植物內生菌中抗耐藥微生物活性成分的研究進展

王楠 蘇譽 劉文杰 封明 毛瑜 張新國

（蘭州理工大學生命科學與工程學院 甘肅省中藏藥篩選評價及深加工重點實驗室，蘭州 730050）

抗生素是應對各類細菌感染性疾病的重要藥物，但隨著抗生素的日益廣泛應用，尤其是不合理應用甚至濫用，由此而引發的細菌耐藥性正在逐年增多。據世界衛生組織（world health organization，WHO）最新的統計數據顯示，有70萬人死于抗生素耐藥。其中針對耐藥結核病的調查顯示，有55.8萬例是對利福平耐藥的新病例，其中46萬例是耐多藥的［1］。抗生素耐藥性已經成為嚴重威脅公共健康、經濟增長和全球經濟穩定的重大問題。2016年于杭州召開的20國集團領導人峰會上，應對抗生素耐藥性問題被寫入峰會公報，呼吁國際社會共同面對日益嚴重的耐藥性問題［2］。2020年5月，WHO、聯合國糧食及農業組織和世界動物衛生組織召開會議，決定將“抗菌藥物”名稱改為“抗微生物藥物”，并將每年11月的第三周定為“世界提高抗微生物藥物認識周”，要求世界領導人聯手抗擊不斷加劇的抗微生物藥物耐藥性危機［3］。

抗生素耐藥儼然已經是我國和全世界都難以回避的嚴重問題。預防和減少抗生素耐藥性，除了積極合理的正確使用抗生素，防止抗生素濫用，更深入地了解耐藥機制，加快研究開發新型抗耐藥微生物藥物是解決該問題的關鍵。微生物分布廣泛，其復雜多樣的次級代謝產物是抗生素發現的重要資源，在過去的很長一段時間內，土壤微生物在抗生素開發過程中長期扮演著極其重要的角色。然而，隨著土壤微生物的廣泛運用，從土壤環境中發現新的抗微生物活性化合物越來越困難［4］。

植物內生菌，是指其生活史的一定階段或全部階段定殖于植物器官、組織內部以及細胞間隙的一類微生物，主要包括內生真菌、內生細菌和內生放線菌。作為一類亟待開發的重要微生物資源，不僅分布資源廣泛，種類繁多，絕大部分可產生與宿主植物相同或相似的次生代謝產物，而且這些次級代謝產物往往豐富多樣并具有多種生物活性，是尋找和開發新型先導化合物的重要資源［5］。研究顯示，植物內生菌不會對宿主植物引起明顯的病害癥狀，其與宿主之間存在著互惠互利的關系。一方面植物內生菌可以促進宿主植物生長，增強植物抗逆性；另一方面植物內生菌長期定殖在植物體內與其協同進化，其特有的代謝途徑使其次級代謝產物中能產生大量化學結構新穎、抑菌效果較好，或有特殊作用的生物活性物質，有利于開發新型抗生素和天然活性產物，是新藥及新的抗耐藥微生物藥物發現的良好資源［6-7］。事實上，這些化合物中的一些已被證明在新藥研發中起著非常重要的作用［8］?；诖?，本文就近年來植物內生菌次級代謝產物中具有抗耐藥微生物生物活性化合物的相關研究進行綜述，以期為該類藥物的研發提供參考。

1 細菌耐藥機制的研究進展

細菌耐藥性是造成抗生素治療細菌性感染失敗的主要原因之一，通過細菌耐藥性機理的研究將對創新抗耐藥微生物的藥物的研究提供重要的理論支撐，目前關于細菌耐藥機制的研究成果主要集中在以下幾個方面。

