Mejer-1800尿有形成分分析儀性能評估

羅佳佳，曹麗坤，楊 柳，謝 珍，謝乃亮，彭契六△

廣西國際壯醫醫院檢驗科，廣西南寧 530201

尿有形成分分析作為臨床實驗室常規檢測項目，常用于泌尿系統疾病及腎臟疾病的輔助診斷、鑒別診斷、藥物療效及預后判斷等，對健康人群的篩查也起到一定的作用[1]。傳統尿有形成分檢測手段操作繁雜、耗時長、工作效率低、誤差大，不易于室內質量控制。隨著科學技術的發展，尿有形成分分析儀相繼進入醫院實驗室，尿液的檢測分析實現了自動化、快速化、標準化。ISO 15189規定了尿有形成分分析儀性能驗證內容包括精密度、攜帶污染率及臨床可報告范圍[2]。儀器的性能驗證及質量監督控制是實驗室認證的重點[3-4]，為了確保報告的準確性，更好地服務于臨床，本文按照ISO 15189及相關行業標準，對Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩定性、精密度、符合率、假陰性率、攜帶污染率、線性范圍、生物參考區間等進行驗證，進而評價本實驗室Mejer-1800尿有形成分分析儀是否適用于臨床。

1 材料與方法

1.1材料 本次實驗所用標本均取自2020年2—5月本院門診和住院及體檢健康者隨機尿液標本，標本性狀均符合相應實驗要求。

1.2儀器及試劑 實驗儀器為深圳美僑醫療科技有限公司生產的Mejer-1800尿有形成分分析儀，質量控制品由美國伯樂試劑公司提供。

1.3方法

1.3.1檢出限 選取5個/微升的紅細胞(RBC)和白細胞(WBC)標本，重復檢測20次，如果90%及以上的檢測結果大于0個/微升，則認為驗證通過。

1.3.2穩定性 將陽性質控配制成水平約為200個/微升的標本，混勻后采取手動進樣模式分別在開機預熱后、4 h、8 h重復檢測10次，計算3個不同時間段的變異系數(CV)，CV≤15%即可認為驗證通過。

1.3.4符合率 單項結果與人工顯微鏡鏡檢結果的符合率。選取150份臨床尿液標本，分別進行Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測和人工顯微鏡鏡檢，其中RBC病理標本量不得低于90份，WBC病理標本量不得低于90份，管型(CAST)病理標本量不得低于30份，根據公式C=(t1+t2)+/t總×100%計算符合率，C為各有形成分符合率，人工顯微鏡鏡檢結果和Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測均為陽性的標本數記為t1，人工顯微鏡鏡檢結果和Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測結果均為陰性的標本數記為t2，總標本數為t總。人工顯微鏡鏡檢結果陰性、陽性判定標準為紅細胞3個/HPF、白細胞5個/HPF、管型1個/LPF。

1.3.5假陰性率 對至少200份隨機選取的臨床尿液標本進行Mejer-1800尿有形成分檢測及人工顯微鏡鏡檢，以人工顯微鏡鏡檢結果為“金標準”，根據公式F=t0/t總×100%計算RBC、WBC和CAST的假陰性率，假陰性率記為F，RBC、WBC和CAST Mejer-1800尿有形成分分析儀檢測結果為陰性但人工顯微鏡鏡檢結果為陽性的標本數量記為t0，總標本量記為t總，假陰性率≤3%即可認為驗證符合要求。

1.3.6攜帶污染率 取臨床高濃度尿液標本(RBC≥5 000個/微升、WBC≥5 000個/微升)，混勻后在Mejer-1800尿有形成分分析儀上采用手動進樣模式連續檢查3次，測定值分別為i1、i2、i3；再取低濃度尿液樣本(生理鹽水)采用手動進樣模式連續測定3次，測定值分別為j1、j2、j3，根據公式計算攜帶污染率T=(i1-i3)/(i3- j3)×100%，攜帶污染率≤0.05%即可認為驗證通過。

1.3.7生物參考區間驗證 本實驗室以美國臨床實驗室標準化協會認可的《室間內確定、建立、驗證生物參考區間：EP28-A3C》[4]文件進行生物參考區間驗證。選取20份參考個體的新鮮尿液標本進行儀器檢測，將檢測結果與本實驗室現用的參考區間作比較。評價標準：測定值至少90%落在參考區間，驗證通過。

1.3.8線性范圍 選取高濃度臨床新鮮尿液標本，要求細胞水平接近分析儀的檢測范圍上限(WBC接近3 000個/微升，RBC接近5 000個/微升)，兩份尿液標本按一定比例量(原尿液∶生理鹽水)作1∶4、1∶16、1∶32、1∶128、1∶256的倍比稀釋，充分混勻后每個稀釋度重復測定3次，計算均值，即為各稀釋比例尿液標本的實測值，理論值為原尿除以稀釋倍數，將各稀釋比例尿液標本的實測值與理論值進行比較，計算Y=aX+b。評價標準：0.95

1.4統計學處理 實驗數據采用Excel2007進行統計描述和直線回歸分析。

2 結 果

2.1檢出限 稀釋后的RBC和WBC標本20次檢測中19次(95%)檢測結果均大于0個/微升，驗證通過。

2.2穩定性 在開機預熱后、4 h、8 h將配制成功的標本重復檢測10次，計算所有數據均數為184.7，標準差為25.42，CV為13.76%，按照CV≤15%為評價標準，Mejer-1800尿有形成分分析儀穩定性驗證通過。

