannose receptor，MR)主要結(jié)合在M2型巨噬細胞膜上，在維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)、識別病原、抗原遞呈等過程中發(fā)揮重要作用。可溶性甘露糖受體(soluble mannose receptor，sMR)由內(nèi)源性細胞金屬蛋白酶對膜結(jié)合形式的MR水解切割釋放，在外周血清中表達。M2型巨噬細胞，是腫瘤微環(huán)境中最豐富的免疫抑制細胞，可通過分泌抑制性細胞因子下調(diào)免疫應答。有研究表明，血清sMR水平在多種惡性腫瘤中會升高，并與其不良預后及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關。目前關于sMR在肝癌中的表達水平及臨床意義鮮有報道，該研究推測血清sMR水平在肝癌患者中可能會升高，并與疾病的進展有關。

1 材料與方法

1.1 病例資料

選取2018年8月—2020年2月在安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院住院確診的肝癌患者129例，慢性乙型肝炎患者61例，健康體檢者25例作為研究對象。其中所有肝癌患者均符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019版)》標準，排除轉(zhuǎn)移性肝癌、接受過任何肝癌治療及合并其他惡性腫瘤疾病患者，慢性乙型肝炎患者診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》標準，健康體檢者經(jīng)檢測排除肝臟、腎臟、心血管等疾病。

1.2 儀器與試劑

采用貝克曼AU-5800全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)，血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)，血清總膽紅素(total bilirubin，TBIL)，血清白蛋白(albumin，ALB)。采用羅氏全自動電化學發(fā)光分析儀(瑞士羅氏公司)檢測血清AFP，定義血清AFP檢測低于20 ng/L為AFP陰性。血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)檢測采用雅培全自動化學發(fā)光分析儀(上海雅培貿(mào)易有限公司)。血清sMR檢測采用MR檢測試劑盒(ELISA)(美國GTX公司)定量測定，吸光度使用microplate reader(美國BioTek公司)測量。

1.3 方法

收集研究對象治療前空腹全血，并于室溫下4 000 r/min離心5 min制備血清，并于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｓ蒙治鰞x及配套的試劑盒采用NADH法定量檢測血清中ALT及AST、重氮試劑法定量檢測TBIL、溴甲酚綠法檢測ALB水平；使用羅氏全自動電化學發(fā)光分析儀及其配套試劑盒采用化學發(fā)光法定量檢測血清中AFP水平；雅培全自動化學發(fā)光分析儀及其配套試劑盒采用化學發(fā)光法定量檢測血清中HBsAg水平；sMR水平使用MR檢測試劑盒采用ELISA法定量測定，樣品及標準品在450 nm處用酶標儀測量其吸光度(OD)值，并制作標準曲線。

2 結(jié)果

2.1 病例資料

該研究共納入研究對象205例，其中初診肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者129例，慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者61例，健康對照(healthy control，HC)者25例。所有患者臨床特征及數(shù)據(jù)見表1。HCC患者AFP及sMR水平高于其他兩組，而ALB水平低于其他兩組，ALT及AST水平低于CHB組高于HC組。

表1 不同分組之間檢測指標分析結(jié)果

2.2 HCC患者不同分組sMR水平比較

血清sMR檢測結(jié)果顯示，HCC患者血清sMR水平高于CHB患者及HC，差異有統(tǒng)計學意義(

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<0.001)(圖1A)。根據(jù)巴塞羅那臨床肝癌(barcelona clinic liver cancer，BCLC)分期分類標準將HCC患者的疾病嚴重程度分為巴塞羅那A、B、C、D期(早、中、晚、終末期)，其中A期27例，B期39例，C期42例，D期21例。結(jié)果提示隨著疾病進展，肝癌患者體內(nèi)sMR水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)(圖1B)。

圖1 不同分組患者血清sMR水平比較

2.3 sMR及AFP與肝癌病理資料相關性

HCC患者血清中sMR水平在肝癌組腫瘤直徑>5 cm及多發(fā)結(jié)節(jié)組中均升高(

P

<0.05)(圖2A、B)。而肝癌患者血清中AFP水平與腫瘤大小及數(shù)目差異無顯著性(表2)。

表2 肝癌患者血清AFP與腫瘤臨床病理相關性

圖2 肝癌患者血清sMR水平與腫瘤病理資料相關性

2.4 血清sMR及AFP對肝癌患者的診斷效能

以不同研究對象作為對照組繪制ROC曲線評估sMR及AFP對HCC患者的診斷效能，結(jié)果見下圖3，以HC組或非肝癌患者為對照組sMR曲線下面積均高于AFP，且當AFP與sMR聯(lián)合檢測時，ROC曲線下面積均高于AFP及sMR。AFP與sMR+AFP相比