1.1 降低藥物與其靶標結合的親和力

降低藥物與其靶標結合的親和力是耐藥細菌應對抗生素治療的有效策略之一，耐藥細菌可以通過不同的方式來干擾抗生素與靶標的結合，從而使其對該抗生素產生耐藥性。研究顯示，耐藥微生物可以使編碼抗生素靶標的基因發生突變，導致其對抗生素產生耐藥性。耐萬古霉素腸球菌（vancomycin resistant Enterococcus，VRE）是腸球菌屬中引起醫院感染性疾病最常見的病原菌。唐曼娟等［9］在對VRE菌株的研究發現，編碼Ⅱ型拓撲異構酶（藥物靶位）的基因gyrA、gyrB、parC和parE的突變會導致腸球菌對喹諾酮類藥物呈現高水平耐藥，且突變主要發生在gyrA基因的83位和parC基因的80位。進一步的研究證實，環丙沙星對其中僅攜帶有parC單位點突變的菌株的治療效果降低，MIC值范圍為8-16 μg/mL，而對同時攜帶有gyrA和parC雙位點突變的菌株環丙沙星的治療效果變得更差，相應MIC值范圍為32-128 μg/mL，為前者的4-16倍。

其次也有研究顯示，耐藥微生物可以通過對抗生素靶標的修飾導致其對抗生素產生耐藥性。鏈陽性菌素B是臨床用于治療革蘭氏陽性細菌感染的大環內酯類抗生素。程長偉等［10］在對該類抗生素具有高水平耐藥性的鏈球菌S. gallolyticus subsp. pasteurianus的研究發現，由耐藥基因ermB和ermT編碼的甲基轉移酶對該鏈球菌23S rRNA進行了甲基化修飾，這一結構修飾降低了該藥物靶點與大環內酯類抗生素的結合，從而使細菌獲得耐藥性。

此外，細菌還可以通過編碼不與抗微生物藥物結合的靶標同源物基因來應對抗微生物藥物的治療作用。李雪寒等［11］的研究表明，除染色體編碼的青霉素結合蛋白（penicillin binding protein，PBP）之 外，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）中的mecA基因能夠編碼產生新的青霉素結合蛋白PBP2a。盡管PBP受β-內酰胺類抗生素的抑制，但PBP2a對β-內酰胺類抗生素同時具有抑制作用，仍可進行細胞壁合成，導致MRSA產生對β-內酰胺類抗生素的高度耐藥性。

1.2 破壞或改變抗生素的活性結構

為了抵御抗生素的治療作用，耐藥微生物能合成對抗生素產生降解作用或者對抗生素進行化學結構修飾的酶來致使藥物失活及鈍化，從而使該細菌對抗生素產生耐藥性［12］。β-內酰胺類抗生素是目前臨床應用最廣泛的一類抗生素，研究發現隨著其廣泛使用，耐藥性肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等致病菌均會產生能夠破壞該類抗生素β-內酰胺環的β-內酰胺酶而產生耐藥［13］。除此之外，還有與大環內酯類藥物耐藥性有關的大環內酯酶等，也能破壞抗生素的活性結構，一些腸桿菌科細菌如大腸桿菌可以通過產生相應的紅霉素酯酶來破環大環內酯類抗生素的內酯環，從而獲得耐藥性。另外，對耐藥微生物而言，同樣來自抗生素耐藥性酶家族的各類基團轉移酶也發揮著重要作用。這些酶通過共價修飾來改變抗生素的活性結構，從而使其喪失與靶點的結合能力。主要的結構改變包括：O-乙?；蚇-乙?；-磷酸化、O-核苷酸化、O-核糖基化、O-糖基化及巰基轉移等［14］。

1.3 主動外排系統的過表達

由細菌外排泵介導的對抗生素的外排作用是細菌多重耐藥的重要機制之一，細菌的外排泵是存在于細菌胞膜上的一類膜轉運蛋白，該系統可以非選擇性的將藥物泵出胞外，從而使細菌體內藥物濃度降低而導致耐藥性［15］。越來越多地研究發現多藥外排泵的過表達與細菌的耐藥性有關。吳偉清等［16］的研究發現，對碳青霉烯類藥物亞胺培南耐藥的鮑曼不動桿菌，其耐藥性與外排泵基因過度表達密切相關。加入外排泵抑制劑羰基氰氯苯腙（carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone，CCCP）后，耐藥鮑曼不動桿菌對亞胺培南的MIC比不加入CCCP的MIC值下降4倍及以上，且聚合酶鏈反應（PCR）擴增結果顯示，有76.6%的耐藥鮑曼不動桿菌攜帶外排泵adeB基因，有58.6%攜帶外排泵adeJ基因。趙娜等［17］報告指出，耐藥分枝桿菌中存在藥物主動外排泵的表達，作為一種重要耐藥機制，耐藥微生物表達的外排泵蛋白可以轉出氟喹諾酮類、氨基糖苷類、四環素類藥物及其他化合物，從而產生廣泛的耐藥性。

