淺談溫度對蠟樣芽胞桿菌產生蛋白質毒素結晶的影響

張慧珍 王丹 馬盼

摘要：蠟樣芽胞桿菌是一種條件致病菌，該菌生長的最適溫度為28℃～37℃，其繁殖體較耐熱，需100℃×20分鐘才被殺死，其芽胞可耐受100℃×30分鐘或干熱120℃×60分鐘才能被殺死，這也是它不同于其他食源性致病菌的重要特征。蠟樣芽胞桿菌的檢驗原理為根據其在特定培養基上特定的生長、形態和生理生化特征，首先將蠟樣芽胞桿菌培養物均勻分散在稀釋液中，再將稀釋液涂布在MYP瓊脂平板上30℃培養24小時后，挑取典型菌落在營養瓊脂上純培養;隨后接種于硫酸錳營養瓊脂平板上，不同溫度培養24 h后，分別將平板放入不同溫度的培養箱中，同一時間觀察蛋白質毒素結晶的產生情況，從而對蠟樣芽胞桿菌的生長有更深入的了解。

一、試驗方法：

1、菌液制備：接種蠟樣芽胞桿菌的凍存菌種至營養肉湯培養基中活化培養24h后，將上述培養物用0.85%的無菌生理鹽水分別制成含菌量為104～105CFU/mL的菌懸液。

2、樣品檢測：按照GB 4789.14-2014的檢驗流程進行試驗。

3、將經過營養瓊脂純培養的蠟樣芽胞桿菌分別接種于硫酸錳營養瓊脂平板上，具體試驗方案[2][3][4]如下：

將硫酸錳平板按照檢測方法培養相應的時間，分別放入培養箱培養。

4、實驗結果：

5、結果分析：

蠟樣芽胞桿菌生長的最適溫度為28℃～37℃，在第一次培養溫度是25℃時，分別在第二次培養30℃和 36℃第二天時出現大量的游離芽孢和蛋白質結晶體，說明在此溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養物質匱乏時產生較多的蛋白質結晶體。

在第一次培養溫度是30℃時，在第二次培養30℃第二天時出現大量游離芽孢和蛋白質結晶體，說明在此溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養物質匱乏時產生較多的蛋白質結晶體。

在第一次培養溫度是36℃時，在第二次培養25℃和 30℃第二天時出現大量的游離芽孢，但在25℃時產生的蛋白質結晶體較少，說明在30℃溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養物質匱乏時產生較多的蛋白質結晶體。

實驗結論

通過實驗數據可看出，在該菌的適宜生長為溫度范圍內，適當調整兩次培養溫度的溫度差，有利于在較短時間內產生大量的游離芽孢和蛋白質結晶體，從而達到縮短實驗時間的效果，提高檢測效率。

參考文獻：

[1]GB 4789.14-2014， 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 蠟樣芽胞桿菌檢驗[S].

[2]劉芳，羅臻，黃靜敏，蘭全學.致病性蠟樣芽胞桿菌的研究進展[J].檢驗檢疫學刊，2016，26（01）：68-71.

[3]洪程基.蠟樣芽胞桿菌檢驗及方法探討[J].中國衛生檢驗雜志，2006（04）：484-485.

[4]李玲. 蠟樣芽孢桿菌培養條件優化及動力學研究[D].南京大學，2011.

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