探討煤工塵肺合并非小細胞肺癌患者中P53基因蛋白的表達

張建紅，化靜

（北京京煤集團總醫院，北京 102300）

煤工塵肺是一種由于過量吸入塵土而形成的肺部疾病，多發于長時間處于多灰塵環境的人群中。煤工塵肺持續發展極易引發多種并發癥，其中肺癌是最嚴重的并發癥之一，嚴重威脅患者的生命健康和安全[1]。臨床表明，多種腫瘤疾病發生時，機體內的P53 基因會出現突變、缺失或者失活情況，形成肺癌時，機體內具有較高的P53 基因蛋白表達陽性率，普遍超過50%[2]。因此，檢測P53基因蛋白表達情況是臨床診斷煤工塵肺合并非小細胞肺癌疾病的重要依據，同時，為臨床制定具有針對性的治療方案提供科學依據[3]。由于現階段臨床上關于P53 基因蛋白表達報道較少，基于此，本研究旨在分析煤工塵肺合并非小細胞肺癌患者中P53 基因蛋白的表達情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017 年1 月至2019 年1 月本院收治的煤工塵肺合并非小細胞肺癌患者64 例作為研究組，其中患者的煤工塵肺符合《GBZ 70-2015 職業性塵肺病的診斷》中的煤工塵肺診斷標準，并經過專業的煤工塵肺鑒定小組確診。另選取同期本院收治的按確診時間順序符合入組條件的前64 例非職業病相關的男性非小細胞肺癌患者作為對照組。研究組年齡50～75 歲，平均年齡（62.5±1.8）歲；接塵時間 4～30 年，平均接塵時間（16.0±1.7）年；煤工塵肺分期：Ⅰ期29 例，Ⅱ期21 例，Ⅲ期14 例；并發肺癌病理組織學類型：鱗狀細胞癌35 例，腺癌29 例。對照組年齡49～74 歲，平均年齡（61.5±1.6）歲；肺癌病理組織學類型：鱗狀細胞癌34 例，腺癌30 例；全部為無接塵史，且無肺部職業病。兩組臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。患者及家屬均簽署知情同意書，本研究獲得醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 腫瘤個體化基因檢測采用高通量測序技術對患者的樣本（組織）進行DNA 分子序列深度測序，將研究組與對照組肺癌組織標本的蠟塊組織切成10 μm 的薄片5～10片，取樣品加入反應體系中，94 ℃預變性5 min，擴增條件為94 ℃ 45 s，55 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，擴增35個循環后72 ℃延伸5 min。取擴增產物5μL加入5μL上樣緩沖液，在94 ℃保溫5 min 后滿上將其置于冰浴中5 min。將處理好的標本加樣于8%非變性聚丙烯酰胺凝膠中，200 V電壓電泳4 h。電泳結束后用P53 即用型SABC 試劑盒（武漢博士德公司）實施染色，DAB顯色，利用Harris蘇木素進行復染。檢測結果為：細胞核內存在棕黃色顆粒。顯色情況，陰性：腫瘤細胞顯色低于10%；陽性：腫瘤細胞核顯色超過10%。

1.3 觀察指標 比較兩組患者P53基因蛋白表達、不同病理類型中P53基因蛋白表達情況；兩組患者P53基因蛋白表達情況與淋巴結轉移的關系；兩組P53基因蛋白表達情況與術后生存期的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以“”表示，行t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組P53 基因蛋白表達陽性率比較 研究組P53 基因蛋白表達陽性率明顯高于對照組（χ2=5.165，P＜0.05），見表1。

表1 P53基因蛋白表達結果Table 1 P53 gene protein expression results

2.2 不同病理類型中P53 基因蛋白表達情況 研究組的鱗狀細胞癌的P53 基因蛋白表達陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），而研究組的腺癌P53基因蛋白表達陽性率明顯低于對照組（P＜0.05），見表2