1.4 生物膜的形成

生物膜是微生物在生長過程中由微生物的細胞及其分泌的聚合物所組成的多細胞復合體，由多種有機物組成，主要成分是多糖和蛋白質［18］。有研究報道細菌的耐藥性與其生物膜密切相關［19］。趙芝靜等［20］對銅綠假單胞菌生物膜進行研究的結果表明，該菌表面會形成主要由藻酸鹽聚集而成的有一定厚度的生物膜，藻酸鹽不僅可與大量抗生素分子相結合，也可結合抗生素水解酶，從而導致大量抗生素尚未進入膜內即被滅活。而且研究還顯示，生物膜通透性的變化可以減少抗生素進入膜內，使膜內細菌有足夠時間開啟抗生素耐藥基因，顯示高度耐藥性。進一步對生物膜結構和代謝復雜性的研究顯示，生物膜不僅能為細菌提供營養和信息交流，而且能為細菌長期持留于宿主體內、逃避免疫系統及抗生素殺傷提供生長的環境［21］，而且在多個耐藥微生物如銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌和結核分枝桿菌等發現會形成生物膜，并且生物膜與其他耐藥機制共存，產生協同耐藥［22］。

1.5 細胞外膜通透性的改變

細胞外膜通透性的改變是細菌耐藥性產生的主要原因之一。耐藥微生物通過降低外膜通透性來阻止抗生素進入胞內，從而降低胞內藥物濃度導致耐藥。研究顯示，耐藥性銅綠假單胞菌細胞外膜上孔蛋白發生的改變會導致的外膜通透性的降低，從而導致細菌產生耐藥性［23］。梁宏潔等［24］的研究進一步證實，多重耐藥銅綠假單胞菌的耐藥性與編碼微孔蛋白（OprD2）的結構基因oprD的基因缺失突變有關，而OprD2能形成碳青霉烯類抗生素（美羅培南除外）進入細菌胞內的特異性通道，OprD2含量的減少甚至缺失使銅綠假單胞菌外膜通透性降低，從而導致耐藥性。

2 植物內生菌產生的抗耐藥微生物活性化合物及其進展

目前關于植物內生菌抗菌及抗耐藥微生物活性的研究正逐年增多。劉曉瑜等［25］從22種藥用植物組織中分離出197株內生菌，經篩選獲得18株對MRSA有拮抗作用的菌株，部分拮抗菌株的發酵液對MRSA有很好的抑制效果。李園園等［26］從貴州的5 種藥用植物（大黃、刺梨、杜仲、白芍和刺五加）中分離到46 株對耐藥大腸桿菌、耐藥金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌及白色鏈球菌等有不同程度的抗菌活性的植物內生菌，發掘了藥物植物內生菌中豐富多樣的抑制耐藥微生物的次級代謝產物資源。內生菌作為一個可再生的資源，已經成為了抗耐藥微生物活性化合物篩選重要的來源，本文就最近幾年有關植物內生菌中抗耐藥微生物活性代謝產物的研究進行匯總（表1）并分述如下。

表1 續表 Continued

表1 來自植物內生菌次級代謝產物中的抗耐藥微生物活性成分Table 1 Active compounds for anti-drug resistant microorganism from secondary metabolites of plant endophytes

