飼料蛋白水平對鱸鯉幼魚生長性能及部分血液指標的影響

龍治海，李 華，段元亮，張 露，涂全宇，劉光迅

(四川省農業科學院水產研究所，成都 郫都 611731)

鱸鯉[PercoyprisPingi(Tchang)]俗稱花魚，隸屬于鯉科(Cyprinidae)，鲃亞科(Barbinae)，鱸鯉屬(Percoyprischu)。主要分布于長江上游岷江、青衣江、金沙江以及烏江、赤水河等流域[1-2]。其肌肉富含必需氨基酸和鮮味氨基酸，營養價值高于多數經濟魚類，是一種優質食用珍貴魚類。由于過度捕撈，鱸鯉自然資源受到嚴重破壞，目前已列為四川省、重慶市的重點保護瀕危魚類之一。

飼料蛋白水平是決定魚類生長和飼料成本的關鍵因素。飼料蛋白水平過低會限制魚類生長,輕則生長緩慢，重則可能出現生長停滯、體重下降、抗病力減弱，無法保證養殖魚類在一定的時間內達到上市規格, 降低水產養殖的經濟效益。但過高并不能進一步提高魚類的生長性能,反而會增加魚體的氮代謝負荷，部分蛋白質可能會作為能源被消耗掉，作為能源消耗的蛋白質會導致水體中氨氮排放量增多而污染水質，而目前蛋白質原料價格居高不下，這就大大提高了飼料的成本。有關魚類蛋白質需求相關研究資料顯示，魚用配合飼料的蛋白水平一般在25%～55%[3]，如羅非魚幼魚為28%～32%，巖原鯉幼魚為38%～40%，鯉魚幼魚為43%～47%，草魚泥鰍幼魚為45.5%[4-7]。

目前，市場對鱸鯉需求居高不下，鱸鯉人工養殖逐步興起，但尚未見鱸鯉營養需要的有關研究報道，仍缺乏鱸鯉養殖專用人工配合飼料。本試驗以鱸鯉為研究對象，飼喂不同蛋白水平飼料，研究其對鱸鯉生長性能和血液指標的影響，以期為鱸鯉營養學研究積累基礎資料，為開發鱸鯉人工配合飼料提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料與試驗設計

試驗飼料以白魚粉和豆粕為主要蛋白源, 魚油和大豆油為主要脂肪源設5組不同蛋白水平的等脂等能實驗飼料，以酪蛋白和明膠(4∶1)為蛋白質源配制蛋白質水平分別為17.9%、37．41%、40．10%、44．34%、49.20%的5種純化試驗飼料，原料由四川省農科院水產研究所提供。飼料蛋白質水平檢測單位為國家糧食局成都糧油食品飼料質量監督檢驗測試中心。試驗飼料組成及營養水平如表1。

1.2 試驗魚種及飼養管理

生長試驗在四川省雅安市漢源湖養殖場進行。試驗用鱸鯉幼魚購自四川省雅安市蘆山縣某養殖場，選擇600尾體質健康、平均體重(15.2±1.1)g的鱸鯉幼魚，分為5組，每組3個重復，每個重復40尾，分別飼喂蛋白質水平為17.9%(Ⅰ組)、37．41%(Ⅱ組)、40．10%(Ⅲ組)、44．34%(Ⅳ組)、49.20%(Ⅴ組)的試驗飼料，試驗開始前將暫養魚集中禁食24h。試驗魚采用網箱養殖，試驗期間每天9:00和18:00分兩時段投喂飼料,根據魚的進食和生長情況，0～20d每天投食量為總體重的2%～5%；20～40d為4%～7%；40～60d為6%～9%；60～80d為6%～9%，采用循環投喂模式，每次投喂量以試驗魚30min內能吃完為宜。實驗結束后,稱一定量的飼料放入無魚的實驗缸中,10min后回收于70℃烘干后稱重,計算飼料的溶失率以校正實際攝食量。實驗期間水溫變動范圍是25～28℃,pH值為8.2～9.0,氨氮≤0.5mg/L,余氯≤0.05mg/L,光照周期為12L∶12D。試驗期為80d。

表1 試驗飼料組成及營養水平

1.3 指標測定

1.3.1 生長性能指標測定 在試驗第1d、第20d、40d、60d和80d分別從各組中隨機抽取6尾進行稱重，用于計算以下相關指標測定。

特定生長率(SGR，%)=(lnWtd-lnW0)/t×100；

增重率(WGR，%)=(Wt-W0)/W0×100；

存活率(SR，%)=Nt/N0×100；

飼料系數(FCR，%)=Id/WWG×100；

蛋白質利用率(PER，%)=WWG/Ip×100；

W0為初始體重，Wtd為第t天的體重,t為飼養天數(d),Nt為第t天后各組魚總數(尾),N0為初始各組魚總數(尾)，WWG為濕重增加(wet weight gain)，Id和Ip分別為飼料和蛋白的攝入量(以干重計)。

1.3.2 鱸鯉血液生化指標的測定 試驗期(80d)結束后，從各處理組中取6尾魚(每個重復隨機取2尾)，采用尾部靜脈血管取血法取血。將所得樣品分為2份，一份所得血樣不加任何抗凝劑，在室溫下傾斜30°讓其自然凝固，再用高速冷凍離心機在4℃、4000r/min條件下離心10min，最后分離上清液(血清)裝入潔凈試管中，測定超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和血清總蛋白Pr含量，上述指標測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所,測定步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。另一分血樣添加抗凝劑EDTA，抗凝血樣用CA620-VET1型全自動血細胞分析儀(MEDONIC，瑞典)進行紅細胞數(RBC)、白細胞數(WBC)、血紅蛋白數(HGB)測定。