表2 不同病理類型中P53基因蛋白表達情況（%）Table 2 Expression of P53 gene protein in different pathological types(%)

2.3 P53 基因蛋白表達情況與淋巴結轉移的關系 研究組淋巴結轉移陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組無淋巴結轉移陽性率明顯低于對照組（P＜0.05）；兩組淋巴結轉移陽性率明顯高于無淋巴結轉移陽性率（P＜0.05），見表3。

表3 P53基因蛋白表達情況與淋巴結轉移的關系Table 3 Relationship between P53 gene protein expression and lymph node metastasis

2.4 P53基因蛋白表達情況與生存期的關系 治療后，機體內P53 基因發生突變的陽性率持續降低。手術治療的生存期明顯長于放化療、靶向、免疫等治療方式的生存時間。研究組生存時間≤18個月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組生存時間＞18 個月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）；兩組患生存時間≤18 個月的陽性率明顯高于生存時間＞18個月的陽性率（P＜0.05），見表4。

表4 P53基因蛋白表達情況與生存期的關系（%）Table 4 Relationship between p53 gene protein expression and survival time(%)

3 討論

野生型P53是一類特殊的抑癌基因，突變型P53則喪失了抑癌功能，同時，對野生型P53 活性進行抑制或使其徹底喪失活性，導致機體內的細胞發生轉化和癌變[4]。煤工塵肺組病理組織學類型可依據P53 基因蛋白陽性表達情況分為鱗狀細胞癌、腺癌、小細胞癌和細支氣管肺泡癌等多種類型。大量臨床研究表明，煤工塵肺合并肺癌生存期、淋巴結轉移情況與P53基因蛋白陽性表達均密切相關，因為煤工塵肺普遍合并其他疾病發生，造成患者機體的抵抗力持續降低，同時機體自身的肺呼吸功能不斷降低，實施肺葉手術切除后，患者的呼吸代償功能得到較大程度的限制，同時基因蛋白陽性表達過高[5-6]。有研究表明，P53基因突變對患者的生存時間有較大影響，基因蛋白突變陽性患者的生存期較短，因此，臨床上檢測P53基因蛋白的表達具有重要意義[7]。

長期處于粉塵環境下可增加多種致癌物質的產生，促進SiO物質處于游離狀態并造成致癌物質大量聚集，進一步發展為肺癌[8]。本研究結果顯示，研究組P53 基因蛋白表達陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），且研究組鱗狀細胞癌的P53基因蛋白表達陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），而研究組腺癌P53 基因蛋白表達陽性率明顯低于對照組（P＜0.05），說明長期接受粉塵以及多種化學物質的局部刺激可以明顯增加肺癌的發病風險。另外，說明不同病理類型中P53基因蛋白表達存在明顯差異，為區分是否存在塵肺病提供重要的參考依據。煤工塵肺合并肺癌組患者長時間處于礦區井下環境中，其氡氣含量和內照射劑量持續增加，臨床研究表明，氡及其子體可以明顯提高患者肺癌的發生率。本研究結果顯示，研究組淋巴結轉移陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組無淋巴結轉移陽性率明顯低于對照組（P＜0.05）；兩組淋巴結轉移陽性率明顯高于無淋巴結轉移陽性率（P＜0.05）；研究組生存時間≤18 個月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組生存時間＞18 個月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）；兩組生存時間≤18個月的陽性率明顯高于生存時間＞18 個月的陽性率（P＜0.05），說明機體內P53 陽性表達與淋巴結轉移、生存期呈正相關，P53 基因蛋白表達是促使肺癌轉移、決定患者預后中的重要因素。

綜上所述，檢測煤工塵肺合并NSCLC 肺癌患者機體內的P53基因蛋白表達，其檢測結果可反映機體內淋巴結轉移的關系以及生存期，為煤工塵肺合并NSCLC 肺癌的臨床綜合診斷和臨床治療提供重要的參考依據。