2.1 肽類化合物

抗菌肽類化合物是一類由生物體產生的小分子陽離子型活性多肽，結構多樣且具有廣譜抗菌活性［27］。作為一種可從自然來源提取并用于對抗抗生素耐藥細菌的潛在候選物，抗菌肽類化合物引起了科學家們的廣泛關注［28］。該類化合物廣泛分布在動物、植物和昆蟲體內，其特殊的結構特性，尤其是植物內生菌源多肽類化合物作為抗耐藥微生物選擇，顯示出了極好的開發應用前景［29］。

內生菌作為抗菌活性物質發現的重要資源，有近70%的抗生素都來自于放線菌的次級代謝產物。內生放線菌是內生菌資源的重要組成部分，研究顯示內生放線菌因其在植物宿主中獨特的代謝途徑，可能會產生不同于土壤放線菌的抗生素，也是抗耐藥微生物藥物發現的潛在良好資源［30］。Castillo等［31］從澳大利亞北領地采集的藥用植物Kennedia nigriscans中分離到的內生放線菌Streptomyces sp. NRRL3052的次級代謝產物中得到具有廣泛抑菌活性的4種肽類化合物Munumbicins A、B、C和D。研究表明Munumbicins不僅對革蘭氏陽性細菌，如炭疽芽孢桿菌，肺炎鏈球菌等具有良好的抑制效果，而且對許多耐藥性細菌如結核分枝桿菌等也都具有強烈的抑菌活性。其中縮氨酸類化合物Munumbicins B對MRSA菌株的抑制作用最強（MIC值為2.5 μg/mL）。此外，分離自另一株內生放線菌Streptomyces sp. NRRL30562的化合物Munumbicins E-4和E-5，也顯示了對MRSA明顯的抑制作用，MIC值分別為8 μg/mL和16 μg/mL［32］。肽類化合物kakadumycin A是分離自鼠尾草Grevillea pteridifolia內生放線菌Streptomyces sp. NRRL 30566的次級代謝產物，與Munumbicins類化合物相比，該肽類化合物對耐藥微生物菌株MRSA具有更高的抑制活性（MIC值為0.5 μg/mL），且kakadumycin A對VRE菌株也具有強烈的抑制作用，MIC值為0.062 μg/mL［33］。此外，植物內生真菌被證明也能產生種類繁多的肽類抗生素。Singh等［34］從哥斯達黎加的冠卡斯特國家公園紐扣樹（buttonwood tree）的分支中分離到一株內生真菌Cytospora sp. CR200，進一步從其次級代謝產物中分離到5個八肽類化合物cytosporones A-E，其中化合物Cytosporone D和E對MRSA310、屎腸球菌α379、屎腸球菌α436等多株耐藥微生物都有抑制作用，其MIC值介于8-64 μg/mL，顯示了較好的體外抗菌活性。內生真菌Penicillium sp.0935030是從紅樹林植物鹵蕨Acrostichum aureurm中分離得到的，崔海濱等［35］在其發酵物中分離得到兩個具有抑耐藥微生物活性的環肽化合物，環（脯氨酸-蘇氨酸）和環 （脯氨酸-酪氨酸），抑菌活性測定結果顯示這兩個化合物對MRSA菌株有明顯的抑制活性，抑制范圍為9 mm，顯示了一定的潛在研究價值。

2.2 聚酮類化合物

聚酮類化合物數量龐大，包括四環類、大環內酯類、蒽醌類和聚醚類等化合物，是一大類結構和生物活性多樣的天然產物，具有抗感染、抗真菌、抗腫瘤等多種重要生物活性，目前，由植物內生菌產生的聚酮類化合物已經成為抗耐藥微生物研究的重要來源［36］。

