強直性脊柱炎患者抗核抗體檢測結果及臨床意義分析

陳水綿，游玉權，張紅鳳，饒華春，郭慶昕△，蔡美美

福建中醫藥大學附屬泉州市正骨醫院：1.檢驗科；2.強直性脊柱科，福建泉州 362000

強直性脊柱炎(AS)是一種以侵犯脊柱、骶髂關節為主要臨床表現，可同時合并全身多部位炎癥或異常的慢性進展性疾病。自身抗體是診斷自身免疫性疾病(AID)的重要依據，抗核抗體是細胞內所有核抗原成分的總稱，為AID的重要輔助診斷指標?？购丝贵w存在多種熒光模型，不同熒光模型對應不同的特異性抗體，如抗-SSA抗體、抗-SSB抗體、抗-雙鏈DNA(ds-DNA)抗體等，常見的特異性抗體大部分可通過抗核抗體譜檢測，這些抗體也可在AID臨床癥狀前數年被檢出[1]，是AID早期診斷必不可少的生物學指標。本文回顧性分析AS患者血清中抗核抗體的檢測結果，探討抗核抗體檢測結果在AS患者中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2018—2019年明確診斷為AS的患者453例為研究對象，對抗核抗體檢測結果和臨床資料進行統計分析，其中合并其他AID的患者12例，包括合并類風濕性關節炎(RA)5例、干燥綜合征(SS)3例、系統性紅斑狼瘡(SLE)2例、系統性硬化癥(SSc)1例、混合性結締組織病(MCTD)1例。納入標準：(1)符合國際相關協會AS、RA、SLE、SS、SSc、MCTD診療指南推薦的診斷標準；(2)排除合并乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒患者；(3)排除銀屑病或腸道疾病患者。453例研究對象中男性344例(75.94%)，平均年齡(33±10)歲；女性109例(24.06%)，平均年齡(36±11)歲。

1.2儀器與試劑 Leica-DM2500熒光顯微鏡(德國恩斯特·徠茨公司)、EURO-Blot MasterⅡ全自動免疫印跡及配套的EURO-Lin Scan軟件掃描儀(德國歐蒙醫學診斷有限公司)、TDZ5-WS臺式低速離心機(湖南湘潭湘儀儀器有限公司)、420B電熱恒溫水浴箱(江蘇新康醫療器械有限公司)。血清抗核抗體IgG檢測試劑盒(德國歐蒙醫學診斷有限公司)，每個反應區同時有靈長類肝組織切片和人喉癌上皮細胞?？购丝贵w譜IgG抗核抗體檢測試劑盒(德國歐蒙醫學診斷有限公司)。

1.3方法 采用間接免疫熒光法檢測抗核抗體，暗環境中用Leica-DM2500熒光顯微鏡鏡檢。結果判讀：抗體滴度<1∶100為陰性，抗體滴度≥1∶100為陽性，包括1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200、>1∶3 200，滴度≥1∶320的標本平行稀釋到最終滴度，由本實驗室內有5年以上工作經驗的工作人員判讀，雙人復核。采用免疫印跡法檢測抗核抗體譜IgG，使用全自動免疫印跡儀進行檢測，配套EURO-LinScan軟件進行顯色結果灰度值掃描分析。結果判讀：灰度值<11為陰性，11～25為弱陽性，>25為陽性。

2 結 果

2.1不同性別AS患者抗核抗體分布特征 453例AS患者中抗核抗體陽性139例，陽性率為30.68%。將抗核抗體檢測結果分為陽性組(139例)和陰性組(314例)。陽性組男性92例、女性47例，平均年齡(35±11)歲；陰性組男性252例、女性62例，平均年齡(34±10)歲。12例AS合并其他AID患者中男性5例、女性7例，平均年齡(42±8)歲；抗核抗體陽性11例，陽性率為91.67%。女性患者抗核抗體陽性率(43.12%，47/109)顯著高于男性患者的抗核抗體陽性率(26.74%，92/344)，差異有統計學意義(χ2=10.44,P<0.01)。

2.2抗核抗體陽性的AS患者熒光核型分布 139例抗核抗體陽性的AS患者，各核型所占比例依次為顆粒型(45.32%，63/139)、均質型(18.71%，26/139)、胞漿型(16.66%，23/139)、核仁型(8.63%，12/139)、混合型(6.47%，9/139)、其他核型(4.32%，6/139)。胞漿型以胞漿顆粒型為主(73.91%,17/23)；混合型以顆粒型混合胞漿顆粒型為主(44.44%，4/9)。各核型檢出率比較，差異有統計學意義(χ2=17.9,P<0.01)。

2.3抗核抗體陽性的AS患者核型滴度分布 抗核抗體陽性的AS患者整體滴度中位數為1∶100，各核型滴度中位數分別為顆粒型1∶100，均質型1∶210，胞漿型1∶100，核仁型1∶100，混合型1∶100，其他核型1∶210。見圖1。

2.4不同性別中高滴度(≥1∶320)抗核抗體患者分析 將139例抗核抗體陽性的AS患者分成中高滴度組(≥1∶320)與低滴度組(1∶100)。中高滴度組36例，其中男性22例、女性14例；低滴度組103例，其中男性70例、女性33例；2組男女各自所占比例差異無統計學意義(χ2=0.56，P>0.05)。抗核抗體中高滴度(≥1∶320)患者核型以均質型為主(38.89%，14/36)；中高滴度組患者中13例進行了抗核抗體譜檢測，其特異性抗體陽性率為30.77%(4/13)；4例抗核抗體譜陽性的特異性抗體分別為抗ds-DNA抗體(均質型1∶1 000)?？购诵◇w抗體(胞漿顆粒型1∶1 000)、抗nRNP/Sm抗體、抗Ro-52抗體(胞漿纖維型1∶1 000)、抗組蛋白抗體(均質型1∶1 000)。12例AS合并其他AID患者中，中高滴度患者6例，占50.00%，其中僅2例進行了抗核抗體譜檢測，均檢出了特異性抗體。

