一種蛹蟲草配伍的新工藝酒對小鼠免疫功能調節作用研究

何 迅，郭 賓，左浩江，楊素紅，楊 華，李治中，鄒曉莉，李 蓉，許 欣，裴曉方

(1.四川大學華西公共衛生學院(華西第四醫院),四川成都 610041；2.宜賓五糧液仙林生態酒業有限公司，四川宜賓 644000)

我國酒文化綿延千年、獨具特色。《本草綱目》記載燒酒具有“消冷積寒氣，燥濕痰，開郁結，止水泄；治霍亂瘧疾噎膈、心腹冷痛、陰毒欲死；殺蟲辟瘴，利小便，堅大便，洗赤目腫痛”等功效。現代中醫也認為適量飲酒具有增進食欲、舒緩情緒、消除疲勞、活血通脈、助藥吸收等作用。近期研究還發現適量用飲低度酒與心血管風險呈負相關[1-2]。隨著人們生活水平提高，公眾對酒的需求持續增加，健康飲酒的理念也逐漸深入人心。與傳統白酒相比，消費者更愿意選擇兼具傳統風味和保健功能的產品。因此，近年來我國保健酒廣受青睞，市場蓬勃發展，增長率已超過白酒。

蛹蟲草是保健酒常用的泡制材料。蛹蟲草又稱北冬蟲夏草，與冬蟲夏草有相似的功效成分與藥理作用[3-4]，可參與宿主免疫調節[5-12]，并具有緩解肝損傷[13]、調節血糖、改善胰島素抵抗、抗氧化等多種功效。此外，蛹蟲草中蟲草多糖、蟲草素、超氧化物歧化酶等活性成分還明顯高于冬蟲夏草[14-15]，加之成品酒的口味醇和、成本較低、人工培育質量可控等優點，作為野生冬蟲夏草的替代品已獲廣泛認可[15-16]，并被嘗試用于白酒、黃酒、米酒、啤酒、葡萄酒、茶酒、客家娘酒等多種酒類產品。另有研究發現，蛹蟲草可通過競爭性抑制黃嘌呤氧化酶活性，降低體內尿酸含量，具有防治高尿酸血癥和痛風的潛質[17-18]。結合上述研究，與傳統白酒相比，以蛹蟲草配伍的保健酒可望具有多種保健功效。此外，不同白酒的非酒精成分具有不同功效，目前缺乏以頭部川酒為基酒的保健酒嘗試，其對宿主免疫功效也尚不清楚。

新工藝酒是五糧液基酒配以蛹蟲草為主自主研制的保健酒。該酒既保持了五糧液的獨特風味，又充分保留了蛹蟲草為主要材料的滋養調補功效，市場前景廣闊。為研究新工藝酒對宿主免疫功能的調節作用，依據《保健食品檢驗與評價技術規范》，觀察不同劑量新工藝酒對小鼠細胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細胞功能、NK 細胞活性率的影響，探討日常飲用新工藝酒對宿主的免疫調節作用，為健康飲酒提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

酒樣：經曲面響應法優化制法的五糧液蛹蟲草新工藝酒（5 倍濃縮液，酒精度15%vol），推薦服用量為100 mL/人/日。

實驗動物：SPF 級雄性Balb/c 小鼠，體重18～22 g，由成都達碩實驗動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（川）2013-24號。

耗材及試劑：綿羊紅細胞SRBC（成都達碩實驗動物有限公司），補體為12 只健康豚鼠（四川省實驗動物管理委員會養殖場）的混合血清，YAC-1細胞（中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫），RPMI1640 培養液、雙抗（成都哈里生物科技有限公司），氧化型輔酶Ⅰ（Sigma），墨汁（一得閣），刀豆蛋白A（Sigma）、細胞增殖試劑盒I MTT（Sigma），酶標儀（Multiskan MK3）。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及干預

動物基礎飼料適應性喂飼后，隨機分為5組，每組40只，包括：水對照組、基酒對照組、新工藝酒低、中、高劑量組。各組灌胃液依次為滅菌水、15%vol基酒、8.33 mL/kg·bw、16.67 mL/kg·bw、33.33 mL/kg·bw新工藝酒（分別相當于推薦日服用劑量的5 倍、10倍和20 倍）。灌胃量為20 mL/kg·bw，每天1 次，連續灌胃30 d，定期稱重。

1.2.2 免疫功能評價

連續灌胃30 d 后，頸椎脫臼處死動物。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》中“增強免疫力功能檢驗方法”，計算臟器/體重比值，測定新工藝酒對小鼠細胞免疫功能（小鼠遲發型變態反應-足跖增厚法，ConA 誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗-MTT 法），體液免疫功能（血清溶血素測定-血凝法，抗體生成細胞檢測-Jerne 改良玻片法），單核-巨噬細胞功能（小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗-半體內法、碳廓清法），NK 細胞活性率（乳酸脫氫酶法）的影響[20]。