化合物dothideomycetide A是由Senadeera等［37］從泰國藥用植物Tiliacora triandra內生真菌Dothideomycete sp.中分離到的一種新型的萜烯樣三環聚酮化合物。該化合物對于MRSA菌株顯示出一定的抗菌活性，MIC值為256 μg/mL。Shang等［38］從來自紅樹林植物Pongamia pinnata的內生菌Nigrospora sp. MA75中分離得到兩個聚酮類化合物griseophenone C和tetrahydrobostrycin，抑菌結果顯示，化合物griseophenone C和tetrahydrobostrycin對MRSA均表現出顯著的抑制活性，MIC值分別為0.5 μg/mL和2 μg/mL。Djinni等［39］從阿爾及利亞東北部Bejaia海岸線收集的海藻Fucus sp.中分離到的一株內生放線菌Streptomyces sp.WR1L1S8。在其代謝產物中獲得了一種聚酮化合物｛=2-hydroxy-5-［（6-hydroxy-4-oxo-4Hpyran-2-yl）methyl］-2-propylchroman-4-one｝，該聚酮化合物顯示出對MRSA的選擇性抑制活性，MIC值為6 μmol/L。氯化二苯甲酮抗生素Pestalone分離自巴哈馬群島褐藻Rosenvingea sp.內生真菌Pestalotia sp. 和單細胞海洋細菌CNJ-328的共培養物，Pestalone對MRSA和VRE均顯示出有效的抑菌活性，MIC 值分別為37 ng/mL和78 ng/mL［40］。Wang等［41］從桂皮Cinnamomum kanehirae內生真菌Fusarium oxyporum中分離到聚酮類化合物beauvericin和（-）-4，6'-脫水氨基哌啶酮，兩個化合物對MRSA活性的抗菌活性的MIC值分別為3.125和100 μg/mL，

其中beauvercin表現出較強的抗MRSA活性。此外，分離自紅樹林植物Rhizophora apiculataz內生真菌Phomopsis sp.PSU-MA214的四氫蒽醌衍生物phomopsanthraquinone也顯示出對金黃色葡萄球菌及MRSA一定的抑菌活性，MIC值為128 μg/mL和64 μg/mL［42］。Supong等［43］從水稻Oryza sativa L.中分離出內生放線菌Streptomyces sp. BCC72023中，并得到了3種大環內酯類化合物efomycin M、efomycin G和oxohygrolidin，所有化合物均顯示出對K-1多藥耐藥微生物株 Plasmodium falciparum良好的抑制活性（IC50值在1.40-5.23 μg/mL范圍內），且化合物efomycin G2對普通蠟狀芽孢桿菌也具有較強的抗菌活性，MIC值為3.13 μg/mL。

2.3 萜類化合物

萜類化合物是天然產物中數量較多的一類化合物，分布廣泛，結構多樣，具有多樣的生物學活性，主要具有抗菌、抗炎和抗腫瘤等活性，萜類化合物在藥物研究開發領域發揮著越來越重要的作用。Singh等［44］從哥斯達黎加瓜納卡斯特生長的Daphnopsis americana的植物中分離得到內生真菌CR115，研究發現其次級代謝產物中存在一種新穎的二萜類化合物guanacastepene A。與萬古霉素（對MRSA菌株的抑制范圍為17 mm，對VRE菌株沒有抑制活性）相比，該化合物對耐藥菌株MRSA和VRE顯示出良好的抑制作用（抑制范圍為7-10 mm和8 mm）。Gao等［45］從海洋紅藻物種Laurencia的內生菌Penicillium chrysogenum QEN-24S中分離到萜類化合物Conidiogenone B。抑菌活性測定結果顯示該化合物對MRSA具有顯著的抗菌活性，MIC為8 μg/mL。Wang等［46］從苔蘚Everniastrum sp.內生真菌Ulocladium sp. 次級代謝產物的丙酮提取物中分離出5種蛇孢菌素二倍半萜類化合物，其中萜類化合物Ophiobolin P和Ophiobolin T對MRSA具有中等的抗菌活性，MIC值分別為31.3 μg/mL和15.6 μg/mL。Ding等［47］從紅樹林 Kandelia candel 的內生鏈霉菌 Streptomyces sp. HKI0595 次級代謝產物中也分離到倍半萜類化合物xiamycin，在抑制MRSA菌株和VRE菌株的活性篩選中，與對照氯霉素相比（抑制范圍均為7 mm），xiamycin表現出較強的抑菌活性，抑制范圍分別為14 mm和12 mm。

