亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性與不明原因復發性流產的相關性分析

姜一飛

（常州市中醫醫院婦產科，江蘇 常州 213003）

不明原因復發性流產是指在妊娠28周之前連續發生3次或3次以上的自然流產，在排除母體生殖道解剖異常、母體內分泌異常及自身免疫功能紊亂后，仍無法找到明確原因的病癥，發病率約占妊娠總數的1%[1]。相關研究顯示，高同型半胱氨酸（Hcy）血癥對胚胎有影響，是胎盤早剝、先兆子癇等疾病的高危因素，通過多種途徑參與復發性流產，且妊娠期高 Hcy 可增加母體血栓的發生風險[2]。亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是Hcy代謝途徑中的關鍵酶，相關報道顯示，MTHFR基因C677T位點的多態性可能是導致不明原因復發性流產發生的高危因素[3]。基于此，本研究就葉酸代謝相關酶MTHFR基因多態性與不明原因復發性流產的相關性進行分析，現作如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析常州市中醫醫院2018年1月至2020年6月收治的263例不明原因復發性流產患者的臨床資料，將其作為試驗組，年齡23 ～ 38歲，平均（30.51±2.76）歲；流產次數3 ～ 5次，平均（3.97±0.36）次。診斷標準：參照《復發性流產免疫學診斷和治療共識》[4]中的相關診斷標準。納入標準：符合上述診斷標準者；夫婦雙方不存在染色體異常者；抗核抗體、抗心磷脂抗體檢測結果呈陰性者；未合并高血壓、糖尿病等疾病者等。排除標準：內分泌相關檢測指標異常者；合并肝腎等器官性疾病者；近期服用維生素補充治療者等。另回顧性分析同期進行體檢的260例健康女性的體檢資料，將其作為對照組，年齡22 ～ 35歲，平均（29.48±2.63）歲，無自然流產史、不良產史及血栓疾病史。將兩組研究對象一般資料對比，差異無統計學意義（P > 0.05），組間可進行對比分析。本研究經常州市中醫醫院醫學倫理委員會審核并批準。

1.2 方法 采用PCR法檢測葉酸代謝相關酶基因多態性：利用無菌棉簽反復刮取兩組研究對象口腔黏膜的上皮細胞，提取細胞DNA，采用SLAN-96熒光定量 PCR儀（深圳泰樂德醫療有限公司，型號：ABI7500）檢測MTHFR 基因 C677T 位點的多態性，PCR反應條件：89℃預變性 15 min， 95℃ 變性 10 s， 62℃ 退火延伸 2 min， 21個循環； 90℃變性12 s，61℃退火延伸92 s，29個循環。PCR反應結束后，根據SLAN-96 熒光定量 PCR 儀上讀取的終點熒光，利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結果。

1.3 觀察指標 ①將兩組研究對象血清葉酸水平、紅細胞葉酸水平及維生素B12水平進行對比。分別采集清晨空腹外周靜脈血5 mL，一部分血樣以3 000 r/min的轉速離心10 min，取血清，采用化學發光法測定血清葉酸水平；另一部分血樣用0.5%的抗壞血酸溶血處理，采用時間分辨熒光法檢測紅細胞葉酸水平；血清維生素B12水平采用時間分辨熒光免疫分析法測定。②比較兩組研究對象MTHFR基因C677T位點基因分布頻率。③分析不明原因復發性流產與MTHFR基因多態性及紅細胞葉酸、血清葉酸、維生素B12水平的相關性。

1.4 統計學方法 應用SPSS 23.0統計軟件分析處理文中數據，計數資料與計量資料分別以[ 例(%)]與(±s?)表示，采用χ2與t檢驗，相關性分析采用Pearson軟件進行分析。以P < 0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清葉酸、紅細胞葉酸及維生素B12水平 與對照組比，試驗組患者血清葉酸水平明顯升高，而血清紅細胞葉酸、維生素B12水平均明顯降低，差異均有統計學意義（均P < 0.05），見表1。

表1 兩組研究對象血清葉酸、紅細胞葉酸及維生素B12水平比較(?±s?)

組別 例數 葉酸(nmol/L) 紅細胞葉酸(nmol/L) 維生素B12(pmol/L)對照組 260 123.44±14.15 184.57±35.72 164.32±26.38試驗組 263 130.16±13.28 156.24±31.16 142.45±24.76 t值 5.601 9.668 9.777 P值 < 0.05 < 0.05 < 0.05

2.2 葉酸代謝相關酶MTHFR基因多態性 與對照組比，試驗組患者MTHFR基因C677T位點CC型基因頻率升高，而CT、TT型基因頻率降低，差異均有統計學意義（均P < 0.05），見表2。

2.3 相關性分析 不明原因復發性流產與血清葉酸水平和MTHFR基因C677T位點CC型基因頻率呈正相關（r = 0.657、0.670，均P < 0.05），與血清紅細胞葉酸、維生素B12水平及MTHFR基因C677T位點CT、TT型基因頻率呈負相關（r = -0.564、-0.691、-0.642、-0.599，均P < 0.05），見表 3。

表3 不明原因復發性流產與MTHFR基因多態性及紅細胞葉酸、血清葉酸、維生素B12的相關性

3 討論

不明原因復發性流產大部分是早期流產，少數部分是晚期流產，早期流產原因為胚胎染色體異常、黃體功能不全等；而晚期流產原因為子宮解剖結構異常、自身免疫異常等，但據統計可識別其病因的僅占52%，因此明確檢測復發性流產發生的原因對降低發病率、改善患者預后至關表3 不明原因復發性流產與MTHFR基因多態性及紅細胞葉酸、血清葉酸、維生素B12的相關性重要[5]。

鄭文霞等[6]研究發現，正常妊娠孕婦膳食葉酸攝入量與血漿5- 甲基四氫葉酸水平呈正相關，而不明原因復發性流產組患者要達到指定的血漿5- 甲基四氫葉酸水平，需攝入更多的葉酸。本研究結果中，與對照組比，試驗組患者血清葉酸水平明顯升高，而血清紅細胞葉酸、維生素B12水平明顯降低，且原因不明復發性流產與血清葉酸水平呈正相關，與紅細胞葉酸水平及血清維生素B12水平呈負相關，提示葉酸與不明原因復發性流產有著密切聯系，血清中葉酸水平是復發性流產的危險因素，于圍孕期給予患者補充葉酸，可降低其流產的發生率。

人體中MTHFR可參與葉酸的轉運和代謝過程，在不明原因復發性流產中具有多態性，MTHFR基因C677T位點CC型基因增加可降低其酶活性，因此可導致葉酸代謝異常，從而增加流產的發生風險[7]。吳喆[8]研究發現，受檢者妊娠前進行MTHFR C677T位點多態性的檢測，并根據基因型有針對性地增加葉酸的補充，可有效避免治療的盲目性，對于預防不明原因復發性流產再次發生具有重要意義。本研究中，與對照組比，試驗組患者MTHFR基因C677T位點CC型基因頻率升高，而CT、TT型基因頻率降低，且不明原因復發性流產與MTHFR基因C677T位點CT、TT型基因頻率呈負相關，表明MTHFR基因C677T位點基因突變是不明原因復發性流產發病的危險因素。

綜上，血清葉酸水平及MTHFR基因C677T位點基因突變是不明原因的復發性流產發病的主要因素，可作為預測不明原因復發性流產的生物學指標，為降低復發性流產的發生率，可指導攜帶相關基因受檢者補充葉酸等。