高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中的有效成分

韓中祥

摘要：探究阿莫西林膠囊中的有效成分。方法：采用高效液相色譜法測定檢測阿莫西林膠囊中的有效成分。結(jié)果：高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中成分精密度良好，且有關(guān)物質(zhì)準確度高。雜質(zhì)對照品混合溶液，室溫放置4h時，雜質(zhì)D，E峰面積偏差不穩(wěn)定，低溫12h內(nèi)，阿莫西林及各雜質(zhì)峰面積偏差穩(wěn)定。各成分峰面積與濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。結(jié)論：高效液相色譜法專屬性強、靈敏度高、準確度和重復性好，可用于檢剛阿莫西林膠囊中有關(guān)物質(zhì)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;阿莫西林;有效成分

阿莫西林為聲內(nèi)酞胺類抗菌藥物，臨床上廣泛應用于革蘭陰性菌、革蘭陽性菌等所致的感染性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病及泌尿系統(tǒng)疾病。該產(chǎn)品中的雜質(zhì)種類比較多，為了減少醫(yī)療中的不良反應，必須對其雜質(zhì)進行控制。阿莫西林原料、阿莫西林注射劑、阿莫西林顆粒[s]中的雜質(zhì)研究已有文獻報道。本文采用高效液相色譜法測定測定阿莫西林膠囊中的有效成分。

1儀器與方法

1.1儀器與試劑

數(shù)控超聲波清洗機購自東莞市科橋超聲波設(shè)備有限公司，萬能高速粉碎機購自上海安亭科學儀器廠，紫外可見光譜儀購自SHIMADZU公司。其中，所用藥物主要為阿莫西林膠囊，在應用之前，通過了國家的藥品質(zhì)量檢測。取阿莫西林膠囊100g，讓其置入50ml的燒杯中進行溶解，搖勻，作為實驗的儲備液，需要注意的是，要保證儲備液的相對濃度達到相應的標準。另外，還需要采用阿莫西林的膠囊，藥品的批號和規(guī)格等都符合藥品監(jiān)督總局的規(guī)定;最后需要高錳酸鉀、硫酸、鹽酸以及硝酸等成分;除此之外，還需要準備蒸餾水。

1.2分析步驟

（1）制備對照品溶液：①稱取適量阿莫西林，置于容量瓶中并加入25m L甲醇搖勻，配制成對照品母液，標好編號。②在10mL容量瓶中，分別加入母液0.5mL、3mL、2mL、1.5mL、2mL、1mL，制成混合對照品溶液。③量取混合對照品溶液1mL，于2 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過 0.22μm 微孔濾膜，得到對照品溶液。

（2）制備供試品溶液：①精確稱取樣阿莫西林0.1 g，加入錐形瓶中，再加入25mL甲醇，稱重。②超聲波處理30min，冷卻后稱重，用甲醇補足減失重量，搖勻并過濾。③在25mL容量瓶中加入10 mL過濾液，甲醇定容，搖勻，過0.22μm 微孔濾膜，得到供試品溶液。

（3）色譜測定：用色譜儀測量樣品含量，檢測波長239，440 nm;流速0.2mL/min;柱溫為30℃;進樣量2μL。得到混合對照品和樣品UPLC色譜圖。

2結(jié)果

該試驗表明本品在各降解條件下，各檢測溶液中主峰峰純度匹配指數(shù)均大于980，符合要求。物料回收率均在90%一110%，物料守恒。精密量取10μL，注人液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，記錄各雜質(zhì)的保留時間和峰面積，并計算RSD。各雜質(zhì)峰面積的RSD均<5.0%，保留時間的RSD均&lt;1.0%，表明該方法精密度良好。

以25μg/mL的雜質(zhì)對照品混合溶液為儲備液，分別精密量取該儲備液0.25， 0.5， 1.0， 2.5， 4.0， 5.0mL于10 mL量瓶，稀釋至刻度作為線性溶液1-6，該儲備液為線性溶液7，分別取各線性溶液注人液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，各成分峰面積與濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系.

