高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中的有效成分

韓中祥

摘要：探究阿莫西林膠囊中的有效成分。方法：采用高效液相色譜法測定檢測阿莫西林膠囊中的有效成分。結(jié)果：高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中成分精密度良好，且有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)確度高。雜質(zhì)對照品混合溶液，室溫放置4h時，雜質(zhì)D，E峰面積偏差不穩(wěn)定，低溫12h內(nèi)，阿莫西林及各雜質(zhì)峰面積偏差穩(wěn)定。各成分峰面積與濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。結(jié)論：高效液相色譜法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度和重復(fù)性好，可用于檢剛阿莫西林膠囊中有關(guān)物質(zhì)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;阿莫西林;有效成分

阿莫西林為聲內(nèi)酞胺類抗菌藥物，臨床上廣泛應(yīng)用于革蘭陰性菌、革蘭陽性菌等所致的感染性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病及泌尿系統(tǒng)疾病。該產(chǎn)品中的雜質(zhì)種類比較多，為了減少醫(yī)療中的不良反應(yīng)，必須對其雜質(zhì)進(jìn)行控制。阿莫西林原料、阿莫西林注射劑、阿莫西林顆粒[s]中的雜質(zhì)研究已有文獻(xiàn)報道。本文采用高效液相色譜法測定測定阿莫西林膠囊中的有效成分。

1儀器與方法

1.1儀器與試劑

數(shù)控超聲波清洗機(jī)購自東莞市科橋超聲波設(shè)備有限公司，萬能高速粉碎機(jī)購自上海安亭科學(xué)儀器廠，紫外可見光譜儀購自SHIMADZU公司。其中，所用藥物主要為阿莫西林膠囊，在應(yīng)用之前，通過了國家的藥品質(zhì)量檢測。取阿莫西林膠囊100g，讓其置入50ml的燒杯中進(jìn)行溶解，搖勻，作為實驗的儲備液，需要注意的是，要保證儲備液的相對濃度達(dá)到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。另外，還需要采用阿莫西林的膠囊，藥品的批號和規(guī)格等都符合藥品監(jiān)督總局的規(guī)定;最后需要高錳酸鉀、硫酸、鹽酸以及硝酸等成分;除此之外，還需要準(zhǔn)備蒸餾水。

1.2分析步驟

（1）制備對照品溶液：①稱取適量阿莫西林，置于容量瓶中并加入25m L甲醇搖勻，配制成對照品母液，標(biāo)好編號。②在10mL容量瓶中，分別加入母液0.5mL、3mL、2mL、1.5mL、2mL、1mL，制成混合對照品溶液。③量取混合對照品溶液1mL，于2 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過 0.22μm 微孔濾膜，得到對照品溶液。

（2）制備供試品溶液：①精確稱取樣阿莫西林0.1 g，加入錐形瓶中，再加入25mL甲醇，稱重。②超聲波處理30min，冷卻后稱重，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻并過濾。③在25mL容量瓶中加入10 mL過濾液，甲醇定容，搖勻，過0.22μm 微孔濾膜，得到供試品溶液。

（3）色譜測定：用色譜儀測量樣品含量，檢測波長239，440 nm;流速0.2mL/min;柱溫為30℃;進(jìn)樣量2μL。得到混合對照品和樣品UPLC色譜圖。

2結(jié)果

該試驗表明本品在各降解條件下，各檢測溶液中主峰峰純度匹配指數(shù)均大于980，符合要求。物料回收率均在90%一110%，物料守恒。精密量取10μL，注人液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各雜質(zhì)的保留時間和峰面積，并計算RSD。各雜質(zhì)峰面積的RSD均<5.0%，保留時間的RSD均&lt;1.0%，表明該方法精密度良好。

以25μg/mL的雜質(zhì)對照品混合溶液為儲備液，分別精密量取該儲備液0.25， 0.5， 1.0， 2.5， 4.0， 5.0mL于10 mL量瓶，稀釋至刻度作為線性溶液1-6，該儲備液為線性溶液7，分別取各線性溶液注人液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，各成分峰面積與濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系.