2.4 多酚類化合物和有機酸類化合物

多酚類化合物是一類復雜的具有多個酚羥基的次生代謝產物，具有抗癌、抗衰老、抗炎、抗菌等生物活性。劉俊等［48］從貴州省道地藥材頭花蓼的莖中分離得到的細極鏈格孢菌屬內生真菌Alternaria tenuissima sp. PC-005，在其次級代謝產物中活性組分中分離到酚類化合物5-甲氧基格鏈孢酚，96孔板法抗菌活性測定結果顯示，該化合物對肺炎克雷伯桿菌、普通變形桿菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、奇異變形桿菌、屎腸球菌等7種耐藥微生物均具有良好的抑菌活性，MIC值分別為125、250、125、250、250、125和500 μg/mL。

有機酸是指廣泛存在于生物中的一類含有羧基的酸性有機化合物，在植物中根、莖、葉等各部位都有分布，種類繁多，生物活性豐富多樣，具有作為抗生素的潛力。劉俊等［49］從該植物內生真菌Gibberella intermedia次級代謝產物中分離到具有抗耐藥微生物活性的羧酸類活性化合物鐮霉菌酸，抑菌活性測定結果顯示，該化合物對多重耐藥大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和奇異變形桿菌具有抑制作用，MIC值分別為31.3、125、62.5 mg/mL。此外，化合物鐮霉菌酸還表現出逆轉其耐藥性的作用，在其1/8 MIC的濃度下，能使左氧氟沙星和環丙沙星對臨床耐藥大腸埃希菌的MIC分別降低4倍和2倍；在其1/4 MIC的濃度下，能使左氧氟沙星和環丙沙星對耐藥微生物奇異變形桿菌的MIC分別降低了2倍和4倍，且對臨床耐藥金黃色葡萄球菌的MIC值均降低了2倍。Klaiklay等［50］對紅樹林內生真菌Xylaria cubensis PSU-MA34代謝產物的研究發現，發酵液粗提物對金黃色葡萄球菌ATCC 25923和MRSA菌株的抗菌活性相同，MIC值均為200 μg/mL。在其次級代謝產物中分離得到的琥珀酸衍生物xylacinicacids A and B、2-hexylidene-3-methyl succinic acid 4-methylester、cytochalasin D及2-chloro-5-methoxy-3-methylcyclohexa-2，5-diene-1，4-dione等，均對金黃 色葡萄球菌ATCC 25923和MRSA有抑制作用， 其中化合物2-chloro-5-methoxy-3-methylcyclohexa-2，5-diene-1，4-dione對金黃色葡萄球菌和MRSA菌株的MIC值為128 μg/mL，顯示出一定的研究價值。