室溫條件下，與0 min相比，供試品溶液在室溫環(huán)境中放置2h時，雜質(zhì)D峰面積的相對平均偏差為35.6%，雜質(zhì)C峰面積的RD為51.4%，均>20%，已不穩(wěn)定;低溫6h內(nèi)，供試品溶液中各雜質(zhì)及單雜、總雜峰面積的RD均<20%;因此有關(guān)物質(zhì)檢測時供試品溶液應臨用前新鮮配制或低溫放置40C， 6h內(nèi)。雜質(zhì)對照品混合溶液，室溫放置4h時，雜質(zhì)D，E峰面積偏差分別為2.8%，5.3%，均>2%，不穩(wěn)定;低溫12h內(nèi)，阿莫西林及各雜質(zhì)峰面積偏差。均<2%，穩(wěn)定。

取12.5mg樣品置10 mL量瓶中，分別加入4， 5， 6mL25μg/mL的雜質(zhì)混合儲備液，再分別以空白溶劑定容，分別作為80%，100% ，120%的加標回收率溶液，每份回收率溶液平行配制3份。結(jié)果各濃度下各雜質(zhì)的回收率均在90%-108% ， RSD均小于10%，說明此方法檢測阿莫西林有關(guān)物質(zhì)準確度高。

討論

通過高效液相色譜法檢測阿莫西林原料藥有關(guān)物質(zhì)，方法學研究表明，該法專屬性強、靈敏度高、耐用性強、重復性與精密度好，采用加校正因子的阿莫西林對照品法可準確測定阿莫西林膠囊中的各特定雜質(zhì)含量。

作為光譜抗生素藥物的一種，臨床上阿莫西林被廣泛應用，其又名為羥氨芐青霉素，屬β-內(nèi)酰胺青霉素類抗生素。阿莫西林殺菌作用強，穿透細胞壁的能力也強。口服后藥物分子中的內(nèi)酰胺基立即水解生成肽鍵，迅速和菌體內(nèi)的轉(zhuǎn)肽酶結(jié)合使之失活，切斷了菌體依靠轉(zhuǎn)肽酶合成糖肽用來建造細胞壁的唯一途徑，使細菌細胞迅速成為球形體而破裂溶解，菌體終于因細胞壁損水份不斷滲透而脹裂死亡。

作為阿莫西林研究的一個重要方面，阿莫西林制劑的含量的測定方法一直備受關(guān)注。阿莫西林是抗生素類藥物，是一種新型的廣譜半合成青霉素，主要用于敏感菌所致的呼吸道、尿路和皮膚軟組織感染的治療，其殺菌作用優(yōu)于氨芐西林。阿莫西林現(xiàn)有的測定方法主要有吸光光度法、比色法、熒光法、高效液相色譜法、原子吸收光譜法等。這些方法有的靈敏度低，線性范圍窄，有的操作繁瑣。本研究通過高效液相色譜法測定阿莫西林克膠囊中的有關(guān)物質(zhì)，方法學驗證實驗表明，采用自身對照法測定雜質(zhì)含量，能很好地控制本品中的雜質(zhì)限度，即采用自身對照法測定本品雜質(zhì)含量的方法是可行的，且專屬性強、靈敏度高、準確度和重復性較好。

參考文獻：

[1]宋建建. 論高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊的溶出度[J]. 中國中醫(yī)藥咨訊， 2011（12）.

[2]王娜， 李園園， 周東東，等. 高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中的有關(guān)物質(zhì)[J]. 中南藥學， 2020（6）.

[3]苗翠梅， 孟秀霞， 呂曉倩，等. 高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊的溶出度[J]. 煤炭與化工， 2011（2）.

[4]劉燕韶， 黃潔紅. HPLC法測定復方阿莫西林膠囊中的阿莫西林和甲氧芐啶的含量[J]. 中國基層醫(yī)藥， 2003（4）.

[5]張美怡， 林祖文， 張俊芳. HPLC法測定阿莫西林膠囊的含量不確定度分析[J]. 中國藥師， 2009（08）.

（灌南縣藥品檢驗所?江蘇連云港?223500）