室溫條件下，與0 min相比，供試品溶液在室溫環(huán)境中放置2h時，雜質(zhì)D峰面積的相對平均偏差為35.6%，雜質(zhì)C峰面積的RD為51.4%，均>20%，已不穩(wěn)定;低溫6h內(nèi)，供試品溶液中各雜質(zhì)及單雜、總雜峰面積的RD均<20%;因此有關(guān)物質(zhì)檢測時供試品溶液應(yīng)臨用前新鮮配制或低溫放置40C， 6h內(nèi)。雜質(zhì)對照品混合溶液，室溫放置4h時，雜質(zhì)D，E峰面積偏差分別為2.8%，5.3%，均>2%，不穩(wěn)定;低溫12h內(nèi)，阿莫西林及各雜質(zhì)峰面積偏差。均<2%，穩(wěn)定。

取12.5mg樣品置10 mL量瓶中，分別加入4， 5， 6mL25μg/mL的雜質(zhì)混合儲備液，再分別以空白溶劑定容，分別作為80%，100% ，120%的加標(biāo)回收率溶液，每份回收率溶液平行配制3份。結(jié)果各濃度下各雜質(zhì)的回收率均在90%-108% ， RSD均小于10%，說明此方法檢測阿莫西林有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)確度高。

討論

通過高效液相色譜法檢測阿莫西林原料藥有關(guān)物質(zhì)，方法學(xué)研究表明，該法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、耐用性強(qiáng)、重復(fù)性與精密度好，采用加校正因子的阿莫西林對照品法可準(zhǔn)確測定阿莫西林膠囊中的各特定雜質(zhì)含量。

作為光譜抗生素藥物的一種，臨床上阿莫西林被廣泛應(yīng)用，其又名為羥氨芐青霉素，屬β-內(nèi)酰胺青霉素類抗生素。阿莫西林殺菌作用強(qiáng)，穿透細(xì)胞壁的能力也強(qiáng)。口服后藥物分子中的內(nèi)酰胺基立即水解生成肽鍵，迅速和菌體內(nèi)的轉(zhuǎn)肽酶結(jié)合使之失活，切斷了菌體依靠轉(zhuǎn)肽酶合成糖肽用來建造細(xì)胞壁的唯一途徑，使細(xì)菌細(xì)胞迅速成為球形體而破裂溶解，菌體終于因細(xì)胞壁損水份不斷滲透而脹裂死亡。

作為阿莫西林研究的一個重要方面，阿莫西林制劑的含量的測定方法一直備受關(guān)注。阿莫西林是抗生素類藥物，是一種新型的廣譜半合成青霉素，主要用于敏感菌所致的呼吸道、尿路和皮膚軟組織感染的治療，其殺菌作用優(yōu)于氨芐西林。阿莫西林現(xiàn)有的測定方法主要有吸光光度法、比色法、熒光法、高效液相色譜法、原子吸收光譜法等。這些方法有的靈敏度低，線性范圍窄，有的操作繁瑣。本研究通過高效液相色譜法測定阿莫西林克膠囊中的有關(guān)物質(zhì)，方法學(xué)驗證實驗表明，采用自身對照法測定雜質(zhì)含量，能很好地控制本品中的雜質(zhì)限度，即采用自身對照法測定本品雜質(zhì)含量的方法是可行的，且專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度和重復(fù)性較好。

參考文獻(xiàn)：

[1]宋建建. 論高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊的溶出度[J]. 中國中醫(yī)藥咨訊， 2011（12）.

[2]王娜， 李園園， 周東東，等. 高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊中的有關(guān)物質(zhì)[J]. 中南藥學(xué)， 2020（6）.

[3]苗翠梅， 孟秀霞， 呂曉倩，等. 高效液相色譜法測定阿莫西林膠囊的溶出度[J]. 煤炭與化工， 2011（2）.

[4]劉燕韶， 黃潔紅. HPLC法測定復(fù)方阿莫西林膠囊中的阿莫西林和甲氧芐啶的含量[J]. 中國基層醫(yī)藥， 2003（4）.

[5]張美怡， 林祖文， 張俊芳. HPLC法測定阿莫西林膠囊的含量不確定度分析[J]. 中國藥師， 2009（08）.

（灌南縣藥品檢驗所?江蘇連云港?223500）