1.2.3 實驗數據統計

采用PEMS 3.1 軟件進行統計學分析。結果以“均數±標準差”表示，采用各實驗組與對照組均數比較方差分析對數據進行處理。對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。

2 結果與分析

2.1 小鼠體重、脾臟/體重比值、胸腺/體重比值分析

各劑量組與對照組相比，其初始體重、中期體重、末期體重、體重增重均無統計學差異（P＞0.05）（數據未示出）。此外，脾臟/體重比值、胸腺/體重比值也無統計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 新工藝酒對小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值的影響

2.2 新工藝酒對小鼠細胞免疫功能的影響

遲發型變態反應：抗原攻擊24 h 后，各劑量組與對照組小鼠相比，其足跖腫脹度無統計學差異（P＞0.05），見表2。

淋巴細胞轉化實驗（MTT 法）：各劑量組與對照組小鼠相比，其光密度差值無統計學差異（P＞0.05），見表2。

表2 新工藝酒對小鼠細胞免疫功能的影響

2.3 新工藝酒對小鼠體液免疫功能的影響

血清溶血素測定：新工藝酒中、高劑量組與水對照組和基酒對照組小鼠相比，其抗體積數顯著增高（P＜0.01，P＜0.05），其余各劑量組與對照組小鼠相比，其抗體積數無統計學差異（P＞0.05），見表3。

抗體生成細胞檢測（Jerne 改良玻片法）：各劑量組與對照組小鼠相比，其抗體生成細胞數無統計學差異（P＞0.05），見表3。

表3 新工藝酒對小鼠體液免疫功能的影響

2.4 新工藝酒對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響

腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力測定：各劑量組與對照組小鼠相比，其腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率與吞噬指數無統計學差異（P＞0.05），見表4。

碳廓清實驗：各劑量組與對照組小鼠相比，其碳廓清吞噬指數a 無統計學差異（P＞0.05），見表4。

表4 新工藝酒對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響

2.5 新工藝酒對小鼠NK細胞活性率的影響

新工藝酒低、中劑量組與水對照組和基酒對照組小鼠相比，其NK 細胞活性率顯著增加（P＜0.01，P＜0.05），其余各劑量組與對照組小鼠相比，其NK細胞活性率無統計學差異（P＞0.05），見表5。

表5 新工藝酒對小鼠NK細胞活性率的影響

3 討論

目前，保健酒中用于提高免疫力的原料主要有冬蟲夏草和蛹蟲草等。據《本草拾遺》和《本草從新》記述，冬蟲夏草“味甘性溫，秘精益氣”，“以酒浸數枚，啖之治腰膝間痛楚，有益腎之功”。然而由于野生冬蟲夏草生長緩慢、數量稀少，加上過度挖采已導致資源瀕臨枯竭[5]。現代研究表明，蛹蟲草與冬蟲夏草都含有蟲草素、蟲草多糖、腺苷、生物堿、酚類、超氧化物歧化酶、硒等功效成分[3，16]。其中，蟲草多糖作為免疫調節劑，可促進IL-2、IL-6、IL-8、IL-18等細胞因子表達，刺激淋巴細胞增殖、提高巨噬細胞活性，是理想的免疫增強劑[6-7，19]；腺苷有促進血管擴張，增加血流量，降低血壓等作用；蟲草酸能改善人體微循環，具有降血脂、鎮咳、祛痰等作用；硒作為公認的抗癌元素，也具有抗氧化，增強機體免疫的能力[15]。此外，大量細胞、動物、人體研究均表明，蛹蟲草可望通過刺激NK 細胞、T 細胞、B細胞、巨噬細胞活性，促進免疫因子表達等多種途徑，來提高宿主的免疫力[10-11，20-23]。

本研究根據《保健食品檢驗與評價技術規范》，測試了新工藝酒對小鼠細胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細胞功能、NK 細胞活性率的影響，結果發現：在小鼠血清溶血素抗體積數檢測中，中劑量組（16.67 mL/kg·bw）和高劑量組（33.33 mL/kg·bw）與水對照組和基酒對照組小鼠相比，其抗體積數顯著增加（P＜0.01，P＜0.05）；在小鼠NK 細胞活性率測定實驗中，低劑量組（8.33 mL/kg·bw）和中劑量組（16.67 mL/kg·bw）與水對照組和基酒對照組小鼠相比，其NK 細胞活性率顯著增加（P＜0.01，P＜0.05）。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》及相關評價標準，提示新工藝酒具有改善小鼠免疫力的作用。同時，本研究結果也與上述蛹蟲草調節宿主免疫的研究結果相吻合，但受樣本量、干預方式等限制，有待進一步驗證。

綜上所述，新工藝酒既保持了五糧液酒基的獨特風味，又充分保留了蛹蟲草的滋養調補功效，具有增強宿主機體免疫的潛質，適合多類人群食用，市場前景廣闊，值得進一步研究開發。