兒童噬血細胞綜合征患者中EB病毒感染的免疫功能狀態探討

于風嶺，肖 亞，郭景淑玉，王 娟（通訊作者）

（濟南市兒童醫院檢驗科 山東 濟南 250022）

噬血細胞綜合征（hemophagocyic histiocytosis,HLH）[1]，是一種危害患者生命安全的，侵襲性免疫過度活化綜合征。該病多見于兒童，起病急，臨床表現復雜多樣，病情進展迅速，治療難度大，病死率高。EB病毒（epstein-barr virus, EBV）[2]是一種十分多見的觸發性要素，主要免疫缺陷誘因包含惡性腫瘤以及艾滋病病毒（HIV）[3]感染。因免疫失衡和未受抑制的炎性反應同時存在，是HLH的最大特征，所以這類患者的免疫功能出現多種缺陷。針對于以上研究背景，本文將分析兒童HLH中EB病毒感染的免疫功能狀態。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年12月—2020年12月本院收治年齡在9個月～12歲的EBV感染患兒共計102例。（1）納入標準：①年齡＜14歲的HLH患兒；②滿足HPS修訂版依據，通過分子水平識別HLH基因突變；③確診為EB感染。（2）排除標準：①臨床數據不完整，②中途退出不配合參與者。將EBV-IM患兒56例設定為A組，EBV-HPS患兒46例設定為B組，同時選取70名健康體檢兒童設定為C組。A組中男36例、女20例；B組中，男28例、女18例；C組中，男40名、女30名。三組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 方法

所有兒童均應用乙二胺四乙酸抗凝管，收集靜脈血2 mL，標本收集后在1 d內經過流式細胞儀，測定淋巴細胞亞群和計數。將標本分成兩管對外周淋巴T/B細胞標記，每一管中加入100μL標本，分別加入到20μL的四色標記單克隆抗體中。其中第1管為用于測定總T細胞和亞群；第2管為用于測定B細胞和K細胞。同時所有兒童均應用促凝干燥管，采集靜脈血2 mL，放置凝固后，3 500轉/min，離心10 min，應用免疫濁度測定法測定EBV-DNA拷貝數。

1.3 觀察指標

對三組外周血淋巴細胞（peripheral blood lymphocyte,PBL）各項指標及免疫球蛋白測定結果進行對比分析。

1.4 統計學方法

所有數據均輸入SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，行方差分析，數據均為雙側檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2.結果

2.1 三組PBL各項指標分析

三組PBL各項指標分析中，A組（EBV-IM）、B組（EBV-HPS）和C組（空白）淋巴細胞計數、淋巴細胞各亞群計數以及比值對比中，組間差異顯著（P＜0.05）。A組和其余兩組對比，淋巴細胞計數、CD3+T淋巴細胞計數、CD8+T淋巴細胞計數上升，差異有統計學意義（P＜0.05）。B組和C組對比，淋巴細胞計數、B淋巴細胞計數、NK細胞計數下降，其余指標上升，差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 三組PBL各項指標分析（±s，×109/L）

組別 例數 淋巴細胞 CD3+T細胞 CD4+T細胞A組 56 9.78±0.22 8.20±0.02 1.28±0.18 B組 46 1.83±0.20 1.32±0.12 0.38±0.12 C組 70 3.60±0.07 2.32±1.02 1.23±0.20 F 43.73 38.82 23.94 P 0.0001 0.0001 0.0001

2.2 三組免疫球蛋白測定結果分析

A組、B組和C組IgG、IgM、IgA水平對比，組間差異顯著（P＜0.05），其中A組IgG、IgM、IgA相比于B組和C組上升，差異有統計學意義（P＜0.05）；B組和C組上述指標對比，差異不顯著（P＞0.05），見表2。

表2 三組免疫球蛋白測定結果（±s, g/L）

表2 三組免疫球蛋白測定結果（±s, g/L）

組別 例數 IgG IgM IgA A組 56 11.93±4.04 1.50±0.02 1.60±0.05 B組 46 8.70±3.56 0.60±0.10 0.60±0.05 C組 70 7.25±1.72 0.90±0.06 0.70±0.07 F 8.12 26.60 25.98 P 0.0001 0.0001 0.0001

3.討論

臨床中EB病毒是一種較為易感的雙鏈DNA皰疹病毒，一般通過飛沫傳播。EB感染對淋巴細胞有所影響，尤其是B淋巴細胞。多項數據佐證，EB能夠對B細胞生長進行改變，主要機制為：一旦感染了某一個B淋巴細胞后，EB基因組織將轉入到細胞核。此基因組主要通過游離基因的形式存在[4]。通過當前數據證實，B細胞來源的淋巴瘤，是最為多見的EB感染惡性腫瘤，最常見為霍奇金淋巴瘤（HL）[5]。HL的病理生理學極為復雜，但是根本是B譜系細胞出現惡性克隆賦值，且多數患者的腫瘤細胞中出現EB[6]。EB所影響的淋巴瘤往往以較為單一的方法融合到EB的末端，說明全部細胞是通過單一被感染的細胞所克隆擴增。一旦被撤去，則可能造成EB激活的免疫抑制劑或者應用抗病毒后，發生器官移植后/甲氨蝶呤治療階段的淋巴瘤，暫時性消退[7]。

在本次結果中，A組、B組和C組淋巴細胞計數、淋巴細胞各亞群計數以及比值對比差異顯著（P＜0.05）。A組和其余兩組對比，淋巴細胞計數、CD3+T淋巴細胞計數、CD8+T淋巴細胞計數上升，差異顯著（P＜0.05）。B組和C組對比，淋巴細胞計數、B淋巴細胞計數、NK細胞計數下降，其余指標上升，差異顯著（P＜0.05）。說明CD3+T淋巴細胞在RBV-IM患兒中具有高度的活化和增殖特征，有助于體內病毒的清除，從而聯合B組的CD4+T細胞計數、B細胞計數和NK細胞一同下降，也說明EBVHPS患兒對EBV的免疫障礙，無法對其控制同時病毒清除。當前，臨床已經證實的免疫學機理，主要是免疫復合物、血小板自身抗體形成，采用分子模擬機制以及血小板表面糖蛋白，出現交叉反應，或者補體激活系統造成血小板以及巨核細胞破壞度增強，其具體機制如下。（1）免疫復合物形成：一旦病毒感染了血清，則血清中多數的免疫球蛋白M（IgM）將增加，病毒抗原和抗體聯合形成免疫復合物，沉積到血小板以及巨核細胞表面中。（2）血小板自身抗體形成：EB是一種較強的多克隆激活劑，能夠對感染或者轉染的B細胞激活，一旦病毒感染后，就會對B細胞刺激，從而和正常組織交叉，生成自身抗體。抗血小板抗體以及PAIgG上升，PAIgG直接聯合在血小板GPⅡb，造成血小板受損。（3）通過分子模擬以及血小板表面糖蛋白出現交叉反應，病毒對血小板的膜糖蛋白結構進行調整，從而血小板抗原性產生變化，機體免疫清除。

綜上所述，EB病毒感染免疫功能測定有利于HLH和單核細胞增多癥疾病的臨床診斷。