2.5AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回歸分析 以AS患者有無合并其他AID(賦值：無=0，有=1)為因變量，以性別(賦值：男=0，女=1)、年齡(賦值：<20歲=0,20～35歲=1,>35～45歲=2,>45歲=3)、抗核抗體結果(賦值：陰性=0，陽性=1)、滴度1∶100(賦值：其他=0,1∶100=1)、滴度1∶320(賦值：其他=0,1∶320=1)、滴度1∶1 000(賦值：其他=0,1∶1 000=1)為自變量進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，年齡越大、抗核抗體陽性為AS合并其他AID的危險因素(P<0.05)。見表1。

注：H表示均質型；S表示顆粒型；C表示胞漿型；N表示核仁型；Mix表示混合型；Others表示核點型、中心粒型、著絲點型、致密顆粒型等其他核型。

表1 AS患者合并其他AID患者多因素Logistic回歸分析結果

3 討 論

AS發病機制的研究主要集中在免疫、遺傳、腸道感染等相關的領域。有研究通過交叉理論和分子模擬做動物模型試驗，證實微生物感染腸道上皮細胞后數天可使機體產生自身抗體[2]。另外，已有研究利用宏基因組學的技術為腸道菌群異常在自身免疫性疾病中致病機制的研究提供了依據[3]。因此，抗核抗體在AS患者中有一定的陽性率，但結締組織病與AS是否有共同的發病基礎，目前研究尚無定論，而AS合并其他AID的相關文獻，國內外鮮有報道[4-7]。

本研究結果顯示，AS患者抗核抗體陽性率為30.68%，與近年文獻報道較為一致[8-9]。男性患者(75.94%)所占比例遠高于女性(24.06%)，但對抗核抗體陽性患者進行分析，109例女性患者中抗核抗體陽性率(43.12%)卻顯著高于344例男性患者中的抗核抗體陽性率(26.74%)，可見盡管是以男性為主的研究人群中，抗核抗體陽性仍具有明顯的性別差異?？赡艿脑驗榇萍に赝ㄟ^與B淋巴細胞的雌激素受體結合參與免疫調節，從而可能導致女性中自身抗體的產生與增加[9]。

本研究結果顯示，抗核抗體陽性患者不同核型檢出率差異有統計學意義(P<0.05)。核型以顆粒型(45.32%)為主，其他核型較為分散，主要原因為AID不同個體因致病機制的差異可出現不同的靶抗原及熒光核型。顆粒型特異性抗體以抗-SSA抗體、抗-SSB抗體、抗U1-RNP抗體為主，而抗-SSA抗體、抗-SSB抗體為SS的特異性抗體[10-12]。SS常伴隨其他AID，然而關于SS與AS并存的報道較少[13-14]。有文獻報道顯示，AS患者中，10%伴有SS，71.4%為抗核抗體陽性[14]。HELENIUS等[15]研究認為，AS與SS可能存在相似的發病基礎。

抗核抗體陽性的AS患者核型滴度的分布以低滴度為主，抗核抗體滴度≥1∶320的AS患者占18.71%(36/139)。低滴度抗核抗體常見于健康人或老年人，但本文抗核抗體在AS中的陽性檢出率(30.68%)遠高于以往研究中健康體檢者抗核抗體的陽性率12.8%[16]、9.86%[17]。本研究合并其他AID的AS患者有12例，主要合并RA，這可能與本院風濕病患者中以RA為主有關。

對AS合并其他AID患者進行多因素Logistic回歸分析結果顯示，年齡越大、抗核抗體陽性為AS并發其他AID的高危因素。年齡越大，細胞凋亡更頻繁，而細胞凋亡中降解表達在細胞表面的蛋白通常為抗核抗體譜的靶細胞，因此，隨著年齡的增長，患AID的風險越大。本研究也在一定的局限性，對滴度的多因素Logistic回歸分析只顯示1∶100為其危險因素，1∶320與1∶1 000卻沒有呈現，分析原因為：(1)本研究AS合并其他AID的患者病例數不足，滴度、核型數據離散，仍需要設計合理的大樣本研究并進行長期隨訪來論證；(2)確診患者并非首診患者，可能受治療過程中藥物等混雜因素影響。劉倩等[18]通過總結國內外文獻發現，AS合并其他AID，兩者癥狀的出現時間相隔大多在5年以上,因此，隨著疾病發展，年齡越大，抗核抗體陽性的AS患者應警惕并發其他AID。

綜上所述，臨床工作中AS患者可通過臨床表現及抗核抗體檢查結果，加強其臨床分類管理。對抗核抗體陽性的中老年人應長期進行醫學隨訪，注意詳問病史、查體，深入評估是否并發其他AID。檢出中高滴度抗核抗體患者，建議進一步做抗核抗體譜的特異性靶抗原確認或其他相關輔助檢查。當臨床高度疑似合并其他AID，不論抗核抗體檢測結果如何，都需要對特異性抗體進行檢測，有利于AS患者合并其他AID的早發現、早診斷、早治療。