1.4 數據統計與分析

試驗數據采用平均值±標準誤表示，采用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 飼料蛋白水平對鱸鯉幼魚生長性能的影響

飼料蛋白水平對鱸鯉幼魚生長性能的影響見表2。表2顯示：經過80d飼養后，Ⅲ組增重率(WGR)最大達164.9%，顯著高于其余各組(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組明顯高于Ⅴ組(P<0.05)，Ⅴ組明顯高于I組(P<0.05)，I組最小，為106.2%，總的趨勢有隨著蛋白質水平增加先上升后下降的趨勢；對比各組蛋白質利用率(PER)發現，各組PER表現出和WGR一樣特點，Ⅲ組最高，I組最小，Ⅲ組>Ⅱ和Ⅳ組>Ⅴ組>I組，差異顯著(P<0.05)；而日糧系數(FCR)，Ⅲ組<Ⅳ組<Ⅱ組<Ⅴ組

2.2 飼料蛋白質水平對鱸鯉部分血液指標的影響

飼料蛋白質水平對鱸鯉幼魚血液指標影響見表3。表3顯示：經過80d飼養過后，血液WBC、HGB、RBC均以Ⅲ組最高，顯著高于其余各組(P< 0.05)；而以Ⅰ組最低，顯著低于其余各組(P< 0.05)；3個指標變化均有隨著蛋白質水平增加先上升后下降趨勢；RBC數變化為，Ⅲ組>Ⅱ和Ⅳ組>Ⅴ組>I組；WBC數變化為Ⅲ組>Ⅳ組>Ⅱ和Ⅴ組>I組；HGB含量變化為，Ⅲ組>Ⅳ和Ⅴ組>Ⅱ組>I組。對比各組血清中酶活性可以發現，SOD、CAT、GSH-P x、AKP、ACP的活力表現出大致相同的變化趨勢，即隨飼料蛋白水平的提高先上升后下降，5種酶均以Ⅲ組的酶活力最高，顯著高于其余各組(P< 0.05)，而MDA含量則表現出先下降后上升的相反趨勢，Ⅲ組MDA含量最低，Ⅰ組>Ⅱ組和Ⅴ組>Ⅳ和Ⅲ組。

表2 不同蛋白質水平飼料對鱸鯉生長性能的影響

表3 不同蛋白質水平飼料對鱸鯉部分血液指標的影響

3 討論

飼料中適宜的蛋白質水平可以促進魚類生長和提高飼料利用率。相關研究表明，飼料中適宜的蛋白質水平能夠促進生長和飼料利用，缺乏和過量均不利于生長。這是因為，飼料中蛋白質供給不足時，飼料蛋白質中用以滿足機體組織基礎代謝的比例增大，而用于生長的比例相對減少，魚體增重較慢，甚至會導致體重負增長[7]。而飼料中蛋白質過量時，過多的氨基酸則會加重肝功能負擔，加大機體的氮代謝負荷，機體攝取多于的氨基酸用于產熱和其它功能，而不是蛋白質沉積，造成了大量氨基酸的浪費，增加飼料成本，且不利于魚類增重增產。本試驗設計的5個飼料蛋白質水平中，40．10%組鱸鯉幼魚的生長性能指標(WGR、PER、FCR)均達到最佳。已有魚類的蛋白質需求研究結果，羅非魚幼魚為28%～32%，黃顙魚幼魚(10g)約為44%～45%[8]，美洲鰻鱺幼魚(8g)為47%[9], 長吻魚種(12g)為46.9%～49.5%[10], 烏鱧幼魚(0.5g)為55%[11]，巖原鯉幼魚為40%，鯉魚幼魚為43%～47%，草魚幼魚41%～43%，青魚幼魚41%，黃顙魚幼魚為44%～45%，泥鰍幼魚為45.5%[4-7]，各魚類對蛋白質需求大小有所差異，這可能與魚類品種、規格、養殖環境(水溫、pH、溶氧)、飼料營養來源和投喂水平等有關。本試驗表明鱸鯉幼魚對蛋白質需求量與巖原鯉幼魚接近，可能因為兩種魚類物種親緣性較近，生活環境類似。

體內清除自由基的酶系統主要由SOD、GSH-Px和CAT3種酶組成，這幾種酶可以單獨作用，也可以起到協同增效的作用，對抗機體有氧代謝產生的活性氧引起的氧化應激(oxygenstress)。MDA是脂質過氧化物水解產物，其含量反映機體中過氧化自由基的存在及其反應程度。AKP主要存在于骨，肝臟和腸道等許多組織中，當骨細胞代謝活躍時可見血清堿性磷酸酶活性升高，故AKP傳統的被用作骨更新指標[13]。ACP被認為是高等動物體內巨噬細胞溶酶體的標志酶[14-15]，在魚類等低等脊椎動物中也起著防御和消化的雙重功能，ACP廣泛分布于動物組織溶酶體中，機體ACP活性可以作為體液免疫指標來間接反映機體免疫系統中吞噬細胞清除異物的能力。對比各種血液生化指標，可以看出蛋白質水平為40.10%時，鱸鯉幼魚血液RBC、WBC和HGB為5組中最高，反映此組魚苗處于較好的營養水平和健康狀況；SOD、CAT、GSH-Px、AKP、ACP、等酶活力也是最高，同時反映此組鱸鯉幼魚具有較好的抗氧化能力和較強的非特異性免疫功能。通過本試驗結果和上述分析，飼料蛋白質水平為40.10%，可明顯改善鱸鯉魚苗生長性能和非特異性免疫功能。