黃芪多糖聯合新輔助化療與新輔助化療對結直腸癌患者血清外泌體表達水平影響的對比研究

趙媛媛 張楠 孫維義 郅強 楊世發

1)河南中醫藥大學 鄭州 450003 2)河南中醫藥大學第一附屬醫院微創腔鏡外科 鄭州 450046

近年來，我國結直腸癌的發病率和病死率均呈上升趨勢[1]。手術、化療、中醫藥等多學科綜合治療可提高臨床效果。黃芪多糖是豆科植物黃芪的主要活性成分，可通過多種機制誘導腫瘤細胞凋亡、增加免疫功能調節，具有廣譜抗腫瘤及增加患者免疫功能等作用[2-3]。外泌體在結直腸癌患者循環血清和HCT-116、SW480等腫瘤細胞株中表達水平均顯著增高[4-7]。外泌體標志性蛋白(CD63、TGF-β1)在外泌體蛋白表達譜中高表達[8]，聯合CEA等腫瘤標記物檢測能為結直腸癌的診斷、預后評估提供有價值的參考?；诖耍覀冮_展了本項小樣本前瞻性研究，以初步探討黃芪多糖聯合新輔助化療與新輔助化療對結直腸癌患者血清腫瘤標記物水平和外泌體表達水平的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料本研究為小樣本前瞻性預實驗研究。經我院倫理委員會審批，納入2019-01—2020-01于我院微創腔鏡外科收治的結直腸癌患者。納入標準：(1)均經結腸鏡病理學檢查確診為結直腸癌。(2)符合腹腔鏡結直腸癌根治術及新輔助化療的指征[9]。排除標準：(1)臨床資料不全和存在嚴重心、腦、肺系統疾病者。(2)黃芪多糖過敏、有其他腫瘤手術史，以及嚴重精神疾病患者。(3)患者均簽署知情同意書。根據新輔助化療方法分為黃芪多糖聯合新輔助化療組(觀察組)和單純新輔助化療組(對照組)。

1.2治療方法新輔助化療(FOLFOX6方案)：第1天靜脈滴注奧沙利鉑85 mg/m2，持續2 h。第1～5天靜脈滴注亞葉酸鈣200 mg/m2，至少持續2 h；靜脈滴注5-氟尿嘧啶400 mg/m2，至少持續6 h。黃芪多糖(批號：Z20040086，天津賽諾制藥有限公司)：黃芪多糖250 mg加入0.9%氯化鈉注射液500 mL中混勻，靜脈滴注，至少持續2.5 h。1次/d，連續用藥7 d。停藥后實施腹腔鏡結直腸癌根治術。

1.3觀察指標化療前1 d及術后第7天分別采集患者的空腹靜脈血。由我院臨床檢驗科檢驗血清腫瘤標記物CEA、CA19-9、CA125水平和WBC計數，以及血清CD63、TGF-β1表達水平。

2 結果

2.1基線資料研究周期內共納入符合標準的患者40例，每組20例。2組患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者的基線資料比較

2.2血清腫瘤標記物水平及WBC計數化療前1 d 2組患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及WBC計數差異均無統計學意義(P>0.05)。術后第7天，2組患者的血清CEA、CA19-9、CA125水平均顯著下降，其中觀察組的水平低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。觀察組WBC計數較化療前無明顯下降，而對照組顯著下降，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者腫瘤標記物及WBC水平比較

2.3外泌體蛋白表達比較化療前1 d，2組患者血清CD63和TGF-β1表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。術后第7天，2組患者血清CD63和TGF-β1水平均顯著下降，且觀察組水平顯著低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者血清CD63和TGF-β1表達水平

3 討論

黃芪多糖是豆科植物黃芪的主要活性成分，在抗氧化、抗應激、抗衰老、抗病毒、抗腫瘤方面均具有重要作用[10]，尤其是多重抗腫瘤作用效果備受關注。黃芪多糖能通過促進固有免疫、適應性免疫殺傷腫瘤改變腫瘤微環境。外泌體作為細胞間通訊介質在腫瘤微環境中發揮重要作用，是促進腫瘤發生和轉移的重要信使。外泌體標志性蛋白CD63和TGF-β1作為液體活檢在腫瘤診斷和治療方面具有重要價值[11-12]。本研究結果顯示，黃芪多糖聯合新輔助化療可以降低結直腸癌患者血清CEA、CA19-9、CA125水平，以及外泌體標志性蛋白CD63和TGF-β1表達水平，而且WBC計數下降不明顯。表明黃芪多糖可以有效抑制外泌體分泌、改善患者機體免疫功能和減少細胞毒性。

外泌體在腫瘤細胞與腫瘤微環境動態平衡中發揮重要作用，通過促進腫瘤免疫逃逸、腫瘤組織新生血管生成、腫瘤細胞上皮間充質轉化等方式增強腫瘤細胞的惡性進展和轉移[13]。最近有研究顯示[14-15]，外泌體能夠促進靜息成纖維細胞活化呈腫瘤相關成纖維細胞(CAFs)，CAFs是腫瘤微環境中最主要的間質細胞，在腫瘤發展的不同階段均發揮著重要作用。而TGF-β1也能促進正常成纖維細胞向腫瘤相關成纖維細胞轉化。同時CAFs也能分泌外泌體作用于惡性腫瘤細胞，影響惡性腫瘤轉移[16]。腫瘤細胞、成纖維細胞、基質細胞等可以分泌外泌體，而這些外泌體可以調節腫瘤的增殖和轉移；同時外泌體分泌的雙鏈脫氧核糖核酸激活機體炎癥反應，導致患者出現化療耐藥和一系列相關的副反應[17]。故外泌體分泌抑制可以改善化療副反應。本研究結果顯示，黃芪多糖聯合新輔助化療可以使血清CD63和TGF-β1表達水平顯著下降，表明黃芪多糖可以有效抑制外泌體分泌，其抗腫瘤作用與抑制外泌體分泌密切相關。

骨髓抑制和胃腸道反應是新輔助化療常見的毒副反應，可嚴重影響患者的生活質量及預后。張明明等[18]給予胃癌術后患者應用黃芪多糖治療，可改善患者的WBC計數及血清CRP、PCT、IL-10炎性因子表達水平。本研究將黃芪多糖聯合新輔助化療用于結直腸癌患者，其效果與之相符，亦提示黃芪多糖在抗腫瘤的同時，可減輕化療所致的骨髓抑制反應，優化患者后期康復。

綜上所述，黃芪多糖聯合新輔助化療可有效降低結直腸癌患者血清外泌體分泌水平，增強免疫功能，減輕化療的毒性反應。但該結論尚需大樣本量的前瞻性隨機對照研究予以證實。