反向高效液相色譜法測定復(fù)方木香小檗堿片中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量

李洪剛，陳健，向鵬宇

（重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶 408000）

0 引言

復(fù)方木香小檗堿片是由鹽酸小檗堿、木香和吳茱萸3味中藥制成的，用于治療腸道感染、腹瀉。作為方中主藥的木香未作定量要求，不能有效的控制該制劑的質(zhì)量。通過實驗，建立該制劑的含量測定方法[1-2]。 該方法精密度好，結(jié)果準確，可用于于復(fù)方木香小檗堿片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫1260），Sartorius-ME235S電子天平；木香烴內(nèi)酯（對照品由中檢院提供，批號111524-201911，含量99.9%），去氫木香內(nèi)酯（對照品由中檢院提供，批號111525-201912，含量99.8%）；復(fù)方木香小檗堿片（樣品由遠大醫(yī)藥公司提供，批號分別為2020801，2020901，2020904）。甲醇為進口HPLC級別，水為屈臣氏蒸餾水，其余試劑為優(yōu)級純級別。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件。Thermo-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）作為色譜柱；以水-甲醇（25:75）作為流動相；流動相為1.0 mL/min；選取225 nm作為檢測波長；柱溫設(shè)置為35℃，進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 精密稱取對照品適量，加甲醇制成每1 mL含木香烴內(nèi)酯對照品和去氫木香內(nèi)酯對照品20 ng的溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 取本品20片，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，超聲處理（功率300 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液[3]。

2.2.3 按復(fù)方木香小檗堿片劑制備工藝，取除木香外的其余藥味，按照工藝要求制成不含木香的復(fù)方木香小檗堿片，按照2.2.2項下的操作方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察。專屬性考察，取2.2項下3種溶液，依照2.1色譜條件進行測定。結(jié)果供試品溶液與對照品溶液在相同時間內(nèi)有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照品溶液在此處未出現(xiàn)色譜峰，表明該方法專屬性良好，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.1 線性關(guān)系考察：取2.2項下的母液對照品溶液，分別精密量取1，5，10，15，20 mL，分別定容于100量瓶中，按2.1項下色譜條件測定，進行線性回歸，得回歸方程為：木香烴內(nèi)酯對照品Y=14561X+1.4558，r=0.9992；質(zhì)量濃度在10.13~200.26μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。去氫木香內(nèi)酯對照品Y=18911X+43.213，r=0.9991，進樣量在10.36~200.72μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度考察：取混合對照品溶液，連續(xù)測定6次，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.24%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.36%（n=6）。

2.3.3 重復(fù)性考察：取同一批號樣品（批號為20200904）6份，按2.2.2項下要求進行制樣，分別測定，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.32%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.26%（n=6）[4]。

2.3.4 穩(wěn)定性考察：取同一批號樣品（批號為20200904）溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣10μL，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.36%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.37%（n=6）。

2.3.5 加樣回收試驗：精密稱取樣品（批號20200904）6份，精密加入2.2.1的對照品適量，按2.2.2項下要求制樣并依法測定，回收率結(jié)果見表1。

表1 加樣回收實驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品測定。取3批復(fù)方木香小檗堿片樣品，按2.1項下色譜條件測定，進樣量10μL，記錄峰面積，計算各供試品中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，結(jié)果分別為：1.0088和0.4285 mg/g；1.1214和0.4322 mg/g；1.0127和0.4312 mg/g。

3 討論

木香烴內(nèi)酯對照品和去氫木香內(nèi)酯對照品易溶于甲醇、乙醇等有機溶劑，因此在提取分離條件的摸索過程中，比較了不同超聲時間對成分提取率的影響，分別選取了了超聲 15、30、45、60 min后進行含量考察，通過考察，在超聲30 min后，指標成分就能充分提取[5-6]。