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值因病理資料不全，腫瘤大小分組中實際納入肝癌患者104例分別為4.858、5.085(

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<0.001)，說明AFP+sMR是HCC患者診斷的良好預測指標。以非肝癌組為對照組，AFP陰性HCC患者(49例)作為病例組，結(jié)果顯示sMR對于AFP陰性的HCC患者也有一定的補充診斷價值。

圖3 血清sMR與AFP檢測肝癌ROC曲線

2.5 血清sMR及AFP聯(lián)合檢測對早期肝癌的診斷價值

以非肝癌患者為對照組，巴塞羅那A期HCC患者為病例組，繪制ROC曲線見圖4，結(jié)果顯示sMR曲線下面積高于AFP，差異無統(tǒng)計學意義，當AFP與sMR聯(lián)合檢測時，AFP與sMR+AFP相比

Z

值為2.028(

P

<0.05)，sMR+AFP對早期HCC的診斷價值高于AFP。

圖4 血清sMR與AFP檢測巴塞羅那A期HCC患者ROC曲線

3 討論

HCC是全球最常見的癌癥之一，盡管近年來其治療水平不斷上升，但預后仍不理想，大多數(shù)肝癌患者診斷時處于晚期階段，治療的機會是有限的，主要是由于缺少有前途和可靠的生物標志物用于腫瘤的早期診斷。目前對于肝癌的篩查主要采取B超+AFP檢測，AFP作為HCC篩查的經(jīng)典血清學標記物，敏感性及特異性均不高，因此，單一的血清AFP水平作為HCC的篩查指標具有一定的局限性。

巨噬細胞在功能上分為兩種不同的亞型：M1和M2型。其中M2型巨噬細胞可通過促進血管生成、免疫抑制和腫瘤細胞的激活促進腫瘤的形成，并具有促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移、增殖和侵襲的作用，其細胞表面高表達CD206分子即MR。sMR由內(nèi)源性細胞金屬蛋白酶對膜結(jié)合形式的MR水解切割釋放。有研究表明，血清sMR水平在結(jié)直腸癌患者中高表達，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，胃癌患者術前血清sMR水平顯著升高，并與胃癌淋巴和遠處轉(zhuǎn)移及不良預后相關，并且血清sMR水平在27%的多發(fā)性骨髓瘤患者中會升高，治療后降低。而在肝臟中，血清sMR水平與CHB患者肝炎活性及肝活檢纖維化程度有關，并且可通過抗病毒藥物的治療而下降，另外在肝硬化患者中，血清sMR水平與疾病嚴重程度相關，其對于預測肝硬化相關并發(fā)癥的發(fā)生及預后有一定作用。該研究同樣表明，在CHB患者中，血清sMR水平顯著高于健康對照，這與先前的研究結(jié)果相似，而在HCC患者體內(nèi)，血清sMR水平顯著高于HC及CHB患者，隨著疾病進展，sMR水平逐漸升高，并且HCC患者血清中sMR水平與腫瘤的大小及數(shù)目相關，這些結(jié)果表明，血清sMR水平能很好地區(qū)分慢性肝病及HCC患者，并且對于疾病的嚴重程度及預后具有一定的預測價值。

該研究通過繪制ROC曲線來評估血清sMR及AFP對HCC的診斷效能，sMR曲線下面積及敏感性、特異性均高于AFP，表明sMR對于HCC的診斷效能優(yōu)于AFP，當兩項指標聯(lián)合檢測時，其曲線下面積高于單一指標，并且當以非肝癌患者作為對照，AFP陰性HCC患者作為病例組時，sMR對HCC患者的診斷的敏感性及特異性均較高，表明sMR對于AFP陰性的肝癌患者也有一定的補充診斷價值。研究表明 40%～50%的患者在早期HCC診斷中，處于可接受治療的階段，根據(jù)巴塞羅那臨床肝癌分期分類指南，對于早期HCC患者(BCLC-A)可采用根治性手術治療，建議中間階段患者(BCLC-B)采用肝動脈化療栓塞術實現(xiàn)局部控制和緩解，對于晚期(BCLC-C)患者預后多不良，預期中位生存期為6個月，而該結(jié)果顯示在巴塞羅那A期HCC患者中，當AFP+sMR聯(lián)合檢測時，其診斷的準確性顯著高于AFP，sMR+AFP聯(lián)合檢測對HCC的診斷效能優(yōu)于AFP單一檢測。