肛拭子標本實時熒光聚合酶鏈反應法在從業人員健康體檢腸道沙門氏菌快速檢測中的應用價值

河南省洛陽市疾病預防控制中心（471000）趙衛 劉萌萌

沙門氏菌為乙類傳染病，菌型多達2500種，具有易繁殖、易傳播等特點，為相關食物中毒病原菌，患者多出現惡心、頭痛、腹痛、發熱等綜合癥狀，嚴重者會出現敗血癥，對患者健康及生活質量構成影響[1]。相關研究指出，及時有效治療及預防病情擴散的關鍵在于早期沙門氏菌檢測[2]。分離培養是既往臨床常用檢測方法，屬于沙門氏菌檢測金標準，但該方法程序復雜、耗時較長。實時熒光聚合酶鏈反應法（Real-time Fluorescence Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）具有快速、簡便等特點，近年來在沙門氏菌臨床檢測中得到極大重視。本研究選取我院從業人員健康體檢者428例，旨在分析肛拭子標本RT-PCR檢測腸道沙門氏菌的應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2018年11月我院從業人員健康體檢者428例，男235例，女193例，年齡23～41歲，平均年齡（32.57±4.19）歲，體質量指數20～25kg/m2，平均體質量指數（22.36±0.71）kg/m2。

1.2 方法 均采集肛拭子標本，使用一次性棉拭子，插入肛門內（約3cm），輕旋3周，取出并放入增菌液內，增菌液環境溫度37℃。

1.2.1 RT-PCR檢測 在增菌液培養3～12h后，混合均勻，使用1.5ml離心管，使用移液器置入50μl增菌液，離心（10000r/min，5min）處理，取出300μl上清液，再次混合均勻，提取核酸。制備擴增模板，加入核酸檢測試劑，置20μl反應液、聚合酶，依據試劑盒說明書提供反應條件實施擴增，95℃條件下3min預變性，擴增1個循環；95℃條件下5s、55℃條件下60sPCR，擴增40個循環；50℃條件下2minUNG處理，擴增1個循環。擴增結果顯示陽性標本行2次擴增，擴增過程中采集熒光信號，通過擴增結果排除陰性標本，可疑陽性標本行生化鑒定，依照鑒定結果行血清分型。

1.2.2 分離培養 在增菌液培養18～24h后，混合均勻，使用接種環，選擇可疑菌種TSI平板分離（24h），使用BD Phoenix-100全自動細菌鑒定儀，生化鑒定沙門氏菌，并對相關菌株行血清凝集試驗。

1.3 觀察指標 以分離培養鑒定結果作為“金標準”，觀察RT-PCR檢測靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值。

1.4 統計學分析 采用SPSS22.0分析數據，計數資料以n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果 本組428例從業人員健康體檢者經肛拭子標本分離培養結果證實患有腸道沙門氏菌16例，無腸道沙門氏菌412例，采用RT-PCR檢測出腸道沙門氏菌20例，非腸道沙門氏菌408例。見附表。

附表 診斷四格表（n=428）

2.2 診斷效能 RT-PCR檢測靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽性預測值75.00%（15/20）、陰性預測值99.75%（407/408）。

3 討論

沙門氏菌傳染性較高，攜菌從業人員易對食物或環境構成污染，相關法律對從業人員沙門氏菌檢測作出明確規定[3]。分離培養在沙門氏菌檢測中屬于標準方法，在臨床既往檢測中得到廣泛應用，檢測準確度較高，但檢測多需4～6d，檢測周期較長，無法實現早期治療和預防，易導致病情聚集發展[4]。RT-PCR檢測以便捷、快速等優勢在臨床沙門氏菌檢測中引起關注。本研究選取RT-PCR檢測，研究結果顯示，RT-PCR檢測靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽性預測值75.00%（15/20）、陰性預測值99.75%（407/408）。提示PT-PCR檢測靈敏度、特異度、陰性預測值較高，且誤診率、漏診率較低，分析原因在于檢測程序自動化，降低技術人員技能水平影響，同時避免選擇性增菌遺漏陽性菌落，進而提升檢測準確度、降低漏診率。PT-PCR檢測通過提取核酸實施擴增，可有效排除陰性標本，確定可疑陽性標本，無需長時間分離培養，擴增結果顯示可疑陽性標本直接送檢，行生化鑒定、血清分型，以確定陽性標本，可縮短前期篩查、生化培養時間，進而縮短檢測周期，對早期治療和預防具有積極意義。

綜上所述，RT-PCR應用于從業人員健康體檢中，可有效檢測出腸道沙門氏菌，靈敏度、準確度較高，可有效縮短檢測周期，對患者早期治療及預防腸道沙門氏菌聚集性發展具有積極意義。