2.3精密度 RBC和WBC的批內精密度均通過驗證，見表1。日間精密度符合評價標準，見表2。

表1 Mejer-1800各參數批內精密度驗證結果

表2 Mejer-1800日間精密度驗證結果

2.4符合率 RBC、WBC和CAST的符合率驗證結果見表3。

表3 Mejer-1800各參數符合率驗證結果

2.5假陰性率 RBC、WBC和CAST的假陰性率驗證結果見表4。

表4 Mejer-1800各參數假陰性率驗證結果

2.6攜帶污染率 RBC和WBC的攜帶污染率驗證結果見表5。

表5 Mejer-1800各參數攜帶污染率驗證結果

2.7生物參考區間驗證 20份參考個體的尿液標本RBC檢測結果有18份(90%)落在參考區間內，20份參考個體的尿液標本WBC檢測結果有19份(95%)落在參考區間內，表明該參考區間適用于本實驗室。

2.8線性范圍 將倍比稀釋標本連續檢測3次，均值與理論值比較，得出RBC線性回歸方程為Y=0.964 7X+94.371 0，見圖1。

圖1 線性范圍

3 討 論

實驗室尿有形成分分析主要依靠人工顯微鏡檢查，人工顯微鏡檢查耗時長且無法進行大批量尿液標本的檢測[5]。近年來，尿有形成分的檢測手段隨科技發展不斷更新，尿有形成分分析儀已普遍應用于臨床實驗室中，其分析速度快，多項目參數同時檢測，標準化操作易于進行室內質量控制[6-7]。尿有形成分是尿液分析的重要組成部分，其分析儀的性能驗證就顯得尤為重要。本實驗按照ISO 15189的要求，同時結合相關行業標準，對本實驗室中Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩定性、精密度、符合率、假陰性率、攜帶污染率及臨床可報告范圍等指標進行驗證。并確認其生物參考區間是否適用于本實驗室。

Mejer-1800尿有形成分分析儀檢出限驗證中，RBC和WBC標本20次檢測中19次結果均大于0個/微升，驗證通過，和廠家給出的檢出限范圍一致。開機預熱后、4 h、8 h對配制的標本重復檢測10次，計算所有數后得出CV為13.76%，按照CV≤15%為評價標準，Mejer-1800尿有形成分分析儀穩定性驗證通過，提示儀器長時間運行對穩定性有一定的影響，為保證結果的準確性，Mejer-1800尿有形成分分析儀每日應關機并定期保養。Mejer-1800尿有形成分分析儀RBC和WBC的精密度性能良好，因采用的伯樂質控品只有WBC、RBC 2種有形成分，所以本研究只驗證了WBC和RBC 2項參數，研究顯示該分析儀精密度符合廠家要求，且檢測系統重復性較好。本研究中攜帶污染率、線性范圍也符合Mejer-1800尿有形成分分析儀的儀器要求。生物參考區間的驗證研究中，20份參考個體的尿液標本檢測結果中，RBC有18份落在參考區間內， WBC檢測結果有19份落在參考區間內，表明該生物參考區間適用于本實驗室。按照相關行業標準需要對待測儀器的識別率驗證，本研究對單項參數(RBC、WBC、CAST)與人工顯微鏡鏡檢進行比較，結果表明各項參數符合率均驗證合格；RBC假陰性率為2.5%，WBC假陰性率為1.0%，CAST假陰性率為1.0%，各參數假陰性率驗證合格，表明Mejer-1800尿有形成分分析儀識別率符合要求。

另外，有文獻指出，伯樂質控品影響精密度的檢測[8]，由于伯樂質控品包含RBC、WBC及結晶等多種成分，在高濃度水平檢測分析時，儀器會把部分RBC歸入WBC欄或者未能識別分類，CV過大，需要人工修正，主觀因素導致驗證過程中不確定度的增加，進而影響精密度的檢測。另外由于質控品的局限性，在后續研究中可加入其他參數如CAST的精密度驗證。此外，Mejer-1800尿有形成分分析儀是依據尿液中細胞體積、核染色及顆粒大小進行形態識別，干擾因素不可避免。在實際工作中，Mejer-1800尿有形成分分析儀易把酵母菌識別成RBC，同時也存在把黏液絲、上皮細胞等誤認為透明管型的現象；另外，當尿液中磷酸鹽結晶增多時，RBC檢測會出現假陰性的情況，并且儀器常會把附著有磷酸鹽結晶的黏液絲誤認為是顆粒管型；其次，Mejer-1800尿有形成分分析儀結晶圖譜尚未完善，目前只能識別草酸鈣結晶，對臨床常出現的尿酸結晶等暫無識別能力。因此，每個實驗室應根據實際情況嚴格制訂尿有形成分分析儀的復檢規則，將分析儀檢測和人工顯微鏡鏡檢相結合，提高復檢率，降低假陰性率，確保尿液結果的準確性[9]。

綜上所述，本研究中Mejer-1800尿有形成分分析儀的檢出限、穩定性、精密度、攜帶污染率、線性范圍及生物參考區間等符合質量標準要求，必要時將尿有形成分分析儀和人工顯微鏡鏡檢結合，可以為臨床提供更好的服務。