2.5 其他類有機化合物

Phongpaichit等［51］從泰國Garcinia mangostana葉中分離到內生真菌Matryephaeria mamane PSU- M76，在其次級代謝產物中分離到7種化合物。包括化合物botryomaman（一種新的二氫苯并呋喃衍生物）以及6種已知化合物2，4-二甲氧基-6-戊基苯酚、（R）-（-）-mellein、primin、順式4-羥基海藻油、反式-4-羥基海藻油和4，5二羥基-2-己烯酸。抗菌實驗測定結果顯示，所有化合物對MRSA菌株SK1均有抗菌活性。其中化合物 Primin表現出最好的抑制活性，MIC值為8 μg/mL。劉少偉等［52］從沙生植物檉柳中分離到鏈霉菌CLR304，其次級代謝產物304A為維吉尼霉素M1，該化合物對革蘭陽性菌顯示出較強抑制活性，如對耐甲氧西林表皮葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococus Epidermidis，MRSE）、MRSA、萬古霉素中度耐藥金黃色葡萄球菌（vancomycinintermediate S.aureus，VISA）、VRE，MIC值均在1-4 μg/mL范圍內。Gos等［53］從藥用植物Vochysia divergens中分離到內生放線菌Aeromicrobium ponti LGMB491，提取物顯示出對MRSA菌株良好的抑菌活性，MIC為0.04 μg/mL，進一步在其次級代謝產物中分離到6個具有抗菌活性的主要化合物，抑菌結果顯示，與甲氧西林相比（對甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitive Staphylococcus Aureus，MSSA）的抑制范圍為20 mm，對MRSA菌株無抑制活性），化合物1-acetylβ-carboline、indole-3-carbaldehyde、3-（hydroxyacetyl）-indole、brevianamide F、cyclo-（L-Pro-L-Phe） 對MSSA和MRSA均顯示中等抑制活性，其中對耐藥菌株MRSA的抑制范圍依次為15、9、8、9、9 mm。與此同時，Alshaibani等［54］評估了內生鏈霉菌streptomyces SUK 25乙酸乙酯提取物對于多種耐藥（multidrug resistance，MDR）細菌的生物活性，其中4種活性二酮哌嗪化合物cyclo-（L-Val-L-Pro）、cyclo-（L-Leu-L-Pro）、cyclo-（L-Phe-L-Pro）、cyclo-（L-Val-L-Phe）和一種乙酰胺衍生物N-（7-hydroxy-6-methyl-octyl）-acetamide，對MRSA菌株ATCC 43300均有良好的抑制活性；其中cyclo-（L-Leu-L-Pro）對VRE菌株，如糞腸球菌K-99-34、糞腸球菌K-00-184和糞腸球菌K-00- 221具有抑制作用，MIC值為12.5 μg/mL。此外，學者Thi 等［55］從決明子中分離到內生放線菌Streptomyces cavourensis subsp.YBQ59，從其發酵液的乙酸乙酯提取物中分離到的8個次生代謝產物。其中化合物1-monolinolein、bafilomycin D、nonactic acid、daidzein和3'-hydroxydaidzein對MRSA菌株ATCC 33591和MRSE菌株ATCC 35984均顯示出抗菌活性，其中亞油酸甘油酯1-monolinolein表現出最強的作用，最低抑菌濃度分別為8.5和14.6 μg/mL。

3 展望

隨著抗生素廣泛應用而帶來的病原體對已知抗生素的抗性增加，以及MRSA，VRE，耐青霉素肺炎鏈球菌（penicillin resistant Streptococcus Pneumoniae，PRSP）等多重耐藥微生物的急劇增多，細菌耐藥性已經成為一個全世界需要努力協同解決的重大問題。2016年，國家衛健委與14部位聯合發布《遏制細菌耐藥國家行動計劃（2016-2020年）》，進行新抗耐藥微生物藥物的研究已經上升到國家意識，并正在被越來越多的學者所關注。植物內生菌作為一種新的亟待開發的微生物資源，其豐富的微生物多樣性和次級代謝產物多樣性為尋找新型的抗耐藥微生物活性物質提供了可能。正如上文所綜述的其中一些結構新穎肽、聚酮、萜類等化合物，已經顯示了良好的抗耐藥微生物活性和開發潛力。但是，以植物內生菌為資源的抗耐藥微生物藥物的發現，仍然還有很多瓶頸亟待解決，尤其面臨的一個重大挑戰在于如何建立有效的分離活性菌株的策略。因為基于海量豐富的的微生物資源，現有的常規培養基及分離方法已經很難滿足我們對活性菌株的尋找，如何模擬內生菌生長條件的原位培養策略以及對極端環境生存的內生菌的關注有望成為發現具有抗耐藥微生物活性菌株的可靠手段。此外，植物的選擇也是至關重要的，那些具有藥用特性的藥用植物應該優先考慮；而且有必要了解植物內生菌的生理生化特性及其在植物體內的防御作用和次生代謝產物的產生能力，這有利于活性化合物的尋找和開發。植物內生菌作為抗耐藥微生物創新藥發現的重要微生物資源，盡管已經顯示出了誘人的開發潛力，但是未來對其開發和利用還有很漫長的路要走。隨著人們對內生放線菌及其次級代謝產物活性物質研究的不斷深入，相信會有更多、活性更強的活性成分被發現，內生菌次級代謝產物活性成分的研究無疑將具有廣